JJF 2109-2024 標準物質定值技術要求 有機同位素稀釋質譜法

學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載中華人民共和國國家計量技術規(guī)范學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載JJF21092024標準物質定值技術要求有機同位素稀釋質譜法r s i i

iTechnir s i i

ic liOrganiIsotopeDiutonc li-

- -

-20240207發(fā)布-

- -

-國

家

市

場

監(jiān)

督

管

理

總

局 發(fā)

布學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載JJF2109—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載標準物質定值技術要求有機同位素稀釋質譜法r iTechnialRequiementsRr itito lCharactito l

JJF21092024歸

口

單

位:全國標準物質計量技術委員會起

草

單

位:中國計量科學研究院中國農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)質量標準與檢測技術研究所本規(guī)范委托全國標準物質計量技術委員會負責解釋學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載JJF2109—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載本規(guī)范起草人:張慶合

(中國計量科學研究院)李秀琴

(中國計量科學研究院)李曉敏

(中國計量科學研究院)周劍

(中國農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)質量標準與檢測技術研究所)學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載JJF2109—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載目 錄引言

………………………

(Ⅲ)1

范圍……………………

(1)2

規(guī)范性引用文件………………………

(1)3

術語和定義……………

(1)4

方法原理………………

(1)5

同位素標記物的選擇…………………

(2)5.1

標記元素類型與位置………………

(2)5.2

標記原子數(shù)量………………………

(2)5.3

化學純度和同位素分布……………

(2)5.4

質譜定量離子………………………

(2)6

同位素標記物的添加…………………

(2)6.1

添加量………………

(2)6.2

混勻平衡……………

(3)7

分離與檢測……………

(3)7.1

聯(lián)用儀器要求………………………

(3)7.2

分離要求……………

(3)7.3

檢測要求……………

(3)8

校準方法………………

(3)8.1

校準曲線法…………

(3)8.2

括弧法

(雙點校準法)……………

(4)8.3

單點校準法…………

(4)8.4

標準加入法…………

(5)9

方法確認與質量控制…………………

(5)9.1

方法確認……………

(5)9.2

空白測量……………

(6)9.3

基質效應……………

(6)9.4

方法可靠性評價……………………

(6)10

計量溯源性說明

……………………

(6)11

標準物質定值要求

…………………

(6)11.1

一家實驗室定值

…………………

(6)11.2

其他定值模式

……………………

(6)12

不確定度評定及表述

………………

(7)Ⅰ學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載JJF2109—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載11附錄

A 基質效應評估方法

……………

(8)11附錄B

不同校準方法測量結果的不確定度分量

……

(0)附錄C 有機同位素稀釋質譜法應用示例———

“豬肉粉中克倫特羅”

有證標準物質

(GBW10135)

的定值 …………………

(2)Ⅱ學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載JJF2109—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載引 言同位素稀釋質譜法被國

際物質的量咨詢委員會

(CCQM)認定為潛在基準測量方法,適用于復雜基體中化學成分量的高準確度測量和標準物質定值。本規(guī)范規(guī)定了有機同位素稀釋質譜法用于標準物質定值時,穩(wěn)定同位素標記有機化合物的選擇與添加、分離與檢測、定量校準、方法確認與質量控制等方面的要求,用于規(guī)范有機同位素稀釋質譜法在標準物質定值中的應用。本規(guī)范為首次發(fā)布。Ⅲ學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載JJF2109—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載標準物質定值技術要求有機同位素稀釋質譜法1

范圍本規(guī)范規(guī)定了有機同位素稀釋質譜法作為標準物質定值方法的技術要求,適用于指導基體標準物質的定值,也可以為其他標準物質的定值提供參考。2

規(guī)范性引用文件本規(guī)范引用了下列文件:JJF1001

通用計量術語及定義JJF1005

標準物質通用術語和定義JJF1059.1

測量不確定度評定與表示JJF1343

標準物質定值的通用原則及統(tǒng)計學原理JJF1507

標準物質的選擇與應用JJF1855

純度標準物質定值計量技術規(guī)范 有機物純度標準物質GB/T32465

化學分析方法驗證確認和內部質量控制要求GB/T35655

化學分析方法驗證確認和內部質量控制實施指南 色譜分析凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本規(guī)范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本

(包括所有的修改單)

