有關(guān)硅膠色譜柱的使用 色譜柱常見問題解決方法VIP

第第頁有關(guān)硅膠色譜柱的使用色譜柱常見問題解決方法色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。液相色譜通常均接受填充柱。色譜柱的分別效果取決于所選擇的固定相

色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。液相色譜通常均接受填充柱。色譜柱的分別效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件。硅膠色譜柱使用方法稱量。200—300目硅膠，稱30—70倍于上樣量；假如極難分，也可以用100倍量的硅膠H。干硅膠的視密度在0.4左右，所以要稱40g硅膠，用燒杯量100ml也可以。2.攪成勻漿。加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分攪拌。假如洗脫劑是石油醚/乙酸乙酯/丙酮體系，就用石油醚拌。3.裝柱。將柱底用棉花塞緊，不必用海沙，加入約1/3體積石油醚，裝上蓄液球，打開柱下活塞，將勻漿一次傾入蓄液球內(nèi)。隨著沉降，會有一些硅膠沾在蓄液球內(nèi)，用石油醚將其沖入柱中。4.壓實。沉降完成后，加入更多的石油醚，用雙聯(lián)球或氣泵加壓，直至流速恒定。柱床約被壓縮至9/10體積。無論走常壓柱或加壓柱，都應(yīng)進行這一步，可使分別度提高很多，且可以避開過柱時由于柱床萎縮產(chǎn)生開裂。5.上樣。干法濕法都可以。海沙是沒必要的。上樣后，加入一些洗脫劑，再將一團脫脂棉塞至接近硅膠表面。然后就可以放心地加入大量洗脫劑，而不會沖壞硅膠表面。6.過柱和收集。柱層析實際上是在擴散和分別之間的權(quán)衡。太低的洗脫強度并不好，推舉用梯度洗脫。收集的例子：10mg上樣量，1g硅膠H，0.5ml收一餾分；1—2g上樣量，50g硅膠（200—300目），20—50ml收一餾分。7.檢測。要更多地使用專用噴顯劑，假如僅用紫外燈，會損失較多產(chǎn)品，紫外的靈敏度一般比噴顯劑低1—2個數(shù)量級。8.送譜。收集的產(chǎn)品旋干，在送譜前通常需要重結(jié)晶。假如樣品太少或為液體，可過一小凝膠柱，作為送譜前的最后純化手段?？沙渥V1.5ppm左右所謂的“硅膠”峰。

—專業(yè)分析儀器服務(wù)平臺,試驗室儀器設(shè)備交易網(wǎng),儀器行業(yè)專業(yè)網(wǎng)絡(luò)宣揚媒體。

相關(guān)熱詞：

等離子清洗機,反應(yīng)釜,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,高精度溫濕度計,露點儀,高效液相色譜儀價格,霉菌試驗箱,跌落試驗臺,離子色譜儀價格,噪聲計,高壓滅菌器,集菌儀,接地電阻測試儀型號,柱溫箱,旋渦混合儀,電熱套,場強儀萬能材料試驗機價格,洗瓶機,勻漿機,耐候試驗箱,熔融指數(shù)儀,透射電子顯微鏡。

色譜柱的柱效下降會有什么現(xiàn)象？

柱效（columnefficiency），是指色譜柱保留某一化合物而不使其擴散的本領(lǐng)。柱效能是一支色譜柱得到窄譜帶和改善分別的相對本領(lǐng)。

柱效，從名字上理解是色譜柱的分別效果。色譜柱的有效塔板數(shù)越大或有效的塔板高度越低，色譜柱的柱效越好，仿佛于每個塔板的分別效率相同，有效塔板數(shù)越多，最后得到的物質(zhì)越純。

柱效率是指溶質(zhì)通過色譜柱之后其區(qū)域?qū)挾燃犹砹硕嗌?，它與溶質(zhì)在兩相中的擴散及傳質(zhì)情況有關(guān)，這是所謂色譜的動力學(xué)過程。

