《獼猴桃雄花粉脫除潰瘍病菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》四川省地方標(biāo)準(zhǔn)編制說明

四川省地方標(biāo)準(zhǔn)

《獼猴桃雄花粉脫除潰瘍病菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》

編制說明

牽頭編制單位：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)

時間：2025年2月

目錄

一、工作簡況 1

二、標(biāo)準(zhǔn)編制原則 3

三、主要內(nèi)容及確定依據(jù) 5

四、試驗(yàn)驗(yàn)證的分析、綜述報(bào)告 8

五、與有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系 15

六、與有關(guān)法律、行政法規(guī)的關(guān)系 15

七、重大分歧意見的處理經(jīng)過和依據(jù) 15

八、涉及專利的有關(guān)說明 15

九、實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)的要求和措施建議 16

十、其他應(yīng)予說明的事項(xiàng) 16

參考文獻(xiàn) 16

1

《獼猴桃雄花粉脫除潰瘍病菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》

地方標(biāo)準(zhǔn)編制說明

一、工作簡況

（一）任務(wù)來源

根據(jù)四川省市場監(jiān)督管理局2024年8月2日發(fā)出的《關(guān)于下達(dá)2024年度地方標(biāo)準(zhǔn)制修定項(xiàng)目立項(xiàng)計(jì)劃（第一批）的通知》，批準(zhǔn)由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)牽頭起草地方標(biāo)準(zhǔn)《獼猴桃雄花粉脫除潰瘍病菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》。

（二）制定背景

自2008年起，獼猴桃逐漸成為我省扶貧的重點(diǎn)發(fā)展產(chǎn)業(yè)，種植面積逐年增大，但由丁香假單胞桿菌獼猴桃致病變種（Pseudomonassyingaepv.actinidiae,Psa）引起的獼猴桃潰瘍病給該產(chǎn)業(yè)帶來了毀滅性危害。由于獼猴桃是雌雄異株果樹，雌株必需充分授粉才能保證其后續(xù)果實(shí)品質(zhì)和產(chǎn)量，而商品化獼猴桃雄花粉所攜帶的Psa卻是獼猴桃潰瘍病大范圍遠(yuǎn)距離傳播的主要途徑之一。我省獼猴桃花粉的生產(chǎn)和應(yīng)用目前存在突出的問題，大多果園不按雌雄配比栽種雄株，甚至不栽培雄株，由于雄株數(shù)量不平衡或選配不適、管理不當(dāng)，導(dǎo)致親和性差、出粉率低、活力差而影響授粉效果；果園授粉花粉來源大多是果農(nóng)自制或購買的商品花粉，自制花粉流程不規(guī)范，導(dǎo)致花粉質(zhì)量和活力較低，而市面上銷售的花粉帶菌率非常高，采用攜帶Psa的花粉人工輔助授粉，極大地加速了潰瘍病的傳播。

因此合理種植以及管理果園，殺滅雄花攜帶的Psa，同時保持花粉活力不受影響，能夠從源頭對獼猴桃潰瘍病的傳播起到防控作用。獼猴桃花粉脫除潰

2

瘍病菌Psa技術(shù)規(guī)程的建立能夠完善和規(guī)范獼猴桃無菌花粉的規(guī)?；a(chǎn)過

程，在全省獼猴桃花粉生產(chǎn)區(qū)對這一標(biāo)準(zhǔn)的推廣應(yīng)用，對防止獼猴桃潰瘍病菌通過花粉快速傳播，降低其對獼猴桃產(chǎn)業(yè)造成的經(jīng)濟(jì)損失，保證我省獼猴桃產(chǎn)業(yè)綠色健康發(fā)展具有重要的實(shí)踐指導(dǎo)意義。

（三）起草過程

1．編制工作組成立、資料收集查閱與實(shí)地調(diào)研

在承擔(dān)“十四五”國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目“重要果樹潰瘍病災(zāi)變機(jī)制與綜合防控技術(shù)研究”（2022YFD1400200）和四川省科技廳重點(diǎn)項(xiàng)目期間，開展?jié)儾×餍幸?guī)律及成災(zāi)關(guān)鍵因子研究、四川獼猴桃潰瘍病綠色防控技術(shù)體系研發(fā)的期間，積累了獼猴桃花粉的帶菌、傳播、脫除技術(shù)等相關(guān)數(shù)據(jù)。由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)牽頭，四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院、都江堰獼哆哆農(nóng)業(yè)科技有限公司、都江堰市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局、廣元市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院等單位參加，從2022年起在成都、廣元、雅安、樂山、德陽、綿陽等獼猴桃栽培區(qū)與相關(guān)企業(yè)、種植戶及部門開展了產(chǎn)業(yè)發(fā)展調(diào)研工作，通過多年技術(shù)試驗(yàn)，已基本解決獼猴桃雄花粉脫除潰瘍病菌生產(chǎn)技術(shù)難題。

