非小細胞肺癌EGFR基因突變檢測課件整理

非小細胞肺癌EGFR基因突變檢測完整編輯ppt非小細胞肺癌EGFR基因突變檢測完整編輯ppt主要內(nèi)容EGFR檢測的背景及意義EGFR檢測的標本類型EGFR檢測的臨床開展及成功關鍵完整編輯ppt主要內(nèi)容EGFR檢測的背景及意義完整編輯ppt肺癌精準醫(yī)學是精確診斷與靶向治療的結合精確診斷靶向治療分子靶點藥物EGFR吉非替尼、厄洛替尼、?？颂婺帷⒎ㄌ婺?、CO-1686,AZD9291ALK克唑替尼、AlectinibMetTivantinib(ARQ197),Onartuzumab(MetMab)Cabozantinib(XL184)FGFR1Nintedanib,XL999HER-2阿法替尼RET/ROS融合基因克唑替尼,AP26113,ASP3026RAS/MAPK通路Trametinib(GSK1120212)，Pimastertib，Refametinib,TAK733……PI3K/PTEN/AKTBEZ235,XL-765……PD-1/PDL-1Nivolumab,MPDL3280AHSP90…..GanetespibLiTH,etal.JClinOncol2013;31:1039-1049.VariS,etal.ExpertOpinDrugDiscov2013;8(11):1381-1397.完整編輯ppt肺癌精準醫(yī)學是精確診斷與靶向治療的結合精確診斷多部權威指南強調(diào)治療前的EGFR突變檢測ASCO2015指南：考慮用EGFRTKI進行一線治療的非小細胞肺癌患者應該進行腫瘤EGFR突變檢測來確定適合一線使用EGFRTKI還是一線使用化療藥物治療。

ESMO2015指南：進行個體化治療決定前應有足夠的組織材料進行組織學診斷和分子檢測在疾病進展時應考慮重新檢測應當系統(tǒng)分析EGFR突變狀態(tài)——在晚期非小細胞肺癌患者組織中進行標準檢測A].NCCN2016指南：對晚期非鱗NSCLC及不吸煙/小標本鱗癌的治療強調(diào)了治療前必須檢測EGFR/ALK，并指出“多重/下一代測序項目應該包含這2個靶點的檢測”中國原發(fā)性肺癌診療規(guī)范（2016版）在推薦所有NSCLC患者的腫瘤組織都應進行EGFR基因突變檢測基礎上，補充了如果腫瘤標本不可評估可使用從血液（血漿）標本中獲得的ctDNA進行評估.完整編輯ppt多部權威指南強調(diào)治療前的EGFR突變檢測ASCO2015指南EGFR基因突變和EGFR靶向治療中國肺腺癌驅動基因突變圖譜NSCLC中藥物療效相關的EGFR突變研究RR中位PFSIPASS71.2%vs47.3%9.8vs6.4月First-SIGNAL84.6%vs37.5%8.4vs6.7月WJTOG340562.1%vs32.2%9.6vs6.6月NEJGSG00273.7%vs30.7%10.8vs5.4月OPTIMAL83%vs36%13.1vs4.6月EURTAC58%vs15%9.7vs5.2月LUX-LUNG361%

vs22%11.1vs6.9月LUX-LUNG667%vs23%11.0vs5.6月八項隨機研究奠定了TKI在EGFR基因突變陽性患者中一線治療的地位NCCNGuidelinesVersion3.2016Non-SmallCellLungCancerMoketal.,2008;Kimetal.,2008;Hirschetal.,2006突變類型所占比例對EGFR-TKI敏感性19del;L858R~90%敏感G719X;L861Q;S768I~7%亞敏感T790Malone;20ins~3%不敏感完整編輯pptEGFR基因突變和EGFR靶向治療中國肺腺癌驅動基因突變圖譜EGFR檢測樣本來源組織活檢（腫瘤蠟片）目前檢測金標準

細胞學標本（惡性胸水）樣本品質和腫瘤細胞含量可能比組織樣本較低血液標本（ctDNA）-

當無法獲取組織或細胞學樣本的晚期轉移患者，作為有效補充DNA片段化/假陰性較多，需要高敏感度技術+++--+--侵入性每個病人都適用動態(tài)檢測對于組織和胸水都取不到的患者，血液樣本是一個很好的補充PirkerRetal.JThoracOncol2010;5:1706–1713;SavicSetal.BrJCancer2008;98:154–160;RekhtmanNetal.JThoracOncol2011;6:451–458;TanakaTetal.CancerSci2007;98:246–252;-++質量控制EGFR檢測樣本來源組織活檢目前檢測金標準細胞學標本樣本品組織/細胞學檢測是目前的金標準目前國內(nèi)送檢以組織和細胞學標本為主，組織/細胞學檢測仍是目前的金標準目前的低送檢率源于：醫(yī)生觀念經(jīng)濟因素約20%患者無組織標本FromAZ2015internaldata組織/細胞學檢測是目前的金標準目前國內(nèi)送檢以組織和細胞學標本肉眼判斷是否

