腫瘤淋巴管生成與淋巴道轉(zhuǎn)移的研究進(jìn)展

腫瘤淋巴管生成與淋巴道轉(zhuǎn)移的研究進(jìn)展

0腫瘤淋巴管內(nèi)皮標(biāo)記物腫瘤的快速生長有賴于充足的血液供應(yīng)，它通過血液和淋巴液轉(zhuǎn)移。因此，腫瘤微脈管系統(tǒng)的產(chǎn)生及其對腫瘤的生物學(xué)行為的研究引起了人們的關(guān)注。其中，對腫瘤血管生成的研究較早，取得了許多成果。然而，對腫瘤移植的科學(xué)研究相對緩慢，對可靠的淋巴管內(nèi)標(biāo)物的缺乏是重要原因。近年來，隨著組織胚胎的深入研究，在該領(lǐng)域發(fā)現(xiàn)了一些特定的淋巴管標(biāo)志。1內(nèi)插入式皮革標(biāo)志1.1vegfr-3與腫瘤淋巴管生成VEGFR-3是第一個被驗(yàn)證的淋巴管標(biāo)記物.它是一種酪氨酸激酶受體.由人類白血病細(xì)胞系和人胎盤克隆而來,其配體血管內(nèi)皮生長因子-C(VEGF-C)和血管內(nèi)皮生長因子-D(VEGF-D)是淋巴管內(nèi)皮生長的重要調(diào)節(jié)因子.在胚胎早期,VEGFR-3存在于部分血管內(nèi)皮細(xì)胞,VEGFR-3缺失的小鼠因原始血管叢發(fā)育異常及大血管缺陷在妊娠中死亡.到發(fā)育晚期,VEGFR-3富集并僅存在淋巴管.研究發(fā)現(xiàn)VEGFR-3主要表達(dá)于正常成人組織和胚胎的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞,但在腫瘤血管、視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞中也有表達(dá),因而其特異性不明顯.在某些病理狀態(tài)下,VEGFR-3能被重新激活而發(fā)揮促血管生成活性.VEGF-C,VEGF-D的過度表達(dá)或VEGF-C的特異性突變能誘導(dǎo)轉(zhuǎn)基因鼠淋巴管網(wǎng)的增生.經(jīng)VEGF-C轉(zhuǎn)染的人類雌激素依賴的乳腺癌細(xì)胞株MCF-7-VEGF-C種植于裸鼠,用抗VEGFR-3的mAb對腫瘤淋巴管進(jìn)行免疫組化標(biāo)記,發(fā)現(xiàn)VEGF-C的過度表達(dá)刺激腫瘤淋巴管生成并誘導(dǎo)瘤細(xì)胞向局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移.研究發(fā)現(xiàn),VEGF-C和VEGF-D均可與其受體VEGFR-3結(jié)合,特異性地促進(jìn)新生淋巴管形成.除VEGF-C和VEGF-D外,其他生長因子在淋巴管生成中亦起著一定的作用.胰島素樣生長因子(IGF)也可直接誘導(dǎo)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移,此過程不依賴于VEGFR-3通路,而由IGF特異性受體介導(dǎo).值得一提的是腫瘤相關(guān)的炎癥細(xì)胞如巨噬細(xì)胞,也能表達(dá)VEGF-C和VEGF-D,可能在腫瘤淋巴管生成中具有重要作用.1.2淋巴管標(biāo)記物43000的膜蛋白,因最初發(fā)現(xiàn)表達(dá)在腎小球足突細(xì)胞而得名.起控制足細(xì)胞形成的作用.先前認(rèn)為它只表達(dá)于小淋巴管內(nèi)皮,目前研究顯示皮膚某些血管內(nèi)皮細(xì)胞也可表達(dá)Podoplanin,但其他器官和組織的血管內(nèi)皮未發(fā)現(xiàn)其表達(dá).因此,認(rèn)為該蛋白是目前較理想的淋巴管標(biāo)記物.1.3lyvd-1的現(xiàn)實(shí)意義LYVE-1是位于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞上的含有322個氨基酸殘基的膜蛋白.與CD44糖蛋白同源,均勻分布于淋巴管內(nèi)外腔面,可與細(xì)胞外基質(zhì)的葡萄糖胺聚糖透明質(zhì)酸結(jié)合,具有從組織攝取透明質(zhì)酸鹽并轉(zhuǎn)運(yùn)至淋巴液的作用.多數(shù)研究顯示LYVE-1僅特異性地表達(dá)于腫瘤相關(guān)淋巴管內(nèi)皮和肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞.曾一度認(rèn)為其是淋巴管特異性的標(biāo)記物,但近期發(fā)現(xiàn),腫瘤內(nèi)約有10%的LYVE-1陽性脈管是血管.2vegf-c與vegf-d的相互作用研究表明,VEGF-C和VEGF-D是目前公認(rèn)的主要淋巴管生成因子.在轉(zhuǎn)基因鼠和其他體外模型已證實(shí)其主要通過VEGFR-3信號途徑誘導(dǎo)淋巴管生成.最近Karkkainen等發(fā)現(xiàn),完全缺乏VEGF-C的鼠在出生前即死亡,而VEGF-C呈不同形式缺陷的鼠出生后常產(chǎn)生腹腔乳糜液聚集,提示VEGF-C的單一功能不全即可影響淋巴管的發(fā)育.VEGF-C和VEGF-D最初為一種前脯氨酸多肽產(chǎn)物,經(jīng)過蛋白水解處理可提高其與VEGFR-3的親和力,主要呈現(xiàn)誘導(dǎo)淋巴管生成作用.Papoutsi等對C6膠質(zhì)瘤及10AS胰腺癌細(xì)胞的研究表明,后者表達(dá)較高的VEGF-C并能誘導(dǎo)淋巴管向腫瘤內(nèi)部呈現(xiàn)放射狀生長,提示充足數(shù)量和質(zhì)量的淋巴管生成因子對腫瘤淋巴管的生長是非常重要的.