寒地野生大豆資源疫霉根腐病抗性鑒定技術(shù)規(guī)程

1寒地野生大豆資源疫霉根腐病抗性鑒定技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了寒地野生大豆資源疫霉根腐病抗性鑒定的術(shù)語和定義、育苗、菌種來源和保存、接種體制備、接種時間、接種方法、接種后管理、調(diào)查時間、調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)、病情調(diào)察、感病率計算及抗性評價。本文件適用于寒地野生大豆資源疫霉根腐病抗性鑒定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T2114-2012大豆疫霉病菌檢疫檢測與測定方法DB22/T2805.1-2017大豆主要病蟲害抗性鑒定技術(shù)規(guī)范第1部分：抗疫霉根腐病DB23/T2026-2017寒地野生大豆資源性狀描述規(guī)范3術(shù)語和定義DB22/T2805.1和DB23/T2026界定的術(shù)語和定義適用于本文件。4育苗將野生大豆種子破皮后播種于裝有滅菌蛭石的花盆中，每盆中分別種植10粒種子。出苗后每盆留有生長一致的幼苗5株，設(shè)置感抗對照品種，3次重復(fù)，每個重復(fù)種植5盆，育苗期溫度控制在20℃~30℃。5菌種來源和保存選用當(dāng)?shù)夭杉⒎蛛x鑒定后的病原菌，或者實驗室內(nèi)保存的有代表性的菌株，采集、分離、鑒定和保存的方法應(yīng)符合NY/T2114的規(guī)定。6接種體制備將分離純化的大豆疫霉菌接種于胡蘿卜瓊脂培養(yǎng)基，于25℃恒溫暗培養(yǎng)7d備用。胡蘿卜瓊脂培養(yǎng)基的配制應(yīng)符合NY/T2114的規(guī)定。7接種時間當(dāng)?shù)谝黄鰪?fù)葉完全展開后，準(zhǔn)備接種。28接種方法將待鑒定幼苗的第一片三出復(fù)葉剪下并去掉葉柄，置于不銹鋼托盤內(nèi)，托盤內(nèi)事先放置無菌紗布并噴施適量蒸餾水保持紗布濕潤。用滅菌后的刀片在葉片上表面中心位置劃出0.5cm長的傷口。將培養(yǎng)好的接種體切取小于1/2葉片大小的圓形菌塊，放置傷口上，菌絲面向上。9接種后管理用保鮮膜覆蓋托盤，保持溫度24℃、光照12h/d、相對濕度100%。10調(diào)查時間接種后第5天，當(dāng)對照品種分別表現(xiàn)為感病和抗病，可對接種葉片進行病情表型觀察。11調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)葉片變黃、變褐或失綠視為感病。12病情調(diào)查按調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計感病葉片數(shù)。13感病率計算感病率計算按下列公式計算。感病率=×100%14抗性評價根據(jù)供試材料的感病率確定其對大豆疫霉根腐病的抗性水平，評價標(biāo)準(zhǔn)如表1：表1供試材料對大豆疫霉根腐病的抗性評價標(biāo)準(zhǔn)抗感反應(yīng)Reaction鑒定標(biāo)準(zhǔn)standardofidentification感病率