牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制與滅菌

一、復(fù)習(xí)現(xiàn)在是1頁\一共有55頁\編輯于星期三1現(xiàn)在是2頁\一共有55頁\編輯于星期三2《微生物培養(yǎng)與檢驗(yàn)》主要課程內(nèi)容1.微生物營養(yǎng)需求2.微生物形態(tài)3.微生物純化、分離4.微生物培養(yǎng)、篩選與保存5.微生物檢驗(yàn)現(xiàn)在是3頁\一共有55頁\編輯于星期三3課程內(nèi)容微生物吃什么？1微生物長的什么樣？2如何得到微生物？3如何保存微生物？4我很愛吃熟食（豬頭肉），但是聽說熟食微生物超標(biāo)，這是怎么檢測的？54現(xiàn)在是4頁\一共有55頁\編輯于星期三規(guī)則：1.上課不遲到：第1、5節(jié)課，提前10min到教室

2.下課前，自己的實(shí)驗(yàn)物品歸類，該清洗的清洗，該收拾的收拾

3.值日生負(fù)責(zé)擦黑板、掃地、擦桌；為大家做好服務(wù)工作

4.上課時間請不要玩手機(jī)

現(xiàn)在是5頁\一共有55頁\編輯于星期三5安全操作與標(biāo)準(zhǔn)操作現(xiàn)在是6頁\一共有55頁\編輯于星期三6（一）微生物培養(yǎng)基的制備（二）微生物的消毒滅菌（三）認(rèn)識微生物培養(yǎng)所需的儀器設(shè)備微生物吃什么？1現(xiàn)在是7頁\一共有55頁\編輯于星期三7（一）微生物培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基：是人工配制的、適合微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)物質(zhì)。滿足微生物生長發(fā)育的水分、C，N，生長因子，P，S，Na，Ca等適宜的酸堿度、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位，合適的滲透壓現(xiàn)在是8頁\一共有55頁\編輯于星期三8根據(jù)物理狀態(tài)劃分培養(yǎng)基分液體、半固體和固體3種液體培養(yǎng)基有各種肉湯培養(yǎng)基，主要用于細(xì)菌擴(kuò)大培養(yǎng)；半固體培養(yǎng)基含0.4%瓊脂，主要用于保存細(xì)菌固體培養(yǎng)基含15%~20%瓊脂，主要用于分離細(xì)菌現(xiàn)在是9頁\一共有55頁\編輯于星期三9培養(yǎng)基的配制原則1.選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì)實(shí)驗(yàn)室中常用：不同微生物所需培養(yǎng)基各不同牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基細(xì)菌高氏一號放線菌麥芽汁培養(yǎng)基酵母菌察氏培養(yǎng)基霉菌現(xiàn)在是10頁\一共有55頁\編輯于星期三102.營養(yǎng)物質(zhì)的濃度及配比合適3.控制pH條件細(xì)菌和放線菌：pH7.0~7.5酵母菌和霉菌：pH4.5~6.04.控制氧化還原電位5.原料來源的選擇盡量利用廉價且易獲得的原料作為培養(yǎng)基成分現(xiàn)在是11頁\一共有55頁\編輯于星期三116.滅菌處理避免雜菌污染，要對所用器械及工作場所進(jìn)行消毒與滅菌培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養(yǎng)基0.1MPa，121.3℃15~30min現(xiàn)在是12頁\一共有55頁\編輯于星期三12（二）微生物的消毒滅菌滅菌指利用物理和化學(xué)的方法殺滅或除去物料及設(shè)備中一切生命物質(zhì)的過程。消毒是指用物理或化學(xué)的方法殺死物料、容器、器具內(nèi)外的病原微生物，一般只能殺死營養(yǎng)細(xì)胞而不能殺死芽孢。消毒不一定能達(dá)到滅菌的要求，而滅菌則可達(dá)到消毒的目的無菌現(xiàn)在是13頁\一共有55頁\編輯于星期三13消毒滅菌方法：（一）干熱滅菌法（二）濕熱滅菌法（三）過濾除菌（四）紫外線殺菌（五）藥物殺菌現(xiàn)在是14頁\一共有55頁\編輯于星期三14（一）干熱滅菌法1.火焰滅菌法2.熱空氣滅菌法140~160℃2~3h現(xiàn)在是15頁\一共有55頁\編輯于星期三15（二）濕熱滅菌法1.高壓蒸汽滅菌法121℃20~30min2.常壓蒸汽滅菌法3.