適用于本規(guī)范。3

術語和定義s a

lJJF1001、JJF1005界定的及以下術語和定義適用于s a

l3.1

同位素標記有機化合物

iotopelbeedorganiccompound分子中一種或幾種原子被穩(wěn)定同位素取代的有機化合物。D注:標記的同位素原子通常為2H

(

)、13C、15N、17O、18O、33S、34S、37Cl、81Br等。Dc

s l

i3.2

有機同位素稀釋質譜法

c

s l

i在樣品中加入已知量的被測化

合

物

的

同

位

素

標

記

有

機

化

合

物,

混

合

均

勻

達

到

平

衡,用質譜測量樣品溶液和校準溶液中被測化合物與同位素標記有機化合物的響應比值,由此計算被測化合物含量的方法。4

方法原理將已知量的同位素標記有機化合

物

(以

下

簡

稱

“同

位

素

標

記

物”)加

入

到

待

測

樣

品中,充分混合平衡,經(jīng)必要的前處理和色譜分離后,測量樣品溶液中被測化合物和同位素標記物的質譜響應

(峰面積或峰高);

同

時

測

量

校

準

溶

液

中

被

測

化

合

物

和

同

位

素

標

記物的質譜響應,根據(jù)二者質譜響應比值、校準溶液中濃度比值和樣品中所加入同位素標記物的質量,計算得到樣品中被測化合物含量。1學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載JJF2109—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載5

同位素標記物的選擇5.1

標記元素類型與位置不同同位素元素標記的化合物性質可能存在差異,應盡可能選擇與被測化合物的溶解、離解、衍生反應動力學等特性一致的標記化合物,應明確同位素標記物中標記元素的位置,以確保同位素標記物的穩(wěn)定

性

(不

易

發(fā)

生

同

位

素

交

換

或

標

記

元

素

丟

失)。

必

要時,評估其與被測化合物的色譜保留、離子化效率、基質效應、提取與衍生效率等的差異。注:通常13C和15N標記物比較穩(wěn)定,13C標記物的理化性質變化較小。當D和18O標記在較活潑化學性質的位置時,可能產(chǎn)生同位素交換或標記元素丟失

(如羰基附近的

D-H

交換,氨基酸羧基上的18O原子可能與水中

O原子發(fā)生交換)。5.2

標記原子數(shù)量通常選擇標記原子數(shù)量≥3的同位素

標

記

物,

以

降

低

被

測

化

合

物

中13C或

D等

天

然同位素元素產(chǎn)生的

M+1、M+2等質譜峰信號重疊影響線性響應。標記原子數(shù)量較少時,需要對線性響應進行評估,必要時采用非線性模型校準,或采用高分辨質譜測量。標記原子數(shù)量較多時,可能會引起同位素

標

記

物

與

被

測

化

合

物

性

質

的

明

顯

差

異

(D標記時更加明顯)。必要時,評估其與被測化合物的色譜保留、離子化效率、基質效應、提取與衍生效率的差異。5.3

化學純度和同位素分布應選擇高化學純度或雜質不干擾測量的同位素標記物。必要時,需評估同位素標記物的同位素分布,并根據(jù)評估結果校正標記物添加量。當同位素標記物中含有被測

化

合

物

時,

需

評

估

對

測

量

結

果

的

影

響,

確

認

其

適

用

性,并進行校正和不確定度評估。9 90示例:當采用D-克倫特羅同

位素標記物時,測試目標同位素標記物

(D-克倫9 90羅)

分子的豐度,以校正

標

記

物

的

添

加

量;

測

試

非

標

記

克

倫

特

羅

(D-克

倫特羅)分子的豐度,以評估其對測量結果的影響。5.4

質譜定量離子通過質譜裂解過程分析,選擇合適的被測化合物與同位素標記物的定性、定量離子或離子對。zzz示例:克倫特羅D9主要特征碎

片

離子為m/

=204,

而克倫特羅

D6可能經(jīng)過不zzz的裂解過程產(chǎn)生兩個主要特征碎片離子m/

=203和m/

=204,因此選擇克倫特

羅

D6作為標記物時,需考察并謹慎選擇定量離子。6

同位素標記物的添加6.1

添加量應通過預實驗評估樣品中被測化合物的含量水平,以確定添加到樣品中同位素標記物的量。通常,同位素標記物添加量與樣品中被測化合物含量應接近,在被測化合物含2學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載JJF2109—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載量較低

(如接近定量限)