2．標(biāo)準(zhǔn)起草

2024年8月2日，立項(xiàng)通知下達(dá)后，標(biāo)準(zhǔn)編制組查閱了《農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則》（十）（GB/T8321.10）、《農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則》（NY/T1276）、《獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病防治技術(shù)規(guī)程》(DB61/T1167)、《獼猴桃主要病蟲害綠色防控技術(shù)規(guī)程》(DB51/T3069-2023)等相關(guān)資料，結(jié)合國家、行業(yè)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及調(diào)研了解到的獼猴桃栽培管理、生產(chǎn)技術(shù)和近幾年編制組的研究結(jié)果等材料，形成了《獼猴桃雄花粉脫除潰瘍病菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》標(biāo)準(zhǔn)草案。

3．形成標(biāo)準(zhǔn)初審稿

2024年8月-2024年11月，在廣泛征求意見的基礎(chǔ)上，標(biāo)準(zhǔn)編制組對標(biāo)準(zhǔn)

3

草案多次進(jìn)行討論和修改，進(jìn)一步確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)內(nèi)容，將獼猴桃雄花粉脫除潰瘍病菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程分為術(shù)語、定義和具體實(shí)施過程等幾個部分，最終形成了標(biāo)準(zhǔn)初審稿。

4.形成標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿

于2024年12月12日邀請省內(nèi)農(nóng)業(yè)科研、管理生產(chǎn)、標(biāo)準(zhǔn)制定等方面的7位專家進(jìn)行了初審，編制組再次根據(jù)初審意見進(jìn)行了討論和修改，2025年3月形成了征求意見稿。

5.形成標(biāo)準(zhǔn)評審稿

2025年4月，將征求意見稿面向省內(nèi)農(nóng)業(yè)科研、管理、生產(chǎn)等方面的專家和單位征求意見，通過修改，并對標(biāo)準(zhǔn)文本進(jìn)行查重，最終形成了評審稿。

（四）起草單位及人員分工

單位名稱

任務(wù)分工

參加人員

四川農(nóng)業(yè)大學(xué)

牽頭編寫地方標(biāo)準(zhǔn)編制說明及地方標(biāo)準(zhǔn)主體，前期調(diào)研、相關(guān)試驗(yàn)示范整體設(shè)計(jì)

龔國淑、馬苗苗、陳華保、姚凱凱、吳翠平、周佳佳

四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所

花粉生產(chǎn)與加工、資料整理

涂美艷、何成勇、王玲莉

都江堰獼哆哆農(nóng)業(yè)科技

有限公司

試驗(yàn)場所、原材料供應(yīng)及花粉生產(chǎn)與加工

晏志強(qiáng)、雷彬

都江堰市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局

前期調(diào)研、資料整理

唐合均

廣元市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院

前期調(diào)研

康超勇

二、標(biāo)準(zhǔn)編制原則

標(biāo)準(zhǔn)編制遵循“科學(xué)性、先進(jìn)性、統(tǒng)一性、經(jīng)濟(jì)性、適用性、易操作性、一致性和規(guī)范性”的原則，在廣泛調(diào)查研究和充分考慮種植戶、企業(yè)等生產(chǎn)條件實(shí)際情況的前提下，通過多年的試驗(yàn)驗(yàn)證，參照國內(nèi)外成熟技術(shù)和最新成果，按照GB/T1.1-2020給出的規(guī)則編寫。

4

1．先進(jìn)性原則

本文件的編制遵循先進(jìn)性原則，結(jié)合國內(nèi)國際商品獼猴桃雄花粉攜帶大量潰瘍病菌，并造成潰瘍病菌遠(yuǎn)距離傳播及危害的實(shí)際情況，依據(jù)獼猴桃潰瘍病現(xiàn)有防治技術(shù)水平，獼猴桃雄花粉生產(chǎn)行業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀及社會需求而制定，整體水平達(dá)國內(nèi)領(lǐng)先水平。

2．科學(xué)性原則

本文件的編制遵循科學(xué)性原則。在對雄株園建設(shè)與管理、雄株生長期潰瘍病防控、雄花蕾采集與殺菌處理、雄花粉生產(chǎn)、雄花粉質(zhì)量及攜帶活潰瘍病菌檢測等做了充分調(diào)研和分析基礎(chǔ)上，對主要內(nèi)容和參數(shù)進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證，參照了國內(nèi)和國際相關(guān)最新標(biāo)準(zhǔn)制訂。

