臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)：沙門菌屬和耶爾菌屬(2013檢本)

第五節(jié)沙門菌屬

Salmonella掌握內(nèi)容沙門菌屬及耶爾森菌屬1、生物學(xué)特性（形態(tài)染色、培養(yǎng)及生化反應(yīng)）2、在選擇性培養(yǎng)基上菌落形態(tài)3、檢驗(yàn)程序4、所致疾病1880年，Eberth首先發(fā)現(xiàn)傷寒桿菌。

1885年，美國(guó)病理學(xué)家Salmon首次分離到豬霍亂沙門菌。2007年在賓夕凡尼亞州生牛奶引發(fā)傷寒爆發(fā)，29人腹瀉的癥狀。美國(guó)雞蛋受沙門菌感染事件

2010年8月17日加州多個(gè)地區(qū)暴發(fā)沙門菌疫情，266例患病報(bào)告。雞蛋召回?cái)?shù)量起初為2.28億枚，23日升至5.5億枚。美國(guó)人生吃西紅柿“中毒”事件

2008年6月美國(guó)9個(gè)州，數(shù)百人因生食了新鮮西紅柿而出現(xiàn)發(fā)燒、腹瀉、腹痛等癥狀，有幾十人因病情嚴(yán)重需住院。沙門菌的發(fā)現(xiàn)和食物中毒typhoidfeverisstillabighealth-problemindevelopingcountries.TheWHOestimatesthatthereareworldwideabout16millionofclinicalcasesannually,ofwhichabout600,000resultindeath.Incomparison,about400casesoccureachyearintheU.S.,and70%ofthesecasesareacquiredwhiletravelinginternationally.Themostcommonlyreportedserotypes,inhistoryandpresent:S.typhi、S.enteritidisandS.typhimurium

腸沙門菌（S.enterica)

邦戈沙門菌（S.bongori）沙門菌屬分類亞種Ⅰ腸沙門菌腸亞種亞種Ⅱ腸沙門菌薩拉姆亞種亞種Ⅲa腸沙門菌亞利桑那亞種亞種Ⅲb腸沙門菌diarizonae亞種亞種Ⅳ腸沙門菌毫頓亞種亞種Ⅵ腸沙門菌indica亞種沙門菌屬沙門菌屬目前至少有2500種以上血清型。如：傷寒沙門菌的全名是“腸沙門菌腸亞種傷寒血清型”（SalmonellaentericasubspeciesentericaserotypeTyphi），可縮寫(xiě)為傷寒血清型沙門菌（SalmonellaTyphi）沙門菌99％臨床分離株是亞種Ⅰ中的菌株。沙門菌屬分類傷寒沙門菌副傷寒沙門菌(甲、乙、丙)人腸熱癥鼠傷寒沙門菌腸炎沙門菌豬霍亂沙門菌兒童傷寒人、動(dòng)物急性胃腸炎雞傷寒沙門菌動(dòng)物沙門菌屬臨床意義亞種1的菌種根據(jù)其對(duì)宿主的致病性,可分為三類

侵襲力：Vi抗原、菌毛粘附內(nèi)毒素：可引起體溫↑，WBC↓血壓↓腸毒素：（鼠傷寒沙門菌）致病物質(zhì)所致疾病腸熱癥：傷寒、副傷寒胃腸炎：食物中毒菌血癥攜帶者病人帶菌者糞-口1、腸熱癥：腸壁固有層淋巴結(jié)淋巴液腸系膜淋巴結(jié)胸導(dǎo)管血第一次菌血癥膽囊、骨髓、肝、脾、腎第二次菌血癥

發(fā)熱、不適、全身疼痛持續(xù)高熱、相對(duì)緩脈、肝脾腫大、外周血WBC下降2W后發(fā)生腸局部壞死潰瘍致腸穿孔隨尿排出隨膽汁進(jìn)入腸道隨糞便排出2、胃腸炎（食物中毒）：最常見(jiàn)鼠傷寒沙門菌豬霍亂沙門菌腸炎沙門菌大于108食物中毒（發(fā)熱、惡心、嘔吐、腹痛、水樣瀉）3、菌血癥或敗血癥：鼠傷寒沙門菌豬霍亂沙門菌腸炎沙門菌血敗血癥（高熱、寒戰(zhàn)、貧血）或菌血癥腦膜炎、骨髓炎、膽囊炎等4、無(wú)癥狀帶菌者