導致測量精密度低的情況下,可適當提高同位素標記物的添加量,以保證測量精密度達到預期水平。注:當樣品中被測化合物含量較高,同位素標記物添加量與其差異較大時,應進行評估以確認相關方法指標滿足預期要求。6.2

混勻平衡樣品中添加同位素標記物后應充分混勻和平衡,盡可能使同位素標記物與被測化合物在樣品中的存在狀態(tài)一致,然后進入樣品前處理程序。應考察同位素標記物添加和平衡方式等影響因素,如同位素標記物的溶劑、添加方式、平衡時間和平衡溫度等,盡可

能

使

被

測

化

合

物

和

同

位

素

標

記

物

在

樣

品

制

備、

提

取、凈化、分離、離子化和檢測過程中的狀態(tài)保持一致。7

分離與檢測7.1

聯(lián)用儀器要求液相色譜、氣相色譜、毛細管電泳等分離設備和單四級桿、三重四級桿、離子阱等質譜檢測器的聯(lián)用,均可用于有機同位素稀釋質譜分析。7.2

分離要求對復雜基體中有機化合物分析時,基體中主要干擾成分應盡可能與目標化合物分離;被測化合物和同位素標記物宜具有相同或相近的保留時間,以便在盡可能相同的質譜條件下檢測。注:液相色譜分離時,流動相組成可能會影響離子化效率;氣相色譜分離時,柱流失、載氣流速等會導致背景干擾;被測化合物和同位素標記物保留時間差距較大時,需評估對測量結果的影響。7.3

檢測要求應根據(jù)被測化合物特性,選擇測量靈敏度和特異性

(選擇性)

滿足要求的質譜儀類型,通過優(yōu)化儀器參數(shù)滿足被測化合物與同位素標記物測量的正確度和精密度要求。8

校準方法有機同位素稀釋質譜分析的定量校準方法主要包括校準曲線法、括弧法

(雙點校準法)、單點校準法和標準加入法等。8.1

校準曲線法校準曲線不少于5個濃度點

(不包含零點)

并大致等距離分布在測量范圍內,濃度范圍應覆蓋樣品中被測化合物含量范圍。應檢查儀器響應的漂移是否會引起測量偏差。配制同位素標記物濃度相同的系列被測化合物混合校準溶液,測量各含量水平下兩種化合物的質譜響應值,根據(jù)被測化合物與同位素標記物的響應比值與濃度比值,繪制線性校準曲線,得到校準曲線的斜率k與

截

距a。

線

性

相

關

系

數(shù)

應

盡

可

能

接

近

1,

線

性測量不確定度應滿足標準物質預期不確定度要求。根據(jù)樣品中被測化合物和同位素標記物的質譜響應比值和樣品中同位素標記物的添1加質量,按照公式

()

計算得到樣品中被測化合物含量。13學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載Cx =1-Cx =2-A' s-a

k ×m' ()A' s———樣學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載Cx =1-Cx =2-A' s-a

k ×m' ()A' s———樣品中被測化合物和同位素標記物的響應比值;-A lc hc l+c ×m'

M s ()A' s———樣品中被測化合物和同位素標記物的響應比值;A' l———低濃度校準溶液中被測化合物和同位素標記物的響應比值;A' h———高濃度校準溶液中被測化合物和同位素標記物的響應比值;

c h

———高濃度校準溶液中被測化合物和同位素標記物的濃度比值;

c l

———低濃度校準溶液中被測化合物和同位素標記物的濃度比值;Ass式中:Cx———樣品中被測化合物含量,μg/kg;Assm'———樣品中加入同位素標記物的質量,ng;sk

———校準曲線的斜率;a

———校準曲線的截距;Ms———樣品質量,g。8.2

括弧法

(雙點校準法)括弧法

(雙點校準法)

是校準曲線法的一種簡化模式,該方法可以將校準曲線非線性產(chǎn)生的誤差最小化。初步評估樣品中被測化合物含量后,制備兩個濃度水平的校準溶液,通常校準溶液中被測化合物濃度

分

別

為

樣

品

待

測

液

中

被

測

化

合

物

濃

度

的1.05倍

和0.95倍,校準溶液和樣品待

測液中同位素標記物的濃度盡可能一致,

被測化合物含量2通過線性內插法按照公式

()

計算得到樣品中被測化合物的含量。2As ' l's lA'

A'

' l's l

l'Ah Al

l'h l A' A'h l式中:Cx———樣品中被測化合物含量,μg/kg;AsAlAhchl'lc'sm'———樣品中加入同位素標記物的質量,ng;sMs———樣品質量,g。8.3