>10%腫瘤組織H&E染色

&確定腫瘤組織Step1標本病理質控

DNA樣本制備DNA純化DNA定量Step2DNA的抽提建立PCR反應體系Step3PCR反應

數(shù)據(jù)的分析Step4報告的解讀報告組織檢測基本流程肉眼判斷是否

>10%腫瘤組織H&E染色&確定腫瘤組組織及細胞學標本的處理-需要臨床科室的協(xié)助與配合組織學標本固定要及時，離體后即時處理（15-30分鐘內(nèi))固定液：10%中性緩沖福爾馬林（終濃度4%）；固定液的量一般為組織體積的10-15倍.固定時間：活檢標本直接放入固定液，支氣管鏡活檢標本的固定時間為6～24h，手術切除標本的固定時間為12h-48h.細胞學標本采用95%乙醇固定液，時間不宜少于15min，或采用非婦科液基細胞學固定液，固定時間和方法可按說明書進行操作所有細胞學標本應盡量制作福爾馬林固定石蠟包埋（formalin-fixedandparrffin-enbedded,FFPE）細胞學蠟塊。將細胞學標本離心沉淀置于包埋盒中，后續(xù)操作同組織學標本制作蠟塊流程中國原發(fā)性肺癌診療規(guī)范2016版組織及細胞學標本的處理-需要臨床科室的協(xié)助與配合組織學標本中病理評估和質控對于基因檢測至關重要-蠟塊未染色切片H&E染色切片標記腫瘤細胞比例高的區(qū)域刮取標記以內(nèi)的區(qū)域組織處理、蠟塊和H&E染色切片制作病理質量控制EGFR基因突變檢測無EGFR基因突變檢測標本接收質量達標質量不達標為什么EGFR檢測要在病理科開展？病理評估和質控對于基因檢測至關重要-蠟塊腫瘤細胞含量評估對于EGFR結果判讀影響病理腫瘤細胞含量評估對于EGFR突變結果影響較大，檢測流程如果沒有該步驟，會造成較多的假陰性。腫瘤細胞含量評估對于EGFR結果判讀影響病理腫瘤細胞含量評估血液檢測的價值與優(yōu)勢作為無法獲取組織標本的補充，無創(chuàng)取樣后的檢測結果指導臨床用藥實現(xiàn)實時動態(tài)監(jiān)測，提高全程管理水平循環(huán)而勻質的血液標本，在一定程度有效克服異質性*已可以指導EGFR敏感性突變治療用藥1.Molina-VilaMetal.JThoracOncol2008;3:1224–1235;

2.SmouseJetal.CancerCytopathol2009;117:67–72;

3.VanEjikRetal.PLoSOne2011;6:e177791;

4.RekhtmanNetal.JThoracOncol2011;6:451–458血液檢測的價值與優(yōu)勢作為無法獲取組織標本實現(xiàn)實時動態(tài)監(jiān)測，循吉非替尼獲得血液ctDNA伴隨診斷適應癥歐盟和中國相繼批準阿斯利康易瑞沙血液ctDNA伴隨診斷非小細胞肺癌患者用藥前檢測EGFR突變完整編輯ppt吉非替尼獲得血液ctDNA伴隨診斷適應癥歐盟和中國相繼批準阿循環(huán)血腫瘤細胞(circulatingtumourcell，CTC)即釋放到外周血中的腫瘤細胞，目前CTC的捕獲比較困難循環(huán)腫瘤DNA(circulatingtumorDNA，ctDNA)即循環(huán)腫瘤DNA，指由腫瘤細胞釋放到血液循環(huán)系統(tǒng)中的DNA血液標本的檢測對象完整編輯ppt循環(huán)血腫瘤細胞(circulatingtumourcel總量少–

<500

DNA拷貝數(shù)/200uL血漿ctDNA豐度低血漿ctDNA的特點片段小–集中在170bp左右，檢測方法需要能夠耐受In-housedataFractionofEGFRmutantintotalcfDNANumberofEGFRM+plasmasamples61376353activatingmutations,N=32T790M,N=11Newman

etal.,Nat

Med(2014)Taniguchietal.,ClinCancerRes(2011)

信息丟失-能代表全基因組信息？TranslationalOncology.2013NatureVolume.2013完整編輯ppt總量少–<500DNA拷貝數(shù)/200uL血漿ctIPASS日本亞組血液/組織對比

EGFR突變狀態(tài)研究

靈敏性:43%

特異性:100%一致性:66%86對血清和組織樣本參與比較突變狀態(tài)組織合計EGFR(+)EGFR(-)血液EGFR（+）22022EGFR（-）293564合計513586EGFR突變型吉非替尼組的PFS顯著長于卡鉑/紫杉醇組(HR,0.29;95%CI,0.14–0.60;p0.001)EGFR野生型吉非替尼組的PFS與卡鉑/紫杉醇組無顯著差異(HR,0.88;95%CI,0.61–1.28;p0.50)GotoK.etal.JThoracOncol2012;7(1):115-121完整編輯pptIPASS日本亞組血液/組織對比

