DB13-T2422-2016-高山杜鵑工廠化育苗技術(shù)規(guī)程-河北省

ICS65.020.40DB13B62河北省地方標(biāo)準(zhǔn)DB13/T2422—2016高山杜鵑工廠化育苗技術(shù)規(guī)程河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB13/T2422—2016前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由石家莊市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：石家莊市農(nóng)林科學(xué)研究院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：蔣淑磊、李志斌、李國(guó)松、李振勤、白霄霞、徐立軍、邊光亞。IDB13/T2422—2016高山杜鵑工廠化育苗技術(shù)規(guī)程1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了高山杜鵑工廠化育苗生產(chǎn)的組織培養(yǎng)車(chē)間的設(shè)計(jì)、主要儀器設(shè)備、組培生產(chǎn)流程、煉苗移栽、質(zhì)量分級(jí)及包裝、標(biāo)志、運(yùn)輸?shù)葍?nèi)容。本標(biāo)準(zhǔn)適用于高山杜鵑工廠化繁育生產(chǎn)、管理的全過(guò)程。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T2306-2013花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程。3組培車(chē)間與育苗區(qū)設(shè)計(jì)設(shè)計(jì)要求3.1組培車(chē)間主要包括:洗滌室、藥品室（稱量室）、培養(yǎng)基配制室、滅菌室、培養(yǎng)基儲(chǔ)備室、接表1單位：m21DB13/T2422—2016表1不同規(guī)模的高山杜鵑組培車(chē)間與育苗區(qū)的面積要求（續(xù)）單位：m2面積指標(biāo)名稱年產(chǎn)5萬(wàn)株5～10年產(chǎn)10萬(wàn)株20～30年產(chǎn)20萬(wàn)株滅菌室培養(yǎng)基儲(chǔ)存室接種室20～3040～6010～1520～3020～2550～80100～120300～40040～50培養(yǎng)室60～80150～25020～30出苗室20～30育苗區(qū)750～90015～201500～200020～303000～350030～50煉苗室溫室大棚700～8001000～12002000～30004儀器設(shè)備及試劑所需的儀器設(shè)備及試劑主要包括：滅菌設(shè)備、接種設(shè)備、培養(yǎng)設(shè)備和組培常規(guī)試劑。不同規(guī)模高山杜鵑組培車(chē)間所需的儀器設(shè)備及試劑見(jiàn)表2。表2年產(chǎn)20萬(wàn)株滅菌設(shè)備、器械2DB13/T2422—2016表2不同規(guī)模高山杜鵑組培車(chē)間所需的儀器設(shè)備及試劑（續(xù)）數(shù)量指標(biāo)名稱年產(chǎn)5萬(wàn)株株年產(chǎn)10萬(wàn)株年產(chǎn)20萬(wàn)株組培專(zhuān)用托盤(pán)250mL培養(yǎng)瓶其它1500300060006萬(wàn)12萬(wàn)24萬(wàn)0.1mg/0～210g電子分析天平1115115111110.01g/0～6000g電子精密天平pH計(jì)11溫度計(jì)102203200L冰箱電磁爐22雙層小推車(chē)101201小型去離子水設(shè)備10-100L試劑WPM基本培養(yǎng)基組成成分試劑和植物生長(zhǎng)物質(zhì)玻璃器皿5選擇適應(yīng)性強(qiáng)，觀賞價(jià)值高的高山杜鵑品種，例如：粉金蝶（Rhododendronhybridscv'Cosmopolitan'），紅粉佳人（Rh.cv.NovaZembla），馬纓花（Rh.Fr）。將高山杜鵑母本植株種植在特定區(qū)域，加強(qiáng)肥水管理，防治和減少植株表面附帶的病蟲(chóng)害。培養(yǎng)基選擇與母液配制以WPM和1/2WPM為基本培養(yǎng)基。