《烤制貝類中雜環(huán)胺類物質(zhì)的檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》文本

1T/GXNSXXXX—XXXX烤制貝類中雜環(huán)胺類物質(zhì)的檢測(cè)技術(shù)規(guī)范本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了烤制貝類中的2-氨基-3-甲基咪唑并[4,5-f]喹啉（IQ）、2-氨基-3,4-二甲基-咪唑并[4,5-f]-喹啉（MeIQ）、2-氨基-1-甲基-6-苯基咪唑并[4,5-b]-吡啶（PhIP）、2-氨基-3,8-二甲基-咪唑并[4,5-?]-喹喔啉（8-MeIQx）、3-氨基-1，4-二甲基-5H-吡啶并[4,3-b]吲哚（Trp-P-1）、3-氨基-1-甲基-5H-吡啶并[4,3-b]吲哚（Trp-P-2）、2-氨基-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚（AαC）和2-氨基-3-甲基-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚（MeAαC）共8種常見雜環(huán)胺的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于烤制貝類（牡蠣、扇貝等）中IQ、MeIQ、PhIP、8-MeIQx、Trp-P-1、Trp-P-2，AαC和MeAαC的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3原理試樣采用氫氧化鈉/甲醇溶液提取，固相萃取柱凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)，內(nèi)標(biāo)法定量。4試劑材料除非另有說明，所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。試劑和材料4.1試劑要求4.1.1氫氧化鈉：純度>97%4.1.2乙酸銨：純度≥98%。4.1.3甲醇：色譜純。4.1.4氯化鈉：純度>97%。4.1.5乙腈：色譜純。4.1.6乙酸：色譜純。4.1.7甲酸銨：色譜級(jí)。4.1.8微孔濾膜：0.22μm，有機(jī)系。T/GXNSXXXX—XXXX24.2試劑配制4.2.1氫氧化鈉溶液（40g/L）：稱取氫氧化鈉40.0g，用水溶解并定容至1L。4.2.2氫氧化鈉溶液（4g/L量取40g/L氫氧化鈉溶液（3.2.1）50mL，加入水450mL，混合均勻。4.2.340g/L氫氧化鈉-甲醇混合溶液（70+30，體積比）：量取40g/L氫氧化鈉溶液70mL，加入甲醇30mL，混合均勻。4.2.44g/L氫氧化鈉-甲醇混合溶液（45+55，體積比）：量取4g/L氫氧化鈉溶液45mL，加入甲醇55mL，混合均勻。4.2.5乙醇-二氯甲烷混合溶液（10+90，體積比量取乙醇10mL，加入二氯甲烷90mL，混合均4.2.65%乙腈：量取乙腈5mL，加入水95mL，混合均勻。4.2.7乙酸-乙酸銨緩沖液：稱取乙酸銨1.155g，用水450mL溶解，用乙酸調(diào)pH至5.0±0.5，加水定容至500mL。4.2.8乙酸緩沖液-乙腈混合溶液(50+50，體積分?jǐn)?shù)）：量取乙酸-乙酸銨緩沖液（3.2.7）50mL，加入乙腈50mL，混合均勻。4.3標(biāo)準(zhǔn)品：見附錄A4.3.1內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)norharman-d7、MeIQx-d3，純度大于97%。4.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制4.4.1雜環(huán)胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：將IQ、MeIQ、PhIP、8-MeIQx、Trp-P-1、Trp-P-2，AαC和MeAαC，分別用甲醇（1000μg/mL）配制成濃度為1.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。-18℃避光保存，有效期1個(gè)月。4.4.2混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：用流動(dòng)相（含0.05%甲酸/乙腈的1mmol/L乙酸銨，95/5，v/v）新鮮制備濃度為0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10、20、50、100、200、500μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。所有混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液均含有20μg/LMeIQx-d3和norharman-d7內(nèi)標(biāo)液，現(xiàn)配現(xiàn)用。5儀器與設(shè)備5.1液相色譜串聯(lián)四極桿質(zhì)譜：配有電噴霧離子源。5.2電子天平:感量為0.01mg、1mg。5.3pH計(jì):感量為0.01。5.4高速離心機(jī)，轉(zhuǎn)速不低于10000r/min。5.5氮?dú)鉂饪s儀。5.6固相萃取裝置。5.7均質(zhì)器。5.8旋渦振蕩器。T/GXNSXXXX—XXXX35.90.22μm聚四氟乙烯（PTFE）過濾器。5.10色譜柱：ACQUITYUPLCHSST3(100mm×2.1mm，1.8μm)。