約1-3%傷寒或副傷寒患者，癥狀消失1年后，糞便仍可排菌，這些菌主要留在膽囊中，有傳染性。“傷寒瑪麗”沙門菌屬的生物學(xué)特性一、形態(tài)染色二、抗原結(jié)構(gòu)三、培養(yǎng)和生化特性四、抵抗力形態(tài)染色革蘭陰性桿菌，直而細(xì)長(zhǎng)，多有周鞭毛、無(wú)芽孢、無(wú)莢膜沙門菌電鏡圖鞭毛抗原（H）菌體抗原（O）表面抗原（K、Vi抗原）抗原構(gòu)造

1.O抗原：

多糖-類脂-蛋白質(zhì)復(fù)合物，耐熱刺激機(jī)體產(chǎn)生IgM類抗體（出現(xiàn)早、消失快）（1）O抗原的表示方法共有58種，已排到67。

O1、O2、O3、O4……O67（2）沙門菌的分群及表示方法有共同抗原成分的血清型歸為一個(gè)群。

A、B、C、D、E、F……Z、O51~O63、O65~O67

例如：O2（A）群;O6，7（C1）群

95％以上致病菌在A-F群

抗原成份2.H抗原：

蛋白質(zhì)，不耐熱刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG類抗體（出現(xiàn)遲、消失慢）沙門菌H抗原有兩種：

I相：特異相，小寫(xiě)字母表示a、b、c……zz1~z55II相：非特異相，阿拉伯?dāng)?shù)字表示1、2、3……,也有用小寫(xiě)字母a、n、x等表示抗原成份3.表面抗原：

有三種：Vi抗原、M抗原、5抗原

是不耐熱的多糖莢膜抗原，抗原性弱Vi抗原位于菌體的最表層，包圍了O抗原，可阻礙O抗原的血清學(xué)凝集試驗(yàn)。破壞Vi抗原：100℃

10min含有Vi抗原的沙門菌：傷寒沙門菌、丙型副傷寒沙門菌、都柏林沙門菌

抗原成份S-R變異：光滑型-粗糙型H-O變異：有鞭毛-無(wú)鞭毛位相變異：雙相型-單相型V-W變異：失去Vi抗原變異性對(duì)熱抵抗力不強(qiáng)：

60℃

1h或65℃15-20min水：2－3周糞便：1－2個(gè)月耐膽鹽、煌綠抵抗力培養(yǎng)特性1、兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度35－37℃，最適

pH6.8－7.8，營(yíng)養(yǎng)要求不高。2、腸道選擇性培養(yǎng)基（MAC、EMB、SS、XLD）：小至中等、半透明、乳糖不發(fā)酵菌落，產(chǎn)H2S菌株在SS、XLD上為黑色菌落。3、普通培養(yǎng)基：圓形、光滑、濕潤(rùn)、不透明、邊緣整齊的中等菌落。選擇性培養(yǎng)基SS平板：含乳糖、中性紅指示劑、膽鹽、煌綠、硫代硫酸鈉等Mac平板：含乳糖、中性紅指示劑、膽鹽等中國(guó)藍(lán)平板：含乳糖、中國(guó)藍(lán)和玫瑰紅酸指示劑EMB平板：含乳糖、伊紅和美藍(lán)指示劑XLD平板：含木糖、乳糖、蔗糖、賴氨酸、去氧膽酸鈉、酚紅指示劑等傷寒沙門菌菌落特征

（血平板）傷寒沙門菌菌落特征

（SS平板）不產(chǎn)H2S的沙門菌落特征：無(wú)色、半透明、小菌落（MAC平板）XLD平板：不發(fā)酵乳糖的沙門菌志賀菌（紅色菌落）；產(chǎn)生硫化氫的沙門菌（黑色菌落）；發(fā)酵糖類產(chǎn)酸的大腸桿菌（黃色菌落）培養(yǎng)特性4、生化反應(yīng)發(fā)酵葡萄糖、硝酸鹽還原陽(yáng)性、動(dòng)力陽(yáng)性、

