微生物的接種技術(shù)（微生物學(xué)與操作技術(shù)）

微生物學(xué)及操作技術(shù)微生物的接種技術(shù)概念1原理2步驟3目錄頁CONTENTSPAGE注意事項(xiàng)41

概念過渡頁TRANSITIONPAGE實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

掌握倒平板、斜面接種、液體接種、穿刺接種、平板接種和各種微生物接種的基本操作技術(shù)。概念：按無菌操作技術(shù)要求將目的微生物移接到培養(yǎng)基質(zhì)中的過程。2原理無菌操作技術(shù)無菌操作材料：實(shí)驗(yàn)原理2.實(shí)驗(yàn)原理接種工具：1．接種針2.接種環(huán)3.接種鉤4.5.玻璃涂棒6.接種圈7.接種鋤8.小解剖刀3步驟接種前的準(zhǔn)備工作接種操作實(shí)驗(yàn)步驟1.無菌環(huán)境的要求與保持2.進(jìn)入無菌室前的準(zhǔn)備3.無菌操作的要求（1）無菌室的消毒和防污染*無菌室內(nèi)空氣測(cè)試應(yīng)基本達(dá)到無菌。*每日（使用前）紫外線照射（1~2小時(shí)）.*每周用甲醛、乳酸、過氧乙酸熏蒸（2小時(shí)）.*每月用新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進(jìn)行消毒。*定期作實(shí)驗(yàn)室沉降菌計(jì)數(shù)，以檢查無菌室微生物生長(zhǎng)繁殖動(dòng)態(tài)。一、接種前的準(zhǔn)備工作實(shí)驗(yàn)步驟1.無菌環(huán)境的要求與保持2.進(jìn)入無菌室前的準(zhǔn)備3.無菌操作的要求2.超凈臺(tái)風(fēng)速保持在0.32-0.48米/秒使用前打開紫外燈照射40~60min開啟超凈工作臺(tái)工作電源，關(guān)閉紫外燈，并用75%的酒精或0.5%過氧乙酸噴灑擦拭消毒工作臺(tái)面。使用中，有機(jī)玻璃罩受到污染，嚴(yán)禁用酒精棉球擦拭，請(qǐng)用含水棉布擦拭；請(qǐng)保持超凈臺(tái)整潔、干燥，不要堆積雜物；使用完畢，關(guān)閉煤氣開關(guān)或酒精燈；使用完畢后，用消毒液擦拭工作臺(tái)面，關(guān)閉工作電源，重新開啟紫外燈照射15min.定期做無菌試驗(yàn)，以測(cè)定凈化臺(tái)是否符合無菌要求。一、接種前的準(zhǔn)備工作實(shí)驗(yàn)步驟1.無菌環(huán)境的要求與保持2.進(jìn)入無菌室前的準(zhǔn)備3.無菌操作的要求一、接種前的準(zhǔn)備工作實(shí)驗(yàn)步驟1.無菌環(huán)境的要求與保持2.進(jìn)入無菌室前的準(zhǔn)備3.無菌操作的要求3、無菌器材準(zhǔn)備滅菌器材：玻璃器皿、培養(yǎng)基、無菌衣等.消毒器材：接種試管、無菌室內(nèi)的凳子、試管架、天平、工作臺(tái)等一、接種前的準(zhǔn)備工作實(shí)驗(yàn)步驟1.無菌環(huán)境的要求與保持2.進(jìn)入無菌室前的準(zhǔn)備3.無菌操作的要求進(jìn)入無菌室前的準(zhǔn)備（1）定期檢查無菌環(huán)境的空氣是否符合規(guī)定；（2）用紫外線滅菌處理30~60min；（3）檢查無菌器材是否完備；（4）實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入無菌室前先用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簟＃?）緩沖室內(nèi)換上洗凈并經(jīng)紫外線燈照射過的工作衣、帽、鞋。一、接種前的準(zhǔn)備工作實(shí)驗(yàn)步驟1.無菌環(huán)境的要求與保持2.進(jìn)入無菌室前的準(zhǔn)備3.無菌操作的要求4.無菌操作的要求（1）在操作中不應(yīng)有大幅度或快速的動(dòng)作；（2）使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放。（3）在火焰上方操作；（4）接種用具在使用前、后都必須灼燒滅菌；（5）在接種培養(yǎng)物時(shí)，協(xié)作應(yīng)輕、準(zhǔn)。（6）不能用嘴直接吸吹吸管。（7）帶有菌液的吸管、玻片等器材應(yīng)及時(shí)置于盛有5%來蘇爾溶液的消毒內(nèi)消毒。一、接種前的準(zhǔn)備工作倒平板的方法將培養(yǎng)基加熱融化，待冷卻至55－600C時(shí)，倒平板。二、接種操作3.液體接種2.斜面接種1.倒平板的方法4.穿刺接種5.平板接種實(shí)驗(yàn)步驟斜面接種：

