傳染性法氏囊病卵黃抗體效價的測定課件_第1頁
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文檔簡介

技能訓(xùn)練10

傳染性法氏囊病卵黃抗體效價的測定掌握雞傳染性法氏囊病卵黃抗體效價的測定方法實訓(xùn)目標氯化鈉、瓊脂粉、培養(yǎng)皿、打孔器、酒精燈、雞蛋、96孔血凝板、微量移液器、燒杯、帶蓋瓷盤、注射器、生理鹽水、蒸餾水、標準抗原等儀器設(shè)備方法步驟（一）1%瓊脂平板制備（二）稀釋卵黃（三）加樣（四）反應(yīng)（一）1%瓊脂平板制備1.制板：用8～10%氯化鈉溶液配制1%瓊脂溶液，電爐加熱使之充分溶化后，倒入直徑90mm培養(yǎng)皿，制成厚度為2.5～3mm瓊脂平板；平置，在室溫下冷卻凝固后打孔。2.打孔：在瓊脂板上按7孔一組的梅花形打孔（中間1孔，周圍6孔），孔徑5mm，孔距2～5mm，將孔內(nèi)的瓊脂用8號針頭斜面向上輕輕將瓊脂挑出，勿傷邊緣或使瓊脂層脫離皿底。一般打孔兩組。（二）稀釋卵黃先用微量移液器在96孔血凝板加生理鹽水，每孔50微升，共加1~12孔；再于第一孔加50微升卵黃，倍比稀釋至12孔。（三）加樣中央孔加入傳染性法氏囊病病毒標準抗原，加樣量以“滿而不溢”為原則。用微量移液器小心的將96孔血凝板中不同濃度卵黃液小心加至瓊擴板的周邊孔上，血凝板孔號與瓊擴板孔號要一一對應(yīng)，加樣從低濃度開始加樣，每加一個濃度，吸嘴盡量噴干凈（四）反應(yīng)將瓊擴板靜置1～2min，加蓋、倒置入濕盒中，放入37℃的溫箱中24～48h。（五）結(jié)果判斷24～48h后，觀察出現(xiàn)白色沉淀線的卵黃稀釋度，即是IBD抗體效價。

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