注：此處列出的色譜柱僅供參考，不涉及商業(yè)目的，鼓勵(lì)標(biāo)準(zhǔn)使用者嘗試不同品牌不同廠家的色譜柱。6分析步驟6.1試樣制備新鮮貝類（牡蠣、扇貝等）經(jīng)烤制后，取可食部分，搗碎混勻，標(biāo)記后-18℃冷凍保存。6.2試樣處理準(zhǔn)確稱取2g（精確到0.01g）于50mL帶蓋離心管中，加入適量?jī)?nèi)標(biāo)工作液（4.4.2），加入40g/L氫氧化鈉-甲醇混合溶液10mL，均質(zhì)混勻。將混勻的樣品和均質(zhì)器洗滌液轉(zhuǎn)移至離心管中，于10000r/min離心15min，收集上層溶液。凈化：固相萃取柱依次用甲醇3mL、水3mL活化。將提取液分批加入萃取柱內(nèi)，棄去流出液后，用4g/L氫氧化鈉-甲醇混合溶液5mL清洗柱子后抽干，最后用乙醇-二氯甲烷混合溶液2mL洗脫，收集洗脫液，并在40℃水浴下氮?dú)鉂饪s至干，后用乙酸緩沖液-乙腈混合溶液2mL，混勻后用微孔濾膜過濾至進(jìn)樣瓶，待上機(jī)測(cè)定。測(cè)定。6.2.1液相色譜條件6.2.1.1色譜柱：ACQUITYUPLCHSST3(100mm×2.1mm，1.8μm)。6.2.1.2流動(dòng)相：A：5mmol/L乙酸銨溶液；B：乙腈。6.2.1.3流速：0.2mL/min。梯度洗脫程序見表1。6.2.1.4柱溫：35℃。6.2.1.5進(jìn)樣量：5μL。表1流動(dòng)相梯度洗脫程序0006.2.2質(zhì)譜條件6.2.2.1電離方式：電噴霧電離正離子模式（ESI+）。6.2.2.2掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM。T/GXNSXXXX—XXXX46.2.2.3其他質(zhì)譜條件見附錄B。鞘氣溫度和流速：250℃和11L/min。毛細(xì)管電壓：4000V。脫溶劑氣溫度：300℃。干燥氣流量：10L/min。其他參數(shù)見附表B.1。6.2.3液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定通過液相色譜將試樣溶液進(jìn)行分離后注入串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀中，得到相應(yīng)的保留時(shí)間及信號(hào)響應(yīng)值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到相應(yīng)目標(biāo)化合物的濃度。進(jìn)行樣品測(cè)定時(shí)，如果檢出的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)樣品一致，并且在扣除背景后的樣品譜圖中，各定性離子的相對(duì)豐度與濃度接近的同樣條件下得到的標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖相比，最大允許相對(duì)偏差不超過表2中規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在對(duì)應(yīng)的待測(cè)物。在上述儀器條件下，標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖參見附表2定性時(shí)相對(duì)離子豐度最大允許偏差值±20±30±50以雜環(huán)胺混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中雜環(huán)胺和內(nèi)標(biāo)的濃度比為橫坐標(biāo)，以峰面積比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，按照內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量計(jì)算。待測(cè)樣液中雜環(huán)胺的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)重新分6.3空白實(shí)驗(yàn)試樣中雜環(huán)胺含量按式(1)計(jì)算。計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。X=···························································(1)式中：式中：X———試樣中雜環(huán)胺含量，單位為微克每千克(μg/kg）；c———根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算得出的樣液中雜環(huán)胺濃度，單位為微克每升(μg/L）；V———樣液最終定容體積，單位為毫升（mL）；m———樣液所代表的最終試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。7回收率和精密度本方法在0.1μg/kg-100μg/kg添加濃度的回收率為71.3%至114.8%，精密度范圍為1.4%-7.2%。8其他方法的檢出限和定量限見表3。T/GXNSXXXX—XXXX5表3檢出限和定量限表6（資料性）8種雜環(huán)胺的信息8種雜環(huán)胺的信息見表A.1。表A.18種雜環(huán)胺的信息123456787（資料性）質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件見表B.1。表B.1質(zhì)譜參考條件12C12