單點校準法a單點校準法也是校準曲線法的一種簡化模

式,

當

校

準

曲

線

截

距

(

)接

近

零

時,

可a以采用單點校準法。如果方法存在系

統(tǒng)

誤

差

(截

距

明

顯

偏

離

原

點),

應

采

用

校

準

曲

線

法或括弧法進行校準。4ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃ學兔兔ｗｏｍ標準下載×Cx =34A'c' ×m'

A' ×M s (ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃ學兔兔ｗｏｍ標準下載×Cx =34A'c' ×m'

A' ×M s ()A' s———樣品中被測化合物和同位素標記物的響應比值;

A' ———校準溶液中被測化合物和同位素標記物的響應比值;

c' ———校準溶液中被測化合物和同位素標記物濃度的比值;

Cx =a

k ×m'

M s ()3配制混合校準溶液時,校準溶液的濃度應與被測樣品溶液濃度接近,且被測化合物3和同位素標記物的濃度比值接近1。根據(jù)質譜響

應

比

值

與

濃

度

比

值,

添

加

同

位

素

標

記

物質量和樣品量,按照公式

()

計算得到樣品中被測化合物的含量。As

cssA式中:Cx———樣品中被測化合物含量,μg/kg;AsAcsm'———樣品中加入同位素標記物的質量,ng;sMs———樣品質量,g。8.4

標準加入法當不能獲得與樣品接近的空白基質樣品或同位素標記物與被測化合物基質效應差異較大時,可采用標準加入法消除或校正基質效應的影響。4稱取不少于5份相同質量待測樣品,均添加同位素標記物使之含量與被測化合物接4近,除一份樣品外其他樣品中再添加盡可能等距濃度梯度分布的系列被測化合物,充分混勻、平衡和前處理后,測量樣品中被測化合物和同位素標記物質譜響應。以各樣品中被測化合物與同位素標記物的響應比值為縱坐標,被測化合物添加量與同位素標記物添加量比值為橫坐標,繪制校

準

曲

線,

得

到

斜

率k

與

截

距a,

按照公式

()計算樣品中被測化合物的含量。s式中:Cx———樣品中被測化合物含量,μg/kg;k

———校準曲線的斜率;a

———校準曲線的截距;sm'———樣品中加入同位素標記物的質量,ng;sMs———樣品質量,g。9

方法確認與質量控制9.1

方法確認應根據(jù)標準物質量值與不確定度、用途等預期要求,確定同位素稀釋質譜法的正確度、精密度以及適用性、選擇性、線性范圍、穩(wěn)健度、檢出限和定量限等參數(shù)指標,并5學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載JJF2109—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載進行確認?？蓞⒖?/p>

GB/T32465、GB/T35655等相關標準。9.2

空白測量對試劑、實驗過

程、

空白樣品進行檢測,

確定被測化合物和同位素標記物背景干擾,并進行必要的修正。9.3

基質效應應充分考慮和評估被測化合物和同位素標記物的基質效應,并通過優(yōu)化前處理、色譜質譜條件和定量校準方法等方式降低或校正基質效應。不同基體樣品、不同來源的同一類基體樣品均需要進行基質效應評估。多目標同時測量時,需要評估各被測化合物的基質效應。必要時采用基質匹配校準溶液定量校準,無法獲得匹配的空白基質時,應采用標準加入法校準。9.4

方法可靠性評價應采用與被測樣品基質類似的基體標準物質,或通過相關計量比對等方式評價方法的可靠性。10

計量溯源性說明應根據(jù)方法原理和測量模型,

將

測

量

結

果

溯

源

至SI單

位

或

具

有計量溯源性的測量標準及標準物質。有機同位素稀釋

質

譜

法

計

量

溯

源

性

關

鍵

點

在

于:

校

準

標

準

的

溯

源

性;校準溶液配制過程的溯源性;稱量、溶液移取、檢測等過程使用儀器設備的溯源性。應按照JJF1507選用具有溯源性的有證標準物質作為校準標準。

無相應有證標準物質時,應按照JJF1343和JJF1855等確

認

校

準

標

準

的

量

值

和

不

確

定

度。

校

準

溶

液

制備以及色譜質譜測量過程所用的設備,應經(jīng)過計量檢定或校準。11

標準物質定值要求11.1

一家實驗室定值由一家實驗室采用同位素稀釋質譜法對標準物質進行定值時,應有證據(jù)證明該方法具有最高計量學品質

(即溯

源

性

明

確、

各

輸

出

量

均

可

由SI單

位

表

示、

無需引入經(jīng)驗校正因子、被測量和包含在測量等式中的輸入量間沒有相關性影響、相對于其預期用途特性值不確定度水平應足夠小等);

