DBS22 007-2013 食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 水產(chǎn)品中炔諾酮的測定 ELISA法

DBS22 ELISA

吉林省衛(wèi)生廳

DBS22/007—2013前 言本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：長春市水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：閆先春、楊炳坤、楊立軍、王雅倩、修磊。IDBS22/007—2013食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)水產(chǎn)品中炔諾酮的測定

法1

范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中炔諾酮的酶聯(lián)免疫測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于水產(chǎn)品中炔諾酮的快速篩選檢測。本標(biāo)準(zhǔn)的檢出限為2

。2

規(guī)范性引用文件件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T

6682 SC/T

3016 水產(chǎn)品抽樣方法3

原理利用抗原抗體的特異性反應(yīng)，樣本中殘留的炔諾酮和預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭炔諾酮抗體，加入酶標(biāo)二抗顯色后，樣本吸光值與其所含殘留物炔諾酮的含量成負(fù)相關(guān)，外標(biāo)法定量。4

試劑與材料除另有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，試驗(yàn)用水符合GB/T

6682一級水的標(biāo)準(zhǔn)。4.1 亞硝基鐵氰化鈉（C5FeN6Na2O.2H2O）。4.2 硫酸鋅(ZnSO4.7H2O)

。4.3 乙腈。4.4 氫氧化鈉。4.5 0.36

moL/L

亞硝基鐵氰化鈉溶液:稱取

g

mL

4.6 1

moL/L

28.8

g

硫酸鋅加

100

mL

水溶解混勻。4.7 0.1

moL/L

氫氧化鈉溶液:稱取

0.4

g

100

mL

水溶解混勻。4.8 乙腈-0.1

氫氧化鈉溶液:量取

84

mL

16

mL

0.1

moL/L

氫氧化鈉溶液中混勻。4.9 試劑盒提供試劑包括：96

終止液、濃縮洗滌液、濃縮復(fù)溶液。4.10刻度移液管：10

mL。4.11 洗耳球。4.12 玻璃試管：10

mL。4.13 聚苯乙烯離心管：2

1DBS22/007—20135

儀器與設(shè)備5.1

酶標(biāo)儀或酶聯(lián)免疫分光光度計(jì)(450

nm)

。5.2

天平：感量

0.01

g。5.3

洗板機(jī)。5.4

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/氮?dú)獯蹈裳b置。5.5

均質(zhì)器。5.6

振蕩器。5.7

渦旋儀。5.8

離心機(jī)(4000r/min)

。5.9

微量移液器：單道

μL～200

μ

μ

μL、多道

250

μL。6

測定方法6.1 制備與保存6.1.1 抽樣：按

3016-2004

的方法進(jìn)行。6.1.2

記，放入-18℃冰柜中冷凍保存。6.2 提取純化6.2.1 稱取

2.0±0.05

g

50

7

mL

乙腈-0.1

moL/L

氫氧化鈉溶液（4.8），加入

硝基鐵氰化鈉溶液（4.5），1

500

μL，用振蕩器振蕩

min，3000

10

6.2.2 取

1

mL

10

mL

50℃～60℃水浴氮?dú)饬飨麓蹈桑?.2.3 取

1

mL

1︰4體積比進(jìn)行稀釋（取

100

μL

樣本液+400

μL

復(fù)溶工作液），渦動混勻；取

50

μL

用于分析。6.3 測定6.3.1 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20℃～25℃）平衡

30

min，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。6.3.2 取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔板放入自封袋，保存于

2℃～8℃。6.3.3 洗滌工作液在使用前也需回溫。6.3.4 編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做

2

本孔所在的位置。6.3.5

50

50/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置

37℃

30

。6.3.64.9）250

4～5

次，每次間隔

10

s6.3.7 加酶標(biāo)二抗：加入酶標(biāo)二抗

孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置于

37℃環(huán)境中反應(yīng)30

，取出重復(fù)洗板步驟

6.3.6.6.3.8

50

℃

15

。2DBS22/007—20136.3.9 測定：加入終止液

50

/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于

450

nm處，在

5

內(nèi)讀完數(shù)據(jù)，測定每孔

OD

值。7

結(jié)果計(jì)算以

100%，即公式（1）：=

AA0

………（1）式中：E———%；A———標(biāo)準(zhǔn)液或樣品液吸光度值；A———空白樣品吸