EGFR突變狀態(tài)研究靈一致性敏感性特異性n/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIAsiaPac(n=1687)1310/1687(77.7)75.6,79.6343/692(49.6)45.8,53.4967/995(97.2)96.0,98.1Russia(n=894)767/894(85.8)83.3,88.033/109(30.3)21.8,39.8734/785(93.5)91.5,95.1亞太和俄羅斯晚期NSCLC組織/細胞學和配對的血漿樣本(IGNITE)中國(N=1355)一致性敏感性特異性PPVNPVn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CIn/N(%)95%CI1051/1355(77.6)75.2,79.8267/548(48.7)44.5,53.0784/807(97.1)95.8,98.2267/290(92.1)88.3,94.9784/1065(73.6)70.9,76.2ChunleiShi,etal.2015ESMOAsia,abstract422PD完整編輯ppt一致性敏感性特異性n/N(%)95%CIn/N(%)9IFUM吉非替尼治療EGFR突變的

高加索NSCLC652對血液和組織樣本參與比較突變狀態(tài)組織合計EGFR(+)EGFR(-)血液EGFR(+)69170EGFR(-)36546582合計105547652JThoracOncol.2014Sep;9(9):1345-53.

一致性:94.3%;

敏感性:65.7%;

特異性:99.8%AllmutationsMedianPFSmoTumor(n=106)9.7Plasma(n=65)10.2MedianPFSctDNA作為EGFR檢測的有效補充69.876.959.5所有突變類型N=74/10650/6522/37TumorEGFR

mutation-positiveTumorEGFR

mutation-positivePlasmaEGFRmutation-positiveTumorEGFR

mutation-positivePlasmaEGFRmutation-negativeObjectiveresponserate(%)完整編輯pptIFUM吉非替尼治療EGFR突變的

高加索NSCLC652IFUM研究：血液檢測陽性可以指導TKI用藥IFUM(易瑞沙后續(xù)評估)研究中，血液與配對組織不同EGFR突變狀態(tài)患者ORR的一致，19外顯子缺失患者PFS也一致(10.3月vs9.6月)ORR(%)PFS(月)組織血液ctDNA檢測EGFR突變陽性可用于指導EGFR-TKI治療Douillard,J.-Y.,etal.(2014)."JournalofThoracicOncology9(9):1345.完整編輯pptIFUM研究：血液檢測陽性可以指導TKI用藥IFU

RocheARMS:敏感性:75%,特異性:96%ADxARMS:敏感性67.5%特異性100%Liuetal2013.JclinpATHMoketal.2015,CCRQiagenARMS敏感性65.7%，特異性:99%123ARMS法特異性較好，靈敏度有限，但ADxARMS是目前唯一獲得CFDA批準的血液檢測方法一代ARMS：EGFR敏感突變，組織vs血液RocheARMS:敏感性:75%,特異性:9血液檢測的獲益人群轉移>未轉移4期>3期>2期>1期晚期、無法獲得組織標本的NSCLC患者100806040200結直腸胃食管胰腺乳腺局限期轉移性可檢測ctDNA的發(fā)生率(%)100806040200可檢測ctDNA的發(fā)生率(%)I期III期II期IV期1.0*10061.0*10051.0*10041.0*10031.0*10021.0*10011.0*1001.0*10-01每5ml的突變片斷I期III期II期IV期Bettegowdaet.al.,SciTranslMed(2014)完整編輯ppt血液檢測的獲益人群轉移>未轉移100806040200結直腸非小細胞肺癌血液EGFR基因突變檢測中國專家共識(2015年12月)

中國國家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）在2015年2月已批準吉非替尼說明書更新，在推薦所有NSCLC患者的腫瘤組織都應進行EGFR基因突變檢測基礎上，如果腫瘤標本不可評估，則可使用從血液（血漿）標本中獲得的ctDNA進行評估。EGFR基因突變檢測流程完整編輯ppt非小細胞肺癌血液EGFR基因突變檢測中國國血液檢測實驗流程血漿cfDNAEGFR突變檢測cfDNA提取加樣分離全血采集時間采集方式采血管（EDTA抗凝）及時高效避免污染使用可信賴的血漿cfDNA提取試劑盒使用可信賴的檢測試劑盒篩選合適人群cfDNA（腫瘤標本不可評估）（2h內(nèi)）采用EDTA抗凝管，采集10mL全血2小時內(nèi)將全血充分低溫離心兩次，分離出不含細胞成分的血漿，放置于-70℃凍存完整編輯ppt血液檢測實驗流程血漿cfDNAEGFR突變檢測cfDNA提取慎重對待ARMS法的血液檢測結果EMQNExternalQualityAs