3．合理性原則

本文件中有關(guān)雄株園建設(shè)與管理、雄株生長期潰瘍病防控、雄花蕾采集與殺菌處理、雄花粉生產(chǎn)、雄花粉質(zhì)量及攜帶活潰瘍病菌檢測技術(shù)指標(biāo)的確定，是在充分分析、引用和驗(yàn)證的基礎(chǔ)上，同時還充分考慮了目前現(xiàn)有獼猴桃雄花粉生產(chǎn)加工的實(shí)際情況和實(shí)際技術(shù)能力。

4．適用性原則

本文件的編制遵循適用性原則，內(nèi)容便于實(shí)施，標(biāo)準(zhǔn)的制定充分考慮了獼猴桃雄花粉生產(chǎn)農(nóng)戶、企業(yè)技術(shù)操作的實(shí)際情況，在編制工作中充分征求了協(xié)會團(tuán)體、生產(chǎn)企業(yè)、行政管理部門及科研院所的意見，確保標(biāo)準(zhǔn)要求可以有效適用于我省行業(yè)與市場現(xiàn)狀及發(fā)展需要。

5．可操作性原則

規(guī)范的技術(shù)內(nèi)容具備標(biāo)準(zhǔn)化條件，并且已有成功的應(yīng)用實(shí)例，突出了技術(shù)內(nèi)容的針對性和合理性，以便落實(shí)獼猴桃雄花粉脫潰瘍病菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程運(yùn)行

5

管理的各個環(huán)節(jié)。

三、主要內(nèi)容及確定依據(jù)

1．主要內(nèi)容

本文件包括正文、4個規(guī)范性附錄（附錄A、附錄B、附錄C、附錄D），其中正文分10個部分闡述了本文件的適用范圍、規(guī)范性引用文件、術(shù)語和定義、雄株園建設(shè)、雄株園管理、雄株生長期潰瘍病防控、獼猴桃雄花蕾采集與殺潰瘍病菌處理、獼猴桃雄花粉生產(chǎn)、脫菌處理雄花粉質(zhì)量檢測等。資料性附錄主要是對雄花粉質(zhì)量及授粉要求、雄花粉活力檢測方法、獼猴桃雄花粉帶潰瘍病菌（活菌）常規(guī)檢測方法、PMA-PCR雄花粉帶活菌檢測相關(guān)資料等進(jìn)行了規(guī)范。正文主要包含下列內(nèi)容：

（1）雄株園建設(shè)

（2）雄株園管理

（3）雄株生長期潰瘍病防控

（4）獼猴桃雄花蕾采集與殺潰瘍病菌處理

（5）獼猴桃雄花粉生產(chǎn)

（6）脫菌處理雄花粉質(zhì)量檢測

（7）結(jié)果記錄與資料保存

附錄A雄花粉質(zhì)量及授粉要求

附錄B雄花粉活力檢測方法

附錄C獼猴桃雄花粉帶潰瘍病菌（活菌）常規(guī)檢測方法

附錄DPMA-PCR雄花粉帶活菌檢測相關(guān)資料

2．確定標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容的依據(jù)

（1）目前市售商品花粉普遍攜帶Psa，傳播潰瘍病風(fēng)險(xiǎn)極高。迄今沒有

6

關(guān)于獼猴桃雄花粉生產(chǎn)及脫除潰瘍病菌的國家、行業(yè)和四川省地方標(biāo)準(zhǔn)。制定《獼猴桃雄花粉生產(chǎn)及脫除潰瘍病菌技術(shù)規(guī)程》，對提高花粉質(zhì)量、阻遏潰瘍病菌傳播、提高獼猴桃產(chǎn)量具有重要意義。

（2）本文件條款4是獼猴桃雄花粉生產(chǎn)及脫除潰瘍病菌生產(chǎn)的基礎(chǔ)。

生產(chǎn)中由于獼猴桃雄株的主要作用是提供花粉，生長特性簡單，相比于雌株經(jīng)濟(jì)效益相對較低，定植（建園）的環(huán)境相對條件較差，長期管理粗放，加之品種老舊，導(dǎo)致雄株園樹勢總體較弱，花粉質(zhì)量不高，對病菌抵抗能力較弱，雄株優(yōu)良品種選擇規(guī)范建園標(biāo)準(zhǔn)，保障雄花蕾質(zhì)量，并能有效降低園區(qū)菌源量。

（3）本文件條款5是根據(jù)目前雄株園管理現(xiàn)狀，參照李攆等（2024）

《獼猴桃園雄株的合理配置與科學(xué)管理》提出了雄株的冬季整形修剪、生長期科學(xué)肥水管理等關(guān)鍵管理措施，保證植株健康生長，獲得帶菌量低、優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的雄花蕾。

（4）本文件條款6雄株生長期潰瘍病防控參照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部所頒布的

“2021年獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病防控技術(shù)方案”，明確了用于獼猴桃潰瘍病的化學(xué)、生物藥劑，注意不同作用機(jī)理的農(nóng)藥交替使用和合理混用，以延緩病菌產(chǎn)生抗性，提高防治效果。施藥濃度及方式參照藥劑說明書推薦用量細(xì)致噴施（枝干、葉片、花蕾及花梗）。

