基于紅外光譜和液相色譜法的老瓜頭中生物堿的對(duì)比研究

基于紅外光譜和液相色譜法的老瓜頭中生物堿的對(duì)比研究

老瓜頭是科喬木科的一種植物，也被稱為cynanchumkomaroviizai。這是一種多年生灌木。植株高20.50厘米，沒(méi)有毛發(fā)。對(duì)生，細(xì)長(zhǎng)的橢圓形或針狀；莖呈圓柱形，洋蔥綠色；根的下部為紫色，每年秋天會(huì)落葉，土壤部分會(huì)枯萎。第二年春天，新的樹(shù)枝和葉子會(huì)變成黑色。老瓜頭生長(zhǎng)在沙漠和黃土山區(qū)，主要分布在寧夏、內(nèi)蒙古、甘肅等?。▍^(qū)），寧夏集中在26.684hm2。老瓜頭全草均可入藥,性苦、溫,有毒.民間偏方中記載,將老瓜頭全草水煎,煎水含漱或外洗,可治療各種關(guān)節(jié)炎、牙痛、禿瘡等病癥.在1976年以前,老瓜頭一直被看做是草原上的一種害草,要定期鏟除.后來(lái)人們發(fā)現(xiàn)老瓜頭是一種較好的蜜源植物,其蜂蜜質(zhì)量屬中、上等.到了20世紀(jì)80年代后期開(kāi)始對(duì)其藥用活性成分進(jìn)行研究.基于老瓜頭主要生長(zhǎng)在生態(tài)環(huán)境惡劣地區(qū),通常又為全草入藥,我們?cè)噲D探索能否采用地上枝葉而非全草采挖的可能性,以解決好開(kāi)發(fā)利用與生態(tài)環(huán)境兼顧的問(wèn)題，由此將老瓜頭植物分成根莖和枝葉兩個(gè)部分并對(duì)其總生物堿組分進(jìn)行對(duì)比研究.1實(shí)驗(yàn)1.1草、葉片、碎段的制備于寧夏靈武縣境內(nèi)8月份采集老瓜頭全草,分成根莖和枝葉兩個(gè)部分,曬干、粉碎成0.5cm左右的碎段備用.標(biāo)本由寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院馬德滋教授鑒定.1.2試劑乙醇(工業(yè)級(jí))、氯仿、乙醚、甲醇、氫氧化鈉、鹽酸等均為分析純,Mayer試劑、磷鎢酸試劑等為自配溶液.1.3磷集中物的制備紅外光譜儀:P-E公司580B;液相色譜儀:國(guó)產(chǎn)ZSB—3(天津分析儀器廠);色譜柱:φ40×300mm,φ25×250mm;硅膠10～40μm;紫外檢測(cè)器:254nm,280nm.1.4生物堿樣品的提取過(guò)程將樣品去雜并粉碎成0.5cm左右碎段備用,裝罐用酸乙醇(乙醇加酸0.5%～1%)泡1～2d,過(guò)濾分離出濾液,用稀堿液中和至pH為6～7,減壓濃縮回收溶劑;用1%～1.5%酸性水溶液反復(fù)洗滌濃縮物,至洗滌液對(duì)磷鎢酸試劑不再有沉淀反應(yīng);用氯仿萃取酸性洗滌液,用稀堿液將水相中和至pH為8～9;用氯仿萃取中和后的水相,至水相對(duì)磷鎢酸試劑不再有沉淀反應(yīng),分別濃縮萃取液.經(jīng)對(duì)比分析發(fā)現(xiàn),酸萃取物與堿萃取物的組成差別不大,因此,合并處理.這一過(guò)程提取出的總生物堿組分,仍含有較多的非生物堿成分,必須進(jìn)行進(jìn)一步的純化處理.其過(guò)程如下:先用乙醇溶解粗總生物堿,并過(guò)濾去除不溶物,再加入不溶性溶劑使生物堿沉淀,靜置后離心分離,自然通風(fēng)干燥.2瓜頭葉中總核苷酸的提取經(jīng)再次精制得到黃色粉末狀的總生物堿組分,根莖部分的提取率為0.1%～0.2%，老瓜頭枝葉部分的總生物堿的提取亦按上述過(guò)程進(jìn)行,枝葉中總生物堿的提取率為0.1%左右.2.1老瓜頭葉輪和葉片總衍生物的紅外光譜將上述方法提取得到的老瓜頭根莖總生物堿與其枝葉中提取得到的總生物堿,用紅外光譜法和液相色譜法進(jìn)行對(duì)比分析以確定其組成情況.在老瓜頭根莖總生物堿的紅外光譜(IR)圖上,可看到在3400cm-1處有羥基的VO-H吸收;在2940cm-1,2830cm-1處有甲基、亞甲基的VC-H吸收;在1630cm-1,1520cm-1處有芳香環(huán)骨架的VC=C吸收;在1470cm-1,1420cm-1處有甲基、亞甲基的變形VC-H吸收;在1035cm-1處有VC-o-C吸收.在老瓜頭枝葉總生物堿的紅外光譜(IR)圖上,同樣可以看到在3400cm-1處有羥基的VO-H吸收;在2940cm-1,2840cm-1處有甲基、亞甲基的VC-H吸收;在1630cm-1,1420cm-1處有芳香環(huán)骨架的VC-H吸收;在1465cm-1,1420cm-1處有甲基、亞甲基的變形VC-H吸收;在1035cm-1處有VC-H吸收.圖中顯示出的差異是在1260m1,1235cm-1,1205cm-1處以及700～850cm-1處的吸收峰強(qiáng)弱有一些差別和峰形有所不同.為了進(jìn)一步確認(rèn)老瓜頭枝葉和根莖生物堿組成的差異,我們又進(jìn)一步采用液相色譜分析進(jìn)行了驗(yàn)證.2.2液相色譜對(duì)比分析通過(guò)進(jìn)一步的分離制備和各種波譜綜合分析,我們確定了液相色譜各峰的化合物成分,結(jié)果如圖1和圖2所示(因?yàn)樽鰧?duì)比分析,故對(duì)應(yīng)的峰號(hào)相同).峰1:5-羥甲基糠醛,MW126,分子式C6H6O3;峰2:僅確定骨架結(jié)構(gòu),MW377,分子式C24H27NO3;峰3:未定;峰4:異娃兒藤寧(14-Hydroxyantofine),MW379,分子式C23H25NO4;峰5:異去羥娃兒藤寧(Antofine),MW363,分子式C23H25NO3;峰6:僅確定骨架結(jié)構(gòu),分子量361,分子式C23H23NO3.通過(guò)對(duì)比,我們發(fā)現(xiàn)老瓜頭枝葉的總生物堿的組成與老瓜頭根莖的總生物堿的組成僅僅在峰1,峰2以及相連的肩峰和峰6的相對(duì)含量上存在差異,但總體組成差異不大.這與紅外光譜分析得出的結(jié)果是一致的.3可長(zhǎng)期生物過(guò)程綜合利用的植物本研究通過(guò)對(duì)老瓜頭枝葉和根莖中所含生物