在

有

條

件

的

情

況

下,

應

參

加

國

際

計

量

比

對,

以

取

得

方法的國際等效,證明方法的有效性并滿足預期要求。標準物質定值應由兩個或兩個以上有能力執(zhí)行方法操作程序、保證測量結果有效的分析者獨立進行測量,并盡量使用不同的儀器設備,每個分析者提供至少6個獨立數(shù)據(jù)。除了采用同位素稀釋質譜法測量,可采用另一獨立測量程序開展測量確認,證明測量無過失誤差。由于同位素稀釋質譜

法

得

到

的

測

量

結

果

通

常

具

有

更

好

的

不

確

定

度

水

平,無需合并驗證測量方法得到的測量結果。11.2

其他定值模式當單一實驗室或多家有能力的實驗室采用兩種或兩種以上

(包含同位素稀釋質譜法)

可證明準確度的方法定值,或者多家實驗室采用同位素稀釋質譜法合作定值時,按6ｏｍ標準下學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃ載n

()JJF2109—2024ｏｍ標準下學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃ載n

()照JJF1343要求執(zhí)行。12

不確定度評定及表述同位素稀釋質譜法的

定值結果應參考

JJF1059.1進行不確定度評定,

測量不確定度一般由若干分量組成。u 5n其中一些分量可根據(jù)一系列測量值的統(tǒng)計分布進行評定,可用標準偏差表征u 5n標準不確

定度

(1,rel)通常為測量結果平均值的相對標準偏差

(RSD)除以測量次數(shù)()

的平方根,計算見公式

()。u1,rel=RSD 5uu另一些分量以非統(tǒng)計分析的

方

法

評

定,

包

括

評

定

標

準

物

質

純

度

或

濃

度、

樣

品

制

備、uu校準溶液制備等因素或者過程引入的不確定度。標準曲線法、括弧法、單點法和標準加入法等定量校準方法的不確定度分量

(2,rel)

來源參照附錄B。

結

果

的

相

對

合

成

標

準

不確定度

(rel)

如下:相對擴展不確定度:

6 7kurel=

u21,rel+u22,rel

6 7kUrel=k×urel(=2)

()7ｗｗ．ｂｚｆ兔ｗｘｗ．ｃｏｍ標準下學兔載

Kx -s×100% ｗｗ．ｂｚｆ兔ｗｘｗ．ｃｏｍ標準下學兔載

Kx -s×100% (A.1)

Ki -s×100% (A.2)

Ax -s×100% (A.3)

Ai -s×100% (A.4)附錄A基質效應評估方法建立同位素稀釋質譜定值方法時,應評估被測化合物和同位素標記物間是否存在基質效應差異及其差異程度。必要時需采取校正措施,評定其引入的不確定度?；跇藴饰镔|定值校準模型,基質效應可以采用校準曲線斜率、單點質譜響應等模式評估。a)

校準曲線斜率模式:取空白樣品或待測樣品經(jīng)前處理后的待測液和空白溶劑,分別配制被測化合物和同位素標記物的系列基質匹配校準溶液和溶劑校準溶液,并分別繪制校準曲線

(或者標準加入法校準曲線),通過與相應校準溶液標準曲線斜率的比值,評估基質效應。見公式

(A.1)

和公式

(A.2)。iMEx=Kx-miME

=Ki-m式中:iMEx

———被測化合物的基質效應系數(shù);iME ———同位素標記物的基質效應系數(shù);Kx-m———基質匹配校準溶液中被測化合物校準曲線斜率;Kx-s

———校準溶液中被測化合物校準曲線斜率;Ki-m

———基質匹配校準溶液中同位素標記物校準曲線斜率;Ki-s

———校準溶液中同位素標記物校準曲線斜率。b)

單點質譜響應模式:采用單點法

定

量

校

準

模

式

時,

可

以

采

用

單

點

質

譜

響

應

評

估方法,通過比較特定濃度水平下被測化合物和同位素標記物在基質匹配校準溶液和校準溶液的質譜響應值,評估基質效應。見公式

(A.3)

