T-CAS 947-2024 類(lèi)器官在化學(xué)品毒性測(cè)試中的應(yīng)用規(guī)范

T/CAS947—2024Specificationsfortheuseoforganoidsinchemicalt 2 2 2 4 7 9請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。物科技有限公司、北京實(shí)安科技有限公司、北京市眼科研究所、北京醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)會(huì)、北京整合醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司、河北省食品檢驗(yàn)研究院、黑玉星巖國(guó)際科學(xué)技術(shù)（北京）有限公司、洛陽(yáng)華清天木生物科技有限公司、清華大學(xué)、清華大學(xué)深圳國(guó)際研究生院、山東第一醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院、蘇浙江霍德生物工程有限公司、中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院、國(guó)軍標(biāo)（北京）標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)研究院、通標(biāo)本文件主要起草人：顧愛(ài)華、蔣兆彥、徐進(jìn)、翁振坤、劉倩、周勇、楊楊、梁靜佳、邵文濤、趙鵬、胡佳、陳力群、聶國(guó)輝、黃衛(wèi)人、張巖、楊菁喆、鄧博文、李娜、金子兵、穆紅、陳澤新、王恒、徐冰、吳春生、范靖、周一鳴、戴其全、王慶國(guó)、王類(lèi)器官在化學(xué)品毒性測(cè)試中的應(yīng)用規(guī)范下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用由干細(xì)胞或前體細(xì)胞體外培養(yǎng)形成，由組織器官特異性的多種細(xì)胞組成，具有特定組織器官關(guān)2a)DMEM/F12培養(yǎng)基、Neurobasal培養(yǎng)基、mTeSR1培養(yǎng)基、STEMdiffAPEL2培養(yǎng)基、小鼠肺類(lèi)器官培養(yǎng)基、小鼠腸類(lèi)器官培養(yǎng)基、小鼠肝類(lèi)器官培養(yǎng)基；b)Matrigel基質(zhì)膠、Vi）；g)磷酸鹽緩沖液（PBS）、紅細(xì)胞裂解液、DNAh)T25培養(yǎng)瓶（poly-HEMA包被）、96孔板（超低吸附）、細(xì)胞培養(yǎng)皿37.1.1.5置于37℃5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中的低速圓周搖床上搖動(dòng)培養(yǎng)，每3d～5d半量換液，第7.1.2.1心臟類(lèi)器官宜采用人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（hPSCs）構(gòu)建5μMIWP-2、0.5μM視黃），7.1.3.1肺類(lèi)器官宜采用小鼠肺組織構(gòu)建，置min～60min。培養(yǎng)基混勻，4℃300g離心5min，棄上清；重復(fù)上述步驟2次，直至細(xì)胞沉淀變白。7.1.3.7按照2×107/mL7.1.4.1腸類(lèi)器官宜采用小鼠腸組織構(gòu)建，置7.1.4.3將腸段縱向切開(kāi)，用預(yù)冷的PBS輕輕47.1.5.9按照2×107/mL7.1.6.1腎類(lèi)器官宜采用人誘導(dǎo)7.1.6.324h后，更換STEMdi5個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到transwell小室，并置于STEMdiffAPEL2培養(yǎng)基（含5μM），釋液（不少于3個(gè)梯度）。小心吸出培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基（不要觸碰膠滴基（每個(gè)濃度梯度不少于3個(gè)平行樣）進(jìn)行培養(yǎng)。根據(jù)類(lèi)器b)參考附錄B的方法，檢測(cè)腦類(lèi)器官標(biāo)志物表達(dá)水1)神經(jīng)元標(biāo)志物，如微管相關(guān)蛋白2（2)膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物，如膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）和S100b。b)參考附錄B的方法，檢測(cè)心類(lèi)器官標(biāo)志物表達(dá)水）；b)參考附錄B的方法，檢測(cè)肺類(lèi)器官分子標(biāo)志物變化水平，包括：1)上皮標(biāo)志物，如角蛋白14（Krt14）、上皮細(xì)胞粘附分b)參考附錄B的方法，檢測(cè)腸類(lèi)器官分子標(biāo)志物變化水平，包括：）；b)參考附錄B的方法，檢測(cè)肝類(lèi)器官分子標(biāo)志物變化水平，包括：6b)參考附錄B的方法，檢測(cè)腎類(lèi)器官標(biāo)志物表達(dá)水3)足細(xì)胞標(biāo)志物，如突觸足蛋白（SYNPO）。7A.1儀器設(shè)備）；A.3試驗(yàn)方法b)采用巴氏管上下吹打，使類(lèi)器官和Matrigel基質(zhì)膠分離；8）；c)采用TRIzol試劑盒提取d)采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)脫氧核糖核酸（cDNA（GAPDH）作為內(nèi)參，2-ΔΔCt值反映標(biāo)志物d)Hank's平衡鹽溶液（Hank'sbad)將腦類(lèi)器官培養(yǎng)板放置在37℃5