從已長(zhǎng)好微生物移接到另一斜面管的方法。此法用于好氣性微生物的接種。左手持菌種管和斜面管，使斜面向上，并盡量放平。用右手先將塞擰轉(zhuǎn)松動(dòng)，再拿接種環(huán)，用右手的小指、無名指和手掌撥下塞并夾緊，同時(shí)將管口在火焰上燃燒一圈，接種環(huán)灼燒滅菌后插入管內(nèi)，冷卻、挑菌，立即轉(zhuǎn)入斜面管底部，沿斜面劃曲線或直線。3.液體接種1.倒平板的方法2.斜面接種4.穿刺接種5.平板接種二、接種操作實(shí)驗(yàn)步驟試管斜面接種1.兩支試管呈“V”字形

2.拔下試管塞3.火焰上微燒一周

4.接種環(huán)灼燒、冷卻5.接種、劃線6.塞上塞子，灼燒接種環(huán)3.液體接種1.倒平板的方法2.斜面接種4.穿刺接種5.平板接種二、接種操作實(shí)驗(yàn)步驟

液體接種：將菌接種到液體培養(yǎng)基（試管、三角瓶等）中的方法。操作與上法基本一致，只是在將接種環(huán)送入液體培養(yǎng)基中時(shí)使環(huán)在液體與管壁接觸的地方輕輕磨擦，使菌體分散，然后塞上棉塞，再輕輕搖動(dòng)均勻，即可培養(yǎng)。如果菌種是培養(yǎng)在液體培養(yǎng)基中時(shí)，一般用移液管或接種環(huán)接種。1.倒平板的方法2.斜面接種3.液體接種4.穿刺接種5.平板接種二、接種操作實(shí)驗(yàn)步驟1.倒平板的方法2.斜面接種3.液體接種4.穿刺接種5.平板接種二、接種操作實(shí)驗(yàn)步驟穿刺接種：

用接種針挑取菌種后，插入深層固體（不要刺到底部），再沿原路拔出，此法用于厭氣性細(xì)菌接種、檢查細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)能力。3.液體接種2.斜面接種4.穿刺接種1.倒平板的方法5.平板接種二、接種操作實(shí)驗(yàn)步驟3.液體接種2.斜面接種4.穿刺接種1.倒平板的方法5.平板接種二、接種操作實(shí)驗(yàn)步驟平板接種：

將菌種接至培養(yǎng)皿的方法，平板接種的目的是觀察菌落形態(tài)、分離純化菌種，活菌計(jì)數(shù)以及在平板上進(jìn)行各種試驗(yàn)時(shí)采用的一種接種方法，可分為下面幾種：

3.液體接種2.斜面接種5.平板接種4.穿刺接種1.倒平板的方法二、接種操作實(shí)驗(yàn)步驟(1)斜面接平板a.劃線法：見平板劃線分離法。b.點(diǎn)種法：一般用于觀察霉菌和酵母細(xì)胞，輕輕點(diǎn)在平板的表面即可。

（2）平板接斜面：一般是將經(jīng)平板分散培養(yǎng)得到的單菌落接種到斜面，以便作鑒定或擴(kuò)大培養(yǎng)、保存之用。

3.液體接種2.斜面接種5.平板接種4.穿刺接種1.倒平板的方法二、接種操作實(shí)驗(yàn)步驟（3）平板涂布法倒培養(yǎng)基，制成平板。凝固后，另取一支吸管吸取相應(yīng)的菌液0.2mL放至平板上。用無菌三角玻棒將稀釋液在平板表面涂抹均勻。倒置于37℃條件下培養(yǎng)1～2d，觀察菌落形態(tài)及計(jì)數(shù)菌落。3.液體接種2.斜面接種5.平板接種4.穿刺接種1.倒平板的方法二、接種操作實(shí)驗(yàn)步驟37℃培養(yǎng)接種操