和公式

(A.4)。iMEx=Ax-miME

=Ai-m式中:iMEx

———被測化合物的基質效應系數(shù);iME ———同位素標記物的基質效應系數(shù);Ax-m

———基質匹配校準溶液中被測化合物的單位濃度質譜響應;Ax-s

———校準溶液中被測化合物的單位濃度質譜響應;Ai-m

———基質匹配校準溶液中同位素標記物的單位濃度質譜響應;Ai-s

———校準溶液中同位素標記物的單位濃度質譜響應。c)

被測化合物和同位素標記物間的基質效應差異,

按公式

(A.5)采用基質效應因子θ評估。8學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載MEi

(A.5)JJF2109—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載MEi

(A.5)θ=

MEx式中:θ ———被測化合物與標記物間的基質效應因子;iMEx———被測化合物的基質效應系數(shù);iME

———同位素標記物的基質效應系數(shù)。根據(jù)測量不確定度預期水平,評估θ值是否可以接受,評估是否需要作為不確定

度來源。不能接受的情況下,可采用基質匹配校準方法或者標準加入法進行定量校準,以降低基質效應的影響。9不確定度分量來源說明量化依據(jù)AsA's樣品中被測化合物與同位素標記物峰面積比值儀器測量相對標準偏差AlA'l低濃度校準溶液中被測化合物與同位素標記物峰面積比值儀器測量相對標準偏差AhA'h高濃度校準溶液中被測化合物與同位素標記物峰面積比值儀器測量相對標準偏差ch高濃度校準溶液中被測化合物濃度稱量、定容、移取cl低濃度校準溶液中被測化合物濃度稱量、定容、移取c'h高濃度校準溶液中同位素標記物濃度稱量、定容、移取c'l低濃度校準溶液中同位素標記物濃度稱量、定容、移取m's樣品中同位素標記物質量稱量、定容、移取Ms樣品質量稱量不確定度分量來源說明量化依據(jù)As樣品中被測化合物峰面積儀器測量相對標準偏差A's樣品中同位素標記物峰面積儀器測量相對標準偏差k,a校準曲線線性擬合m's樣品中同位素標記物質量稱量、定容、移取Ms樣品質量稱量不確定度分量來源說明量化依據(jù)AsA's樣品中被測化合物與同位素標記物峰面積比值儀器測量相對標準偏差表B.1

表B.1

校準曲線法表B.2

括弧法

(雙點校準法)表B.3

單點校準法10．ｃｏｍ標ｗｗ．ｂｚｆｘｗ兔學兔ｗ準下載JJF2109—2024．ｃｏｍ標ｗｗ．ｂｚｆｘｗ兔學兔ｗ準下載附錄B不同校準方法測量結果的不確定度分量有機同位素稀釋質譜法可采用

校

準

曲

線

法、

括

弧

法

(雙

點

校

準

法)、

單

點

校

準

法

和標準加入法進行定量校準,標準物質、稱量、校準溶液制備、曲線擬合等不確定度分量,應分別按照表B.1~表B.4進行不確定度分量評估。不確定度分量來源說明量化依據(jù)AA'校準溶液中被測化合物與同位素標記物峰面積比值儀器測量相對標準偏差c校準溶液中被測化合物濃度稱量、定容、移取c'校準溶液中同位素標記物濃度稱量、定容、移取m's樣品中同位素標記物質量稱量、定容、移取Ms樣品質量稱量不確定度分量來源說明量化依據(jù)k,a校準曲線線性擬合m's樣品中同位素標記物質量稱量、定容、移取Ms樣品質量稱量學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載JJF2109—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載表B.3表B.3(續(xù))表B.4

標準加入法學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載JJF2109—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載附錄C有機同位素稀釋質譜法應用示例———

“豬肉粉中克倫特羅”(有證標準物質 GBW10135)

的定值(C.1

儀器與試劑C.1.1

儀器1)

液相色譜高分辨質譜

(HPLC-HRMS);2)

高效液相色譜三重四極桿串聯(lián)質譜

(HPLC-MS/MS);3)

高效液相色譜二極管陣列檢測器

(HPLC-DAD);4)

天平

(分度值0.001

mg,分度值0.1

mg);5)

勻漿機;6)

渦旋混合器;7)

離心機;8)

陽離子固相萃取柱;9)

水浴氮吹儀。C.1.2

試劑與樣品1)