常壓間歇滅菌法現(xiàn)在是16頁\一共有55頁\編輯于星期三16（三）過濾除菌薄膜濾菌器0.22μm和0.45μm現(xiàn)在是17頁\一共有55頁\編輯于星期三17（四）紫外線殺菌240~280nm波段紫外線殺菌力較強(qiáng)多以253.7nm作為紫外線殺菌波長特點(diǎn)：穿透力弱超凈工作臺：現(xiàn)在是18頁\一共有55頁\編輯于星期三18（五）藥物殺菌1.酒精2.新潔爾滅現(xiàn)在是19頁\一共有55頁\編輯于星期三19（三）認(rèn)識微生物培養(yǎng)所需的儀器設(shè)備1.培養(yǎng)平板現(xiàn)在是20頁\一共有55頁\編輯于星期三202.試管與棉塞現(xiàn)在是21頁\一共有55頁\編輯于星期三213.接種環(huán)，涂布棒現(xiàn)在是22頁\一共有55頁\編輯于星期三224.高溫高壓蒸汽滅菌鍋現(xiàn)在是23頁\一共有55頁\編輯于星期三23p42高壓蒸汽滅菌請回顧滅菌鍋的操作方法現(xiàn)在是24頁\一共有55頁\編輯于星期三241）用之前檢查水位及水質(zhì)。若水質(zhì)不好，需換水2）放置滅菌物品，勿過滿；瓶子滅菌，瓶蓋擰松3）蓋上鍋蓋，相對的兩個螺帽一起擰4）啟動加熱，同時打開放氣閥；檢查安全閥是否關(guān)上。調(diào)整溫度時間121℃15min。5）待排氣閥冒出大量熱氣并持續(xù)約2~5min后排盡冷空氣后，再將其關(guān)閉；6）滅菌結(jié)束，待壓力下降至0，可打開放氣閥，之后開蓋。注意防止?fàn)C傷7）固體物品可進(jìn)行干燥；液體物品冷卻后擰緊。盡量避免二次污染?，F(xiàn)在是25頁\一共有55頁\編輯于星期三255.鼓風(fēng)干燥箱現(xiàn)在是26頁\一共有55頁\編輯于星期三266.超凈工作臺現(xiàn)在是27頁\一共有55頁\編輯于星期三27每次使用前，先用75%酒精（或新潔爾滅）擦洗臺面，并提前用紫外線滅菌燈照射15~30min處理凈化工作區(qū)內(nèi)積存的微生物；關(guān)閉滅菌燈后應(yīng)啟動風(fēng)機(jī)使之運(yùn)轉(zhuǎn)2min后再進(jìn)行培養(yǎng)操作；工作區(qū)內(nèi)不應(yīng)存放不必要的物品，以保持潔凈氣流流型不受干擾；使用完畢應(yīng)及時清理工作臺面上的物品并用酒精擦拭臺面使之始終保持潔凈?，F(xiàn)在是28頁\一共有55頁\編輯于星期三287.微量移液器的使用現(xiàn)在是29頁\一共有55頁\編輯于星期三29今天的工作：1.固體物品的滅菌2.配制培養(yǎng)基并進(jìn)行滅菌3.學(xué)習(xí)倒平板4.學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作5.超凈臺的準(zhǔn)備6.劃線接種7.滅菌效果檢查現(xiàn)在是30頁\一共有55頁\編輯于星期三30開始實(shí)驗(yàn)1.固體物品：1）平皿（6只/組）2）試管與棉塞/塑料封口（6只/組）的包扎3）滅菌藍(lán)色、黃色和白色槍頭將以上物品放入滅菌鍋中進(jìn)行滅菌121℃20min現(xiàn)在是31頁\一共有55頁\編輯于星期三312.培養(yǎng)基：培養(yǎng)基分液體、半固體和固體3種液體培養(yǎng)基有各種肉湯培養(yǎng)基，主要用于細(xì)菌擴(kuò)大培養(yǎng)；半固體培養(yǎng)基含0.4%瓊脂，主要用于保存細(xì)菌固體培養(yǎng)基含15%~20%瓊脂，主要用于分離細(xì)菌現(xiàn)在是32頁\一共有55頁\編輯于星期三32牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

牛肉膏

3g

蛋白胨

10g

NaCl

5g

瓊脂

15-20gpH7.4-7.6，加水至1000mL；若需分裝，需先融化，搖勻后分于121℃高壓滅菌15~20min備用用途：普通細(xì)菌常用的培養(yǎng)基（1）固體培養(yǎng)基配置現(xiàn)在是33頁\一共有55頁\編輯于星期三33請大家配制：請大家查看“營養(yǎng)瓊脂”的成分與配制說明，每組配置牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基150mL于錐形瓶中請大家先寫出1L的配方，然后再寫出150mL的配方現(xiàn)在是34頁\一共有55頁\編輯于星期三34配制完畢，將配制好的培養(yǎng)基裝入錐形瓶內(nèi)，瓶口塞上棉塞，用牛皮紙/報紙包扎瓶口，標(biāo)注好組別，進(jìn)行高溫高壓蒸汽滅菌現(xiàn)在是35頁\一共有55頁\編輯于星期三35（2）液體培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基中不含瓊脂牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液