（5）花粉帶菌主要是由于雄花基地生產(chǎn)加工過程中，雄花蕾及其他部位所含病菌對其造成的污染，生產(chǎn)中待加工雄花蕾帶菌率（Psa）往往較高，主要是因?yàn)樾刍ɡ俨汕盎静挥没蚝苌儆盟巹┙档推浔砻婢戳?。對于已采摘的帶菌獼猴桃雄花蕾，目前也并無成熟技術(shù)可以完全殺死花蕾不同部位病菌（Psa）（不顯著影響花粉活力的前提下），通過田間試驗(yàn)確定了雄花蕾采

7

摘前田間精準(zhǔn)防治時間。

（6）本文件條款7考慮到雄株園田間規(guī)范化管理不能完全殺滅雄花蕾所帶活菌，參考李黎等（2022）《獼猴桃花粉滅菌方法比較及對果實(shí)品質(zhì)的影響》，確定了花粉加工前臭氧進(jìn)一步殺滅雄花蕾表面所帶活菌，在試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，明確了臭氧滅菌的方法及最佳時間。

（7）本文件條款8獼猴桃雄花粉生產(chǎn)中器具消毒是依據(jù)，獼猴桃雄花粉傳統(tǒng)生產(chǎn)加工過程，忽略了花粉生產(chǎn)器具消毒的重要性，前期研究中通過對比帶菌器具與無菌器具所生產(chǎn)花粉的帶活菌情況，確定了每批花粉加工前對器具消毒的重要作用。

（8）本文件條款9依據(jù)植物樣品帶菌檢測專業(yè)領(lǐng)域的基本知識和操作通行做法，參照相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，提出了所生產(chǎn)雄花粉質(zhì)量及攜帶活潰瘍病菌檢測要求，充分保障流入市場花粉的可靠性。

（9）本文件條款10依據(jù)植物樣品帶菌檢測專業(yè)領(lǐng)域的基本知識和操作通行做法進(jìn)行結(jié)果記錄與資料保存。實(shí)驗(yàn)記錄應(yīng)包括：樣品來源、種類(品種)、采集時間、檢測時間、地點(diǎn)和結(jié)果等，主要要有檢測人員、審核人員簽字。檢測結(jié)果需有相關(guān)結(jié)果、數(shù)據(jù)及圖片等支撐，上述材料應(yīng)歸檔并妥善保存。

（二）與現(xiàn)行法律、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系

《獼猴桃雄花粉生產(chǎn)及脫除潰瘍病菌技術(shù)規(guī)程》在遵守現(xiàn)行法律、法規(guī)的基礎(chǔ)上，參考現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合項(xiàng)目組的科研試驗(yàn)及其成果，并經(jīng)同行專家嚴(yán)格審查后編制完成。該規(guī)程的編制具有現(xiàn)實(shí)需要和科學(xué)意義，該技術(shù)規(guī)程不僅具有地方特色，同時也是對現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充和完善。

1．主要指導(dǎo)性標(biāo)準(zhǔn)

在技術(shù)實(shí)施過程中，關(guān)于潰瘍病防治、雄花粉生產(chǎn)及活菌（Psa）檢測等

8

主要指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)有：

（1）GB/T2828.1-2012計(jì)數(shù)抽樣檢驗(yàn)程序（第1部分）

（2）GB/T6682-2008分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

（3）GB/T8321.10農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則（十）

（4）DB51/T3069-2023獼猴桃主要病蟲害綠色防控技術(shù)規(guī)程

四、試驗(yàn)驗(yàn)證的分析、綜述報(bào)告

1．獼猴桃潰瘍病是制約產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要因素

四川作為中國第二大獼猴桃種植省份，現(xiàn)有栽培面積75萬畝，是全省鞏固脫貧成果的支柱產(chǎn)業(yè)。伴隨四川獼猴桃產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，潰瘍病在各產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生，據(jù)統(tǒng)計(jì)每年全省因潰瘍病減產(chǎn)約7.5萬噸，直接經(jīng)濟(jì)損失超9億元。該病的病原為丁香假單胞桿菌獼猴桃致病變種（P.syingaepv.actinidiae,Psa），主要隨花粉、苗木等進(jìn)行遠(yuǎn)距離傳播，嚴(yán)重制約獼猴桃產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。