以上研究表明,VEGF-C既可產(chǎn)生于癌細(xì)胞,又可產(chǎn)生于基質(zhì)細(xì)胞,并通過自分泌或旁分泌模式發(fā)揮作用,當(dāng)其產(chǎn)生的量達(dá)一定程度時,即可誘導(dǎo)淋巴管生成,并介導(dǎo)癌細(xì)胞的淋巴道轉(zhuǎn)移.3腫瘤淋巴管及其mrna的表達(dá)研究均證實(shí),癌細(xì)胞局部淋巴結(jié)播散為諸多實(shí)體腫瘤進(jìn)展的一種早期事件,而淋巴管又是癌播散的主要途徑.大量研究表明,腫瘤的新生淋巴管主要表現(xiàn)為瘤周和瘤內(nèi)兩部分.Skobe等應(yīng)用基因轉(zhuǎn)染方法,使乳腺癌細(xì)胞表達(dá)VEGF-C,然后將其接種于裸鼠,結(jié)果證實(shí),在轉(zhuǎn)VEGF-C基因鼠腫瘤中,可見許多小淋巴管分布于腫瘤組織中,而對照鼠腫瘤中則只見淋巴管僅深入腫瘤約2mm,前者淋巴管密度大約是后者的4.6倍,VEGFR-3的表達(dá)也相應(yīng)增多,并且這種增生的淋巴管中常包含腫瘤細(xì)胞.應(yīng)用免疫熒光染色方法也證實(shí),表達(dá)VEGF-C的腫瘤發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機(jī)會較對照組增加了60%以上,說明VEGF-C可促進(jìn)腫瘤的局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移.Shields等對原發(fā)性頭頸部鱗癌和黑色素瘤研究發(fā)現(xiàn)這些腫瘤內(nèi)的確存在淋巴管.采用淋巴管特異標(biāo)記物L(fēng)YVE-1對口腔癌染色顯示,腫瘤組織中含有高密度LYVE-1陽性淋巴管,并與局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān).采用Podoplanin作為淋巴管標(biāo)記物對人體乳腺癌染色也顯示淋巴管生成與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān),提示瘤組織內(nèi)及瘤周可能具有新生淋巴管,并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān).Kitadai等用實(shí)時定量PCR(real-timequantitativePCR)方法檢測了39例胃癌活檢組織中VEGF-C,VEGF-D,VEGFR-3,Podoplanin的mRNA表達(dá)水平,并Podoplanin免疫組化標(biāo)記LVD(lymphaticvesseldensity),結(jié)果顯示,VEGF-C,VEGFR-3和PodoplaninmRNA在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組高表達(dá),均與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),LVD(CD34-/Podoplanin+)也與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),因此,在胃癌活檢組織中定量檢測VEGF-C,VEGFR-3,Podoplanin的mRNA水平對預(yù)測胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有重要的臨床價值.Shida等最近利用RT-PCR方法對臨床胃癌組織研究分析,發(fā)現(xiàn)VEGF-CmRNA的高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān),并認(rèn)為VEGF-C表達(dá)是臨床評價胃癌淋巴侵襲、擴(kuò)散指標(biāo)之一,提示不良預(yù)后.臨床上常見到不同類型的腫瘤呈現(xiàn)不同的遠(yuǎn)處器官播散形式,提示不同腫瘤的轉(zhuǎn)移灶形成也許存在一種導(dǎo)向過程.一些研究顯示淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞可通過分泌趨化因子吸引腫瘤細(xì)胞,從而主動促進(jìn)腫瘤淋巴管轉(zhuǎn)移.目前發(fā)現(xiàn)次級淋巴樣趨化因子(SLC/CCL21)高表達(dá)于淋巴結(jié)、微靜脈特定的內(nèi)皮細(xì)胞和T細(xì)胞豐富區(qū),也表達(dá)于多種器官的淋巴管內(nèi)皮.總之,人體某些腫瘤可形成新生淋巴管,而腫瘤相關(guān)淋巴管對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是必須的.采用動物模型,通過阻斷VEGFR-3信號可抑制淋巴管生成,或通過中和趨化因子(如SLC/CCL21)可抑制癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移.目前腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移機(jī)制尚不十分清楚,也不可能只