牛肉膏

3g

蛋白胨

10g

NaCl

5gpH7.4-7.6，加水至1

000mL于121℃高壓滅菌15~20min備用用途：普通細(xì)菌常用的培養(yǎng)基現(xiàn)在是36頁\一共有55頁\編輯于星期三36請大家查詢LB培養(yǎng)基配方每組配置LB液體培養(yǎng)基50mL于錐形瓶中，包扎好瓶口（紗布+牛皮紙/報紙）后滅菌請大家先寫出1L的配方，然后再寫出50mL的配方現(xiàn)在是37頁\一共有55頁\編輯于星期三371.固體物品的滅菌√2.配制培養(yǎng)基并進(jìn)行滅菌√3.學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作4.學(xué)習(xí)倒平板5.超凈臺的準(zhǔn)備6.劃線接種7.滅菌效果檢查現(xiàn)在是38頁\一共有55頁\編輯于星期三383.如何倒平板（1）超凈工作臺的準(zhǔn)備將超凈工作臺臺面用酒精棉球擦干凈；關(guān)上門后，紫外燈打開，滅菌15-30min滅菌結(jié)束，打開風(fēng)機(jī)現(xiàn)在是39頁\一共有55頁\編輯于星期三392.加熱融化培養(yǎng)基（若為剛滅菌結(jié)束未凝固的培養(yǎng)基，則略）將培養(yǎng)基放入微波爐內(nèi)加熱融化，注意觀察，不要加熱時間過長或溫度過高，以免液體濺出?，F(xiàn)在是40頁\一共有55頁\編輯于星期三404.倒平板超凈工作臺滅菌完畢，關(guān)紫外燈，打開風(fēng)機(jī)；超凈工作臺門不能開太高，約20cm即可；用新潔爾滅棉球擦拭工作臺和手；將酒精燈瓶外擦干凈，轉(zhuǎn)移入工作臺；將已融化的培養(yǎng)基瓶身擦干凈，轉(zhuǎn)移入工作臺；待培養(yǎng)基冷卻至50°C左右（不燙手為原則，但是不可冷卻過度），倒平板?，F(xiàn)在是41頁\一共有55頁\編輯于星期三41平板要求：平板平整，無凸起；平板無“掛壁”；培養(yǎng)基布滿整個平皿倒平板操作視頻現(xiàn)在是42頁\一共有55頁\編輯于星期三42平板倒制結(jié)束，靜置，待凝固使用現(xiàn)在是43頁\一共有55頁\編輯于星期三434.學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作取無菌試管，倒入1/3高度的培養(yǎng)基，塞上蓋子，斜靠，使得斜面長度3~4cm，待凝固后使用現(xiàn)在是44頁\一共有55頁\編輯于星期三44請大家先制備4個試管的斜面培養(yǎng)基，然后將剩余培養(yǎng)基用于制備平板現(xiàn)在是45頁\一共有55頁\編輯于星期三451.固體物品的滅菌√2.配制培養(yǎng)基并進(jìn)行滅菌√3.學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基制作√4.學(xué)習(xí)倒平板√5.超凈臺的準(zhǔn)備√6.滅菌效果檢查7.劃線接種現(xiàn)在是46頁\一共有55頁\編輯于星期三466.滅菌效果檢查現(xiàn)在是47頁\一共有55頁\編輯于星期三47生化培養(yǎng)箱為微生物培養(yǎng)提供恒溫設(shè)備（固體培養(yǎng)基）現(xiàn)在是48頁\一共有55頁\編輯于星期三487.平板劃線法：取一接種環(huán)細(xì)菌，左手持平皿將蓋口微開，用沾有細(xì)菌的接種環(huán)在瓊脂平板上劃直線；接種環(huán)火焰滅菌，待冷卻，再用接種環(huán)在頂端邊緣劃線處沾取標(biāo)本繼續(xù)劃線，如此劃4~5次，劃畢加蓋。并用蠟筆在皿底玻璃上寫明接種菌名。于37℃培養(yǎng)18~24h觀察，注意平皿表面生長各菌落的大小、形態(tài)、邊沿、表面結(jié)構(gòu)、透明度和顏色等特征?，F(xiàn)在是49頁\一共有55頁\編輯于星期三49四區(qū)劃線現(xiàn)在是50頁\一共有55頁\編輯于星期三50圓形、突起、邊緣整齊、表面光滑、濕潤、有光澤，不透明菌落，直徑1～2mm現(xiàn)在是51頁\一共有55頁\編輯于星期三51請大家劃線接種大腸桿菌、金黃色葡萄球菌，置于培養(yǎng)箱16~18h后取出置于4℃冰