獸醫(yī)生物制品制造-被動免疫制品制造（獸醫(yī)生物制品技術(shù)）

抗病血清的概念、機理及應用1.概念抗原注射于動物體，可刺激動物的B淋巴細胞轉(zhuǎn)為漿細胞產(chǎn)生特異性抗體，待動物血清中積累大量抗體時，采集其血液，分離析出血清，此即含抗體的抗病血清，或稱免疫血清，高免血清。抗病血清的概念、機理及應用2.種類抗菌血清、抗病毒血清、抗毒素等?？共⊙宓母拍?、機理及應用3.作用預防和治療急性傳染病。4.機理當將有高度免疫力的抗體輸入動物體后，動物就被動地獲得了抗體，從而形成了免疫力，稱為人工被動免疫。免疫血清具有很強的特異性，一種血清只對相應的病原微生物起作用?？共⊙宓母拍?、機理及應用5.應用主要用作緊急預防接種，通常是在已經(jīng)發(fā)生傳染病或受到傳染病威脅的情況下使用。優(yōu)點：是注射后立即產(chǎn)生免疫。缺點：免疫力維持時間較短，一般僅2～3周，因此，在注射血清后2～3周仍需再注射一次疫苗，才能獲得較長時間的抗傳染能力。目前免疫血清仍大量生產(chǎn)的僅有狂犬病抗血清、破傷風抗毒素等少數(shù)幾種。抗病血清制造

-以雞新城疫抗血清為例一、實訓目的熟悉雞新城疫抗血清的制備程序，掌握雞采血技術(shù)、血清分離技術(shù)二、實訓器材雞新城疫Ⅳ系苗、滅菌生理鹽水、無菌注射器、酒精棉球，硫柳汞，無菌試管，無菌吸管，滅菌瓶等?？共⊙逯圃?/p>

-以雞新城疫抗血清為例三、實訓方法1.選擇試驗動物根據(jù)抗原種類、所用血清量的大小等實際情況選擇試驗動物。本實驗選擇健康無病的青年雞作為試驗動物，數(shù)量根據(jù)需要而定。2.抗原的制備所用抗原為雞新城疫Ⅳ系苗?？共⊙逯圃?/p>

-以雞新城疫抗血清為例3.免疫方法和免疫程序煮沸消毒注射器與針頭。用消毒注射器抽取抗原（雞新城疫Ⅱ系苗）按下列日程與劑量注射入雞體內(nèi)次數(shù)時間抗原劑量接種部位第1次第1天Ⅳ系苗5倍免疫劑量頸部皮下第2次第14天Ⅳ系苗10倍免疫劑量胸肌或腿肌抗病血清制造

-以雞新城疫抗血清為例第21天進行試血，從雞翼根靜脈采血1毫升，分離析出血清，用血凝抑制試驗檢測ND抗血清效價。HI達1:128以上即可大量采血制備雞ND抗血清。若ND小于1:128，則進行第三次免疫，方法同第二次免疫，以提高效價?？共⊙逯圃?/p>

-以雞新城疫抗血清為例4.血液采集與血清提?。?）采血將雞側(cè)臥于水平臺面上，右側(cè)朝下，剪去胸前區(qū)的背毛，皮膚用碘酒、酒精消毒后，在從胸骨脊前端到背部下凹連接線的1／2處，用左手食指摸到心搏最明顯處，右手持注射器垂直進針，刺入2-3厘米即可采得血液，并立即將所得血液以無菌操作注入一滅菌的器皿內(nèi)?？共⊙逯圃?/p>

-以雞新城疫抗血清為例（2）分離血清器皿內(nèi)的血液放置1-2小時，待其自然凝固后，將血液吸入離心管中。血塊吸入另一離心管中，4000轉(zhuǎn)／分鐘，離心20分鐘，吸取血清部分與前面的血清混合。若血清中有紅細胞，則需離心沉淀以去掉紅細胞?？共⊙逯圃?/p>

-以雞新城疫抗血清為例5.抗血清檢驗將分離血清進行無菌檢驗、安全檢驗及效價測定。6.抗血清保存向血清中加入防腐劑硫柳汞，使其濃度為0.01%。分裝入滅菌瓶，用蠟封瓶口，貼上標簽，注明抗血清名稱，血凝抑制價及生產(chǎn)日期，放冰箱保存?zhèn)溆?。卵黃抗體1.卵黃抗體的概念產(chǎn)蛋雞（鴨、鵝）感染某些抗原后，其血清和蛋黃中均可產(chǎn)生相應的抗體。因此可以從免疫過的產(chǎn)蛋雞（鴨和鵝）產(chǎn)的蛋黃中提取相應的抗體，該類制劑稱為卵黃抗體。小鵝瘟病毒卵黃抗體、雛鴨病毒性肝炎卵黃抗體。卵黃抗體卵黃抗體2.卵黃抗體的制備流程選擇產(chǎn)蛋雞注射油佐劑滅活苗測卵黃抗體滴度高免蛋浸泡清洗消毒酒精棉擦拭蛋殼打取雞蛋分離蛋黃卵黃抗體3.IBD卵黃抗體的制備（1）制造用雞的選擇選擇健康的蛋雞，隔離飼養(yǎng)觀察l周后無特殊反應者，方可免疫。卵黃抗體（2）疫苗免疫以IBD油佐劑滅活苗對開產(chǎn)前或已開產(chǎn)的健康蛋雞,每只肌肉注射2ml,7-10d后重復注射一次,再過7-10d再注一次,油苗劑量適度遞增。第三次免疫后定期檢測卵黃抗體水平,待瓊擴效價達1:128時開始收集高免蛋,4℃貯存?zhèn)溆?瓊擴效價降到1:64時停止收蛋。高免蛋合格時間大約持續(xù)一個月。卵黃抗體（3）高免卵黃抗體的制備a.高免蛋的處理用0.5%新潔爾滅溶液浸泡清洗高免蛋,再用酒精棉擦拭蛋殼。b.分離卵黃無菌操作，打開雞蛋，分離蛋黃。卵黃抗體c.卵黃勻漿收集的蛋黃置無菌的組織勻漿器中，分裝消毒瓶內(nèi)，4℃冷藏備用。根據(jù)卵黃抗體瓊擴效價水平加入生理鹽水進行稀釋(稀釋后的卵黃抗體瓊擴效價不低于1:16-1:32),加雙抗各1000IU/ml,加硫柳汞濃度達1/萬,充分攪拌后，過濾,分裝于滅菌瓶內(nèi)，4℃貯存。卵黃抗體（4）高免卵黃抗體的檢驗