鹽酸克倫特羅純度標準物質

[CLB,GBW

(E)061890,99.0%,U=0.6%,k=2];2)

鹽酸克倫特羅同位素標記物

(鹽酸克倫特羅-D9,CLB-D9,純度>99.7%;鹽酸克倫特羅-D6,CLB-D6,純度>99.8%);3)

甲醇、乙腈

(色譜純);4)

甲酸

(分析純);5)

超純水;6)

豬肉粉中克倫特羅成分分析標準物質

(GBW10135)。C.2

穩(wěn)定同位素標記化合物的準備C.2.1

同位素分布和化學純度采用

HPLC-HRMS分析同位素標

記物,蠕動泵流動注射100μg/kg

的同位素標記物甲醇溶液,采集1

min總離子流圖

(TIC),隨

機

選

擇

10

張

質

譜

圖,

依

據(jù)FullMS

質譜圖中的目標被測化合物及其可能雜質

(不同氘代數(shù)物質)

的質譜峰平均強度,計算其歸一化后百分比,得到CLB-D9和CLB-D6的同位素分布。采用

HPLC-DAD測

定

2

個

標記物的化學純度。結果見表C.1。12標記化合物純度M-D0M-D4M-D5M-D6M-D7CLB-D699.90.14±0.020.51±0.048.17±0.1391.19±0.13———標記化合物純度M-D0M-D6M-D7M-D8M-D9CLB-D999.80.49±0.030.21±0.030.92±0.069.23±0.2189.15±0.22化合物分子離子(m/z)碎片離子(m/z)CLB277.1259.1,203.0,168.0,132.1CLB-D6283.1265.1,204.0,203.0,168.0,132.1CLB-D9286.1268.1,204.0,168.0,132.1學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載JJF2109—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載表C.1

CLB-D6和CLB-D9的同位素分布和純度單位為%C.2.2

質譜特征離子zzzz采用

HPLC-MS/MS

采

集CLB-D9、CLB-D6和CLB的

質

譜

碎

片單位為%C.2.2

質譜特征離子zzzz在碎裂過程中產(chǎn)生m/

=204.0、m/

=203.0

兩

個

強

度

接

近

特

征

離

子,CLB-D9產(chǎn)

生

穩(wěn)定的m/

=204.0特征離子,質譜響應強度與CLB的

特

征

離

子m/

=203.0

差

異

較

小,因此選擇CLB-D9作為同位素稀釋劑。表C.2

3種化合物的準分子離子和特征碎片離子C.2.3

標記物添加比例確定及平衡時間采用表C.2

3種化合物的準分子離子和特征碎片離子C.2.3

標記物添加比例確定及平衡時間位素分布、純度以及其定量離子對質

譜

響

應,

重

量

法

配

制CLB-D9校

準

溶

液,

使

其

質

譜響應與目標物CLB的比值在0.95~1.05。比較樣品中添加同位素標記物后立即前處理、平衡1h、2h、6h、12h和

24h后前處理及

HPLC-MS/MS測定,發(fā)現(xiàn)1h后測定結果已經(jīng)穩(wěn)定,確定平衡

時

間

為

不

少

于1h。C.3

樣品前處理C.3.1

提取4稱取樣品0.5g

(準確至0.0001g),加1.5g水復溶,加入適量CLB-D9標

記

物

溶4液,渦旋混勻后放置1h。加5mL水,14000r/min勻漿1min,用5mL水清洗刀頭,合并清洗液與勻漿液。加0.1%甲酸乙腈溶液10mL,渦旋混合2min。12000r/min(

℃)

冷凍離心15

min,收集上清液過0.45μm

聚醚砜濾膜,待凈化。C.3.2

凈化2陽離子固相萃取柱依

次

經(jīng)

8mL甲

醇、8mL水、8mL0.2%

甲

酸水溶液活化。

提2取液全部上

樣,

分別用0.2%甲酸水溶液和50%甲醇水溶液各8mL淋洗,抽干,用8

mL正己烷淋洗、抽干。用5%氨化乙酸乙酯:甲醇

(

∶1,V/V)溶

液

10mL洗

脫。洗脫液在45

℃水浴下氮吹至近干,用0.1%甲酸水溶液2mL復溶,過0.22μm

聚醚砜濾膜,供

HPLC-MS/MS檢測。13化合物定量離子對CE/V定性離子對CE/V保留時間/minCLB277.1/203.025277.0/168.0453.3CLB-D9