3DB13/T2422—2016表3WPM培養(yǎng)基母液配制母液體積稱取量配1升培養(yǎng)基吸取量（ml）種類(lèi)成分（ml）（mg）NH4NO3400013203700170040009000大量元素(NH4)2SO4MgSO4.7H2OKH2PO41000100KNO3K2SO4中量元素鎂MgSO4.7H2O3700CaCl2.9601000500100鈣Ca(NO3)2·4H2O5560螯合Na2-EDTA373027805鐵FeSO4.7H2O微量元素H3BO3310111512.51.25430MnSO4.H2O表42ip（異戊烯基腺嘌呤）4DB13/T2422—20165.3.25.3.35.4配制方法：先用少量0.1mol/L的NaOH溶解，然后加蒸餾水定容。保存要求：母液配制好后貼好標(biāo)簽，置于4℃左右的冰箱內(nèi)，保存期應(yīng)不超過(guò)2個(gè)月。培養(yǎng)基制作5.4.1制作取預(yù)配母液，加入激素，充分?jǐn)嚢杈鶆?，用去離子水定容1升，加入瓊脂6.5g/L，砂糖30g/L，加熱溶解。測(cè)pH值，用0.1mol/L的HCl或0.1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)pH值至5.4～5.6。5.4.2分裝根據(jù)不同需要定量分裝，一般要求占瓶20～25%的比例，分裝培養(yǎng)基時(shí)勿將培養(yǎng)基沾在培養(yǎng)瓶瓶口，蓋好瓶蓋。5.5高壓滅菌5.5.15.5.25.5.3分裝后的培養(yǎng)基應(yīng)在10h內(nèi)通過(guò)高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌，滅菌要求121℃滅菌20min。合格的滅菌培養(yǎng)基，應(yīng)注明滅菌日期，合格標(biāo)志。滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)注明培養(yǎng)基編號(hào)及配制日期。按培養(yǎng)基種類(lèi)和配制先后儲(chǔ)存于培養(yǎng)基儲(chǔ)藏室內(nèi)。為保證培養(yǎng)基質(zhì)量，將配制好的培養(yǎng)基放置5d左右觀察再用，且貯存時(shí)間不應(yīng)超過(guò)一個(gè)月。5.6外植體在超凈臺(tái)上將預(yù)處理后的外植體放入有蓋容器中，倒入75%酒精使之沒(méi)過(guò)外植體，并輕搖以除去氣泡，浸泡30s，倒去酒精，用無(wú)菌水沖洗外植體5次。倒入0.1%的HgCl2使之沒(méi)過(guò)外植體，根據(jù)外植體材料的質(zhì)量和大小，在HgCl2溶液中浸泡2min～3min，處理過(guò)程中不斷輕搖，將外植體表面的氣泡除去，滅菌結(jié)束后，倒出滅菌液，用無(wú)菌水沖洗3～5次后備用。初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為:WPM+2ip6.0mg/L+白砂糖30g/L+瓊脂6.5g/L，pH值調(diào)至5.4～5.6。5DB13/T2422—2016培養(yǎng)1周后，花托基部開(kāi)始膨大，培養(yǎng)6周后，長(zhǎng)出淡黃或淺綠光滑的愈傷組織塊，繼續(xù)轉(zhuǎn)接在WPM+2ip6.0mg/L+白砂糖30g/L+瓊脂6.5g/L培養(yǎng)，長(zhǎng)出叢生芽。5.9不定芽分化與增殖培養(yǎng)5.9.1不定芽分化與增殖培養(yǎng)基誘導(dǎo)不定芽分化與增殖的培養(yǎng)基配方:WPM+2ip2.0mg/L+NAA0.5mg/L+白砂30g/L+瓊脂6.5g/L，pH值調(diào)至5.4～5.6。5.9.2叢生芽切割5.9.2.1先打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，瓶口向內(nèi)，取出的叢生芽塊放于有無(wú)菌盤(pán)上切割；150mL的培養(yǎng)瓶的增殖培養(yǎng)切芽接種數(shù)量5塊/瓶。在瓶?jī)?nèi)排放均勻、整齊。5.9.2.2每取一叢生芽塊并完成切割和接種后，將接種盤(pán)連同切苗過(guò)程中的廢棄物放到一大接種盤(pán)內(nèi)，同時(shí)更換新的無(wú)菌接種盤(pán)。