獼猴桃是雌雄異株果樹，必須授粉才能結(jié)果，生產(chǎn)上獼猴桃園授粉主要依賴果農(nóng)自制花粉或購買商品花粉進(jìn)行人工輔助授粉，花粉需求量大，全省獼猴桃每年花粉用量可達(dá)15噸。四川現(xiàn)有雄株種植面積近1萬畝，具有較大規(guī)模的雄花種植園和花粉加工企業(yè)但還沒有滿足四川區(qū)域的雄花粉脫除潰瘍病菌的生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程。目前，獼猴桃雄花粉生產(chǎn)與應(yīng)用過程中存在的問題極為突出，由此造成的生產(chǎn)損失大（潰瘍病傳播與爆發(fā)），主要表現(xiàn)為建園不規(guī)范、生長期嚴(yán)重感染Psa，出花率低、加工制作過程對Psa把控不嚴(yán)、無花粉脫P(yáng)sa相關(guān)規(guī)程，自制或市售商品花粉Psa帶活菌率高。

2．商品花粉帶菌（Psa）情況

從四川、陜西、重慶等地農(nóng)戶購買使用的花粉中抽檢41份樣品，經(jīng)過

PMA-PCR活菌檢測（表1），結(jié)果表明Psa陽性平均檢出率為82.86%，活菌平均檢出率為78.57%，帶活菌率高。不同產(chǎn)地花粉的帶菌情況表明，除來自四

9

川青川5份樣品未檢測出Psa外，其余來源地樣品均檢測出帶有潰瘍病菌，且?guī)в谢畹腜sa病原菌，活菌最高檢出率為100%，表明商品花粉傳播Psa潛力強(qiáng)，進(jìn)行花粉帶菌處理對于獼猴桃產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展至關(guān)重要。

表1不同來源商品花粉帶Psa檢測情況

編

號

生產(chǎn)日期

抽檢地

數(shù)量

（份）

Psa陽性檢出率（%）

Psa活菌檢出率（%）

1

2021年4月

四川都江堰

5

100

80

2

2022年5月

陜西城固縣

5

80

80

3

2022年4月

四川都江堰

5

100

100

4

2023年4月

四川都江堰

10

100

100

5

2022年4月

重慶黔江

5

100

100

6

2023年4月

四川旺蒼

6

100

90

7

2023年4月

平均值

四川青川

5

0

82.86

0

78.57

3．雄株園發(fā)病情況與花粉原材料（花蕾）帶菌的相關(guān)性

對發(fā)病程度不同的雄株園進(jìn)行帶活菌情況檢測，從表2看出，雄花帶菌率與雄株園發(fā)病率呈正相關(guān)關(guān)系，即發(fā)病率越高，雄花帶菌越高，其中病株率為92.00%雄株園，花萼、花瓣、花蕊帶菌率分別為84.00%、47.00%和13.00%。花萼、花瓣和花蕊的帶菌率均隨發(fā)病率增加而增加，其中最外側(cè)花萼帶菌率最高，花瓣帶菌率次之，花蕊帶菌率最低，僅病株率為92.00%雄株園花蕊檢出活的潰瘍病菌，為13.00%，其余低發(fā)病率雄株園花蕊未檢出活菌，表明雄花蕾帶菌情況與雄株園病株率相關(guān)，而雄花帶菌主要體現(xiàn)為花萼和花瓣帶菌。對雄株發(fā)病率與花蕾各部位帶菌進(jìn)行Person相關(guān)性分析（表3），結(jié)果發(fā)現(xiàn)花萼帶菌與雄株發(fā)病率呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.962（P<0.05=0.033）；花蕊帶菌與雄株發(fā)病率呈極顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.994（P<0.01=0.006），該結(jié)果表明降低雄株園發(fā)病率，可有效減少雄花蕾（花萼、花蕊）的帶菌率。

10

表2雄株園發(fā)病情況對花蕾帶菌的影響

序號

雄株園發(fā)病與否

病株率（%）

花蕾活菌檢出率（%）

花萼

花瓣

花蕊

1

發(fā)病園

92.00a

84.00a

47.0a

13.00a

2

發(fā)病園

10.00b

45.00b

5.00b

0.00b

3

無癥園

0.00b

27.00c

13.00b

0.00b

4

無癥園

0.00b

10.00c

5.00b

0.00b

注：表中同列不同小寫字母表示各處理間存在差異顯著（P<0.05）；無癥園指獼猴桃株株枝干、葉片及花無潰瘍病典型癥狀。

表3雄株發(fā)病率與花蕾各部位帶菌的相關(guān)系數(shù)