每批都進行效價測定、細菌培養(yǎng)和安全試驗，合格后方可出廠。免疫原制備免疫血清的抗原，一般是微生物體或其毒素（類毒素），或微生物的提取物等純化的完全抗原。因此制備免疫血清所用的抗原，要根據(jù)病原微生物的培養(yǎng)特性，采用不同的方法生產(chǎn)。免疫原1.制備抗菌免疫血清所用抗原基礎(chǔ)免疫用抗原:多為疫苗或死菌。高度免疫用抗原:一般選用毒力較強的菌株。抗原制備方法：菌株接種于最適生長的培養(yǎng)基,按常規(guī)方法進行培養(yǎng)，收獲，經(jīng)純粹檢查,證明無雜菌者,即可作為免疫抗原。免疫原2.制備抗病毒免疫血清所用抗原基礎(chǔ)免疫用抗原:

可用弱毒疫苗;高度免疫用抗原:用病料臟器毒乳劑等強毒。高度免疫抗原制備方法免疫原3.制備抗毒素血清所用抗原一般多用類毒素作免疫原。而毒素或全培養(yǎng)物(活菌加毒素)只有在需要加強免疫刺激的情況下才應用。例：白喉抗毒素、破傷風抗毒素生產(chǎn)抗病血清動物的選擇與管理1.動物的品種馬、牛、羊、豬、兔、雞、豚鼠、小鼠等。用同種動物生產(chǎn)的稱同源血清，用異種動物生產(chǎn)的稱異源血清。制備抗菌和抗毒素血清多用異種動物，抗病毒血清的制備多用同種動物。例：豬丹毒抗血清，豬瘟抗血清總的看來，制備免疫血清用馬較多。生產(chǎn)抗病血清動物的選擇與管理2.數(shù)量由于動物存在個體差異，所以選定動物應有一定的數(shù)量，一個批次至少取用2只以上動物。生產(chǎn)抗病血清動物的選擇與管理3.年齡及健康狀況年齡要求:通常選擇體型較大、性情溫順、體質(zhì)強健的青壯年動物為宜。健康要求:非疫區(qū)選購,并經(jīng)隔離觀察,確認健康者方可應用。使用前還必須經(jīng)過嚴格檢疫,呈陽性反應或可疑性反應的動物均不能使用。生產(chǎn)抗病血清動物的選擇與管理4.動物的管理由專人負責喂養(yǎng)和精心管理。加強飼養(yǎng)管理，喂以營養(yǎng)豐富的飼料。在高度免疫和采血期間,每日測溫兩次,隨時觀察其健康情況。每日至少要有4h以上的運動。防止散毒。詳細登記每頭動物的來源、品種、性別、年齡、體重、特征及營養(yǎng)狀況、體溫記錄和檢疫結(jié)果等。生產(chǎn)抗病血清動物的選擇與管理生產(chǎn)抗病血清動物的選擇與管理血液采集與血清的提取1.血液的采集免疫動物經(jīng)效價檢測合格后即可采血。不合格者，再度免疫，多次免疫仍不合格者淘汰。高度免疫最后一次大劑量注射抗原后7～10天進行第一次采血。采血可以全放血(一次采集)或部分采血(多次采集)。血液采集與血清的提取多次采血者，第一次采血時采血量按每千克體重采血約10ｍl，經(jīng)３-５天第二次采血，按每千克體重采８-１０ｍl。第二次采血后經(jīng)2-3d，注射足量免疫原。如此循環(huán)注射免疫原和采血。全放血在最后一次高免之后8-11d進行。采血前，動物禁食24h，但需飲水以防止血脂過高。血液采集與血清的提取一次放血方法

綿羊或其他大動物可用頸動脈放血，家兔、豚鼠和雞則可通過心臟直接采血。多次采血方法

大動物可通過靜脈采血，家兔、豚鼠和雞等小動物可通過心臟采血。注意事項①實施無菌操作②采血時不加抗凝劑血液采集與血清的提取2.血清的提?。?）自然凝結(jié)加壓法將血液采入玻璃容器內(nèi)，于室溫下自然凝固，待血清自然析出。為了有助于血清析出，在凝血塊上可加以滅菌的不銹鋼壓砣。用無菌滴管吸取自然析出血清，于3000r/min離心15min，取上清液，放入滅菌瓶中。血液采集與血清的提取（2）枸櫞酸鹽血漿分離血清法按每1000ml血液加入10%的枸櫞酸