怎么計算和直觀的提現(xiàn)？

從塔板概念評價柱效

依據(jù)塔板理論，可以計算一根色譜柱所達到的理論塔板數(shù)，或表達為每米理論塔板數(shù)n/m。把相當(dāng)于一個理論塔板的柱子長度稱作理論塔板高度H，通常接受有效塔板數(shù)N和有效塔板高度L來表達柱效，W為峰寬,W1/2為半峰寬：

N=16（Tr/W）^2

=5.54（Tr/W（1/2））^2

=L/H

明顯，N值越大，或H值越小，柱效越高。分散效果緊要取決于所選擇的固定相。

從柱的算公式上我們可以看出柱效緊要跟理論塔板數(shù)和柱長有關(guān)系。我們來解釋一下理論塔板數(shù)。

理論塔板數(shù)（theoreticalplatenumber），N是色譜柱效的參數(shù)之一,用于定量表示色譜柱的分別效率（簡稱柱效）。N取決于固定相的種類、性質(zhì)（粒度、粒徑分布等）、填充情形、柱長、流動相的種類和流速及測定柱效所用物質(zhì)的性質(zhì)。假如峰形對稱并符合正態(tài)分布，N可貌似表示為：

理論塔板數(shù)=5.54（保留時間/半高峰寬）2（2是平方）

柱效率用理論塔板數(shù)定量地表示：N=16*（t/w）2、其中，t是溶質(zhì)從進樣到最大洗脫峰顯現(xiàn)的時間，w為該溶質(zhì)的洗脫峰在基線處的寬度。在一色譜柱中用相同的洗脫條件時候，不同化合物的滯留時間與其洗脫峰寬度之比接近常數(shù)。因此理論塔板數(shù)大的色譜柱效率高。當(dāng)然，N的大小和柱子長度有緊密關(guān)系：理論塔板高度H=柱長/N，用H可以衡量單位長度的色譜柱的效率，H越小，則色譜柱效率越高。N為常量時，W隨tR成正比例變化。在一張多組分色譜圖上，假如各組份含量相當(dāng)，則后洗脫的峰比前面的峰要漸漸加寬，峰高則漸漸降低。

用半峰寬計算理論塔板數(shù)比用峰寬計算更為便利和常用，由于半峰寬更簡單精準(zhǔn)測定，尤其是對稍有拖尾的峰。

N與柱長成正比，柱越長，N越大。用N表示柱效時應(yīng)注明柱長，假如未注明，則表示柱長為1米時的理論塔板數(shù)。（一般HPLC柱的N在1000以上。）若用調(diào)整保留時間（tR）計算理論塔板數(shù)，所得值稱為有效理論塔板數(shù)（N有效或Neff）=16（tR/W）

離子色譜柱的柱效一般由硫酸根的理論塔板數(shù)來計，理論塔板數(shù)可以由色譜儀工作站直接讀出，一般離子色譜柱的柱效大于1000個塔板數(shù).

柱效下降會有什么現(xiàn)象？

1.看峰分別度，分別度直接關(guān)系測試結(jié)果精準(zhǔn)性，可以判定柱效是否下降，柱效下降分別度一般會變差。

2.測定色譜柱的塔板數(shù)來判定

3.通過壓力變化和出峰時間來判定，一般柱效下降時伴隨著柱壓的上升和降低，此時出峰的時間也會和之前有很大差異。

4.還可以依據(jù)新的柱子的保留時間判定,看重復(fù)性,平行性如何.

5.通過譜圖峰型的變化，是否有嚴重前伸和拖尾現(xiàn)象，假如峰型很差了，柱效已經(jīng)下降了

柱效下降后如何來提高柱效。

離子交換柱長時間在緩沖溶液中使用和進樣,將導(dǎo)致色譜柱離子交換本領(lǐng)下降,.用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再