花瓣

花萼

花蕊

Pearson相關(guān)性

顯著性（雙側(cè)）

Pearson相關(guān)性

顯著性（雙側(cè)）

Pearson相關(guān)性

顯著性（雙側(cè)）

病株率

0.924

0.077

0.962*

0.033

0.994**

0.006

注：*和**分別表示顯著性在0.05和0.01水平下。

4．獼猴桃雄株生長期潰瘍病藥劑防控的效果

針對雄株園潰瘍病不防治或防治不規(guī)范問題，參照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部頒布的“2021年獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病防控技術(shù)方案”中所推薦的藥劑，應(yīng)用四川農(nóng)業(yè)大學(xué)等單位研發(fā)的“獼猴桃潰瘍病綠色防控技術(shù)”進(jìn)行雄株園藥劑防治試驗(yàn)，結(jié)果（表4）表明，采用潰瘍病綠色防控技術(shù)后花萼、花瓣帶率顯著降低，其中常規(guī)管理園花萼帶菌率為84.00%，花瓣帶菌率為24.50%，精準(zhǔn)施藥管理園施用中生菌素后花萼、花瓣帶菌率分別為3.33%和1.11%；施用四霉素后花萼、花瓣帶菌率分別為6.67%和4.44%，該結(jié)果表明，精準(zhǔn)施藥管理可以有效降低花蕾不同部位帶菌率。

表4雄株園依規(guī)程田間管理與普通管理花蕾帶菌率

處理

中生菌素（%）

四霉素（%）

花萼

花瓣

花萼

花瓣

常規(guī)管理

84.00±5.12a

24.00±2.25a

84.00±5.12a

24.00±2.25a

依規(guī)程施藥

3.33±1.00b

1.11±0.00b

6.67±0.05b

4.44±1.11b

注：常規(guī)管理指花蕾生長期不施藥防治；表中同列不同小寫字母表示各處理間存在差異顯著（P<0.05）。

11

5．臭氧殺菌處理的作用

5.1花蕾臭氧殺菌

為避免花粉生產(chǎn)過程中，花萼或花瓣所含Psa對花粉污染，花粉加工前采用不同濃度臭氧對雄花蕾進(jìn)一步殺滅處理。處理15-20min的結(jié)果表明（表5），當(dāng)臭氧濃度為108.00mg·m-3時，花粉帶活菌率為10.32%，隨著臭氧濃度繼續(xù)增加至320.40mg·m-3，花粉帶活菌率為4.00%；當(dāng)臭氧濃度為630.0mg·m-3時，花粉帶活菌率為0.00%，表明濃度為630.0mg·m-3的臭氧可以有效殺滅雄花粉所攜帶的活Psa；當(dāng)臭氧濃度為650.0mg·m-3（儀器穩(wěn)定工作產(chǎn)生的最大濃度），處理15-20min時，花粉帶活菌率為0.00%，花粉產(chǎn)量為5.22g/kg,花粉活力下降2.92%，與濃度為630.0mg·m-3劑量處理后效果無顯著差異。當(dāng)臭氧濃度為650.0mg·m-3，增加處理時間至30min，花粉帶活菌率為0.00%，花粉產(chǎn)量為5.15g/kg,花粉活力下降10.82%，其中殺菌率和花粉產(chǎn)量無顯著變化，花粉活力顯著降低，繼續(xù)增加處理時間已無實(shí)際意義。因此，雄花粉生產(chǎn)前

630.0-650.0mg·m-3的臭氧處理15-20min為最優(yōu)處理措施。

表5不同濃度臭氧處理雄花蕾花粉殺菌效果

劑量（mg·m-3）

處理時間（min）

花粉帶活菌率

（%）

花粉產(chǎn)量

（g/kg）

花粉活力下降（%）

108.0

15-20

10.32a

4.70a

5.48a

320.4

15-20

4.00b

5.10a

5.39a

630.0

15-20

0.00c

5.10a

2.50a

650.0

15-20

0.00c

5.22a

2.92a

650.0

30

0.00c

5.15a

10.82b

注：表中同列不同小寫字母表示各處理間存在差異顯著（P<0.05）

5.2花粉臭氧殺菌

對臭氧直接處理花粉滅菌效果和處理后活力影響試驗(yàn)，對濃度為645.55

mg·m-3的臭氧進(jìn)行帶菌雄花粉殺菌的結(jié)果表明（表6），相比于對照臭氧處理花粉1min后，滅菌率為35.0%，花粉活力下降7.70%；處理3min后，滅菌率為68.2%，花粉活力下降12.80%；當(dāng)處理5min時，殺菌率為100.00%，但花

12

粉活力下降至30.00%以下，生產(chǎn)上判定該活力花粉為不合格花粉，表明再增加時間處理已對生產(chǎn)無參考意義。該結(jié)果表明，臭氧直接處理帶菌花粉，當(dāng)達(dá)到完全殺菌效果時，花粉活力不能達(dá)標(biāo)，此法不可行。