5.10組培苗生根將高度為2cm～3cm的叢生苗直接接種于生根培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基配方:1/2WPM+IBA4mg/L+IAA0.5mg/L+白砂糖30g/L+瓊脂6.5g/L，pH值調(diào)至5.4～5.6。在150mL的培養(yǎng)瓶接種數(shù)量8株/瓶。生根培養(yǎng)30d后，幼苗基部長(zhǎng)出4～7條新根，當(dāng)根長(zhǎng)到3cm～4cm長(zhǎng)時(shí)，就可進(jìn)行煉苗移栽。5.11污染防治6煉苗：將生根瓶苗從培養(yǎng)室中取出，置于煉苗室中進(jìn)行自然光適應(yīng)性鍛煉，溫度控制在20℃～從瓶中輕輕取出組培苗，放在室溫的溫水中，將附著在根上的培養(yǎng)基清洗掉，洗時(shí)注意不能傷根，將0.1mm～0.3mm的珍珠巖與草炭土按照1:3混合裝入穴盤(pán)中，用細(xì)眼噴壺將基質(zhì)噴濕，使基質(zhì)含水量達(dá)到60%左右。6DB13/T2422—20166.2.4噴水移栽后用細(xì)噴霧器噴水，沖洗葉片上可能粘著的基質(zhì)，并使根系和基質(zhì)緊密接觸。6.2.5插牌分品種、日期，插牌記錄。6.2.6移栽后的管理6.2.6.1保溫保濕用薄膜小拱棚保溫保濕，保持相對(duì)濕度在80%左右，溫度保持在18℃～22℃之間。薄膜小拱棚可適時(shí)通風(fēng)0.5h～1h。光照強(qiáng)度控制5000lux～10000lux，當(dāng)試管苗再生新根后可完全打開(kāi)薄膜小拱棚，自然光照強(qiáng)度，降低空氣濕度至60%左右。6.2.6.2施肥為使試管苗健壯，當(dāng)試管苗正常生長(zhǎng)后，可進(jìn)行葉面噴肥，噴施1/10MS培養(yǎng)基溶液加0.1%的H2PO4溶液。6.2.6.3病蟲(chóng)防治溫室使用前徹底消毒，用硫磺、百菌清煙霧劑熏蒸3-4次，溫室使用后經(jīng)常用福爾馬林、來(lái)蘇水消毒。加強(qiáng)通風(fēng)，每隔7d噴一次廣普性殺菌劑。一旦發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)害、病害及時(shí)藥物治療。7當(dāng)試管苗根系發(fā)達(dá)、植株健壯、葉片寬度達(dá)到10cm左右即可出苗，把穴盤(pán)苗裝在泡沫盒中，注意留有通氣孔。7DB13/T2422—2016附錄A（資料性附錄）組培污染防治A.1母瓶A.1.1母瓶檢查提取母瓶時(shí)要仔細(xì)檢查母瓶是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染母瓶應(yīng)立即剔除。A.1.2母瓶預(yù)處理按生產(chǎn)計(jì)劃提取母瓶，表面噴75%的酒精后，用無(wú)菌紗布擦凈，放于操作臺(tái)旁備用，接種過(guò)程中若發(fā)現(xiàn)母瓶污染則立即封口。A.2切割培養(yǎng)皿的取放用無(wú)菌鑷子從棉布包里取出接種盤(pán)放在超凈工作臺(tái)面上，應(yīng)注意手不能接觸盤(pán)的邊沿。A.3污染檢查A.3.1所有污染材料不應(yīng)在培養(yǎng)室、接種室及中央走廊內(nèi)開(kāi)啟瓶蓋并應(yīng)在發(fā)現(xiàn)當(dāng)天送到洗滌室。對(duì)細(xì)菌污染的生根瓶苗可轉(zhuǎn)移到煉苗室移栽。A.3.2對(duì)處理情況進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄和簡(jiǎn)要分析原因，并反饋給操作人員。培養(yǎng)室內(nèi)清潔、消毒每隔一周用紫外燈或臭氧發(fā)生器消毒30min。8DB13/T2422—2016附錄B（資料性附錄）組培苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)B.1整體感苗粗壯、葉片大小協(xié)調(diào)、有層次感、色澤正常，葉色具原品種特性，無(wú)玻璃化。B.2B.3B.4B.5B.6根系狀況有新鮮根系（一般3條以上），長(zhǎng)勢(shì)好、色白健壯，根長(zhǎng)適中，無(wú)愈傷組織。苗高苗高適中，一般4cm～6cm。葉片數(shù)具有適宜和正常的葉片數(shù)，一般不少于5片。整齊度同一批次90%以上的苗高達(dá)到要求的高度