表6臭氧處理時間對花粉殺菌（Psa）的影響

臭氧處理時間（min）

殺菌率（%）

花粉活力（%）

0（對照）

0.00a

50.00a

1

35.00b

42.30a

3

68.20c

37.20b

5

100.00d

26.60c

7

100.00d

18.20d

15

100.00d

0.00e

30

100.00d

0.00e

注：表中同列不同小寫字母表示各處理間存在差異顯著（P<0.05）

6．PMA檢測活菌靈敏度

PMA對不同比例活、死菌檢測結(jié)果如圖1和表7所示，當(dāng)活菌與死菌的比例為1:1時，PMA-PCR檢測結(jié)果條帶較亮，當(dāng)活菌與死菌的比例為1:99時，

檢測結(jié)果僅微弱可見，進(jìn)一步降低活菌比例（1:999），幾乎不見檢測條帶，當(dāng)活菌與死菌比例為0:1時，檢測條帶完全消失，表明PMA用于檢測不同比例活菌與死菌混合體系結(jié)果可靠。

比較了PMA-PCR、常規(guī)PCR、平板涂布計(jì)數(shù)法測定Psa死菌的可靠性（表9），用于檢測Psa死菌的濃度為101cfu·mL-1~107cfu·mL-1，常規(guī)PCR檢測的最低限度為103cfu·mL-1，而PMA-PCR與平板涂布分離均未檢測出活菌，表明PMA-PCR檢測技術(shù)可以有效避免死菌的檢出，具有靈敏、準(zhǔn)確的活菌檢測能力。

圖1不同比例活菌PMA-PCR檢測結(jié)果

注：1～5依次為活菌和熱致死菌按照1:1、1:9、1:99、1:999和0:1的混合體系，6為清水對

13

照。

表7不同檢測方法測定Psa死菌的比較

菌液濃度/cfu·mL-1

常規(guī)PCR

PMA-PCR

平板涂布計(jì)數(shù)/cfu

107

+

-

0

106

+

-

0

105

+

-

0

104

+

-

0

103

+

-

0

102

-

-

0

101

-

-

0

注：“+”代表PCR檢測結(jié)果為陽性，“-”代表PCR檢測結(jié)果為陰性。

7.技術(shù)規(guī)程所生產(chǎn)花粉抽檢情況

以市售商品花粉和常規(guī)技術(shù)生產(chǎn)的花粉為對照，分別對脫除潰瘍病菌技術(shù)規(guī)程所生產(chǎn)的花粉進(jìn)行抽樣檢測（不同處理每次抽檢10份）（表8），對各處理花粉進(jìn)行Psa帶活菌率檢測，抽檢結(jié)果表明對照（市售商品花粉）活菌檢出率為78.00%，常規(guī)技術(shù)生產(chǎn)花粉的活菌檢出率為74.00%，而依規(guī)程所生產(chǎn)花粉的活菌檢出率為0.00%，極顯著小于對照和常規(guī)技術(shù)處理花粉。

對各處理花粉活性檢測結(jié)果表明，對照（市售商品花粉）萌發(fā)率為68.42%，采用常規(guī)技術(shù)進(jìn)行花粉生產(chǎn)，花粉萌發(fā)率為77.50%，采用脫除潰瘍病菌技術(shù)所生產(chǎn)花粉的萌發(fā)率為78.43%，不同處理間花粉產(chǎn)量、花粉萌發(fā)率均無顯著差異。該結(jié)果表明采用脫潰瘍病菌技術(shù)進(jìn)行花粉生產(chǎn)，會顯著降低花粉帶Psa活菌率，但不影響花粉產(chǎn)量及花粉活力。

表8不同處理花粉抽檢情況

處理

第一批次

Psa活菌抽檢率（%）

第五批次

活菌平

均檢出率（%）

花粉平均萌

發(fā)率（%）

第二批次

第三批次

第四批次

依規(guī)程生產(chǎn)花粉

0.00

0.00

0.00

0.00

0.00

0.00a

78.43±11.45a

常規(guī)技術(shù)

80.00

80.00

60.00

100.00

50.00

74.00b

77.50±12.35a

對照（市售

商品花粉）

80.00

100.00

50.00

80.00

80.00

78.00b

68.42±10.24a

注：表中同列不同小寫字母表示各處理間存在差異顯著（P<0.05）

8．技術(shù)規(guī)程所生產(chǎn)花粉田間應(yīng)用效果

為驗(yàn)證脫除潰瘍病菌技術(shù)所生產(chǎn)花粉在生產(chǎn)中應(yīng)用可靠性，本研究以市售

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商品花粉為對照，對比了采用該技術(shù)所生產(chǎn)花粉的田間授粉效果。按田間常規(guī)花粉用量（20g/畝）進(jìn)行授粉，不同時期統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明（表9），脫除潰瘍病菌技術(shù)生產(chǎn)花粉授粉后的田間座果率為94.55%，可溶性固形物含量、硬度及干物質(zhì)含量分為14.80%、5.74kg/cm2和18.98%，平均單果重為90.42g，商品性均價為14元/kg；市售商品花粉授粉后的田間座果率為95.60%，可溶性固形物含量、硬度及干物質(zhì)含量分為16.25%、5.20kg/cm2和18.45%，平均單果重為88.65g，商品性均價為14元/kg，脫除潰瘍病菌技術(shù)所生產(chǎn)花粉授粉后對座果率、果實(shí)品質(zhì)、平均單果、商品性均價均無顯著影響。

表9脫潰瘍病花粉田間授粉效果

處理

座果率（%）

果實(shí)品質(zhì)

平均單果重

（g）

商品性

均價/（元/kg）

可溶性固形物含量（%）

硬度

（kg/cm2）

干物質(zhì)含量

（%）

依規(guī)程生產(chǎn)花粉

96.55±7.00a

16.80±2.62a

5.74±0.95a

18.98±5.00a

90.42±15.00a

14.00

商品花粉

（對照）

95.60±5.25a

16.25±3.20a

5.20±1.24a

18.45±4.20a

88.65±14.02a

14.00

注：表中同列不同小寫字母表示各處理間存在差異顯著（P<0.05）

綜合上述結(jié)果，獼猴桃雄花粉中Psa來源主要為花粉生產(chǎn)加工過程中花蕾（花萼及花瓣）表面Psa的接觸污染，種植端雄株園規(guī)范建設(shè)，生長期合理整形、修剪、施肥和潰瘍病防控可提高雄花蕾產(chǎn)量和質(zhì)量，同時也可顯著降低花蕾表面帶菌率?；ǚ奂庸で安捎脻舛葹?30.0-650.0mg·m-3的臭氧處理15-20

min，可避免所生產(chǎn)雄花粉帶活菌（Psa），結(jié)合PMA-PCR活菌快速檢測技術(shù)保障了無菌（Psa）花粉的生產(chǎn)。

9．預(yù)期的經(jīng)濟(jì)效益、社會效益和生態(tài)效益

（1）社會效益

本文件制定發(fā)布后具有重要的社會效益，采用該技術(shù)脫除雄花粉攜帶潰瘍病菌，有效阻斷了潰瘍病菌以花粉為介體進(jìn)行遠(yuǎn)距離傳播，避免了無菌栽培區(qū)

15

因花粉帶菌而導(dǎo)致潰瘍病嚴(yán)重危害的潛在風(fēng)險(xiǎn)；推動了獼猴桃雄花粉產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量和獼猴桃產(chǎn)業(yè)多元化發(fā)展進(jìn)程；促進(jìn)了農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)以及綠色發(fā)展，為鞏固脫貧攻堅(jiān)成果和助力鄉(xiāng)村振興做了重要貢獻(xiàn)。

（2）經(jīng)濟(jì)效益

本文件的制定，為獼猴桃雄花粉生產(chǎn)及脫除潰瘍病菌提供依據(jù)。其中雄株建設(shè)、管理，生長期潰瘍病防控，雄花蕾采集與殺菌處理等措施實(shí)施提升了雄花粉產(chǎn)量和質(zhì)量，相比于傳統(tǒng)方法所生產(chǎn)的雄花粉，依規(guī)程生產(chǎn)花粉授粉后畝產(chǎn)增加30%以上，每畝4000元左右的產(chǎn)值。

（3）生態(tài)效益

本文件的實(shí)施，規(guī)范了獼猴桃雄株園防治措施，減少了因過量施用農(nóng)藥防治潰瘍病而引起的水體和環(huán)境污染。同時本文件的制定，為獼猴桃雌雄株分園管理提供了科學(xué)依據(jù)，節(jié)約土地用于雌株種植，提高了單位面積的獼猴桃產(chǎn)量。

五、與有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系

本文件首次制訂，與本行業(yè)現(xiàn)有的其它標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)配套，無沖突。

六、與有關(guān)法律、行政法規(guī)的關(guān)系

本文件符合現(xiàn)行的法律法規(guī)要求，符合《農(nóng)作物病蟲害防治條例》法律、法規(guī)要求。

七、重大分歧意見的處理經(jīng)過和依據(jù)

本文件在制定過程中未出現(xiàn)重大分歧意見。

八、涉及專利的有關(guān)說明

未發(fā)現(xiàn)本文件涉及專利問題。

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九、實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)的要求和措施建議

建議標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布后，及時組織開展宣傳和培訓(xùn)；通過在主產(chǎn)區(qū)布設(shè)示范點(diǎn)，尤其與主要生產(chǎn)加工經(jīng)營主體（獼猴桃雄株種植合作社及花粉生產(chǎn)加工企業(yè)）等合作，加大示范和宣傳力度，加快推進(jìn)本文件的實(shí)施。

十、其他應(yīng)予說明的事項(xiàng)

無

參考文獻(xiàn)

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