KIA：KA+/-+/-、

IMVC：-+--或-+-+、賴氨酸脫羧酶陽(yáng)性、脲酶陰性、氧化酶陰性傷寒沙門菌

KIA（KA－＋）

MIU（+--）傷寒沙門菌

IMViC試驗(yàn)（－＋－－）（KA－＋）表示葡萄糖+、乳糖-、不產(chǎn)氣、產(chǎn)H2SMIU表示動(dòng)力、吲哚、尿素IMViC表示吲哚、MR、VP、枸椽酸鹽常見(jiàn)沙門菌的主要生化特性微生物學(xué)檢驗(yàn)一、標(biāo)本采集二、檢驗(yàn)程序及鑒定步驟三、抗體檢測(cè)（肥達(dá)反應(yīng)）傷寒病人標(biāo)本采集原則傷寒和副傷寒食物中毒敗血癥第1周取血液可疑食物血第2周起取糞嘔吐物第3周起取尿液 全程取骨髓

檢驗(yàn)程序標(biāo)本選擇性平板、BAP生化反應(yīng)血清學(xué)鑒定KIA/MIU、IMViC等玻片凝集試驗(yàn)增菌涂片染色藥敏分離培養(yǎng)1、血液、骨髓胰酶大豆蛋白肉湯2、糞便、肛拭GN肉湯或亞硒酸鹽肉湯腸道選擇培養(yǎng)基：

MAC、EMB：無(wú)色半透明小菌落；

SS：無(wú)色半透明或中央黑色菌落；

XLD：紅色或中央黑色菌落。床邊接種生化反應(yīng)1、初步生化：

KIA:葡萄糖＋

乳糖-、產(chǎn)氣(傷寒除外）、H2S＋/-MIU:動(dòng)力＋、吲哚-、脲酶-

IMViC:－＋－＋/-2、全面生化鑒定到種：生化反應(yīng)

KIAMIU氧化酶觸酶硝酸鹽還原斜面底層產(chǎn)氣H2S動(dòng)力吲哚脲酶志賀菌KA-/+--+/---++傷寒沙門菌KA-+/-+---++乙型副傷寒菌KA+++---++志賀菌屬和沙門菌屬的基本生化反應(yīng)

雙糖鐵瓊脂1-對(duì)照2-銅綠3－志賀菌4－沙門菌5－大腸6-變形血清鑒定1、初步血清定群：采用多價(jià)O抗血清（A~F群）和單價(jià)O抗血清定群2、再用H單價(jià)(因子）血清結(jié)合Vi血清確定血清型沙門菌的血清學(xué)分型組菌名O抗原H抗原IH抗原IIA甲型副傷寒1、2、12a—B乙型副傷寒1、4、5、12b1、2

鼠傷寒沙門菌1、4、5、12i1、2C1希氏沙門菌6、7、Vic1、5

豬霍亂（副傷寒C)6、7c1、5D傷寒沙門菌9、12、Vid—

腸炎沙門菌1、9、12g、m—E1鴨沙門菌3、10e、h1、6沙門菌血清學(xué)鑒定：抗血清+待檢細(xì)菌陽(yáng)性陰性抗體檢查肥達(dá)試驗(yàn)Widaltest原理：用已知傷寒沙門菌O、H抗原和甲、乙、丙型副傷寒沙門菌的H抗原,檢測(cè)病人血清中相應(yīng)抗體的半定量凝集試驗(yàn)用途：輔助診斷傷寒、副傷寒肥達(dá)反應(yīng)(Widaltest)O凝集（1:20～1:1280，效價(jià)1:80）H凝集（1:20～1:1280，效價(jià)1:320）肥達(dá)試驗(yàn)結(jié)果判斷正?？贵w水平

O≤1：80；H≤1：160；A、B、C≤1：80

動(dòng)態(tài)觀察H與O抗體的比較

O抗體：IgM型，出現(xiàn)早，消失快

H抗體：IgG型，出現(xiàn)晚，消失慢

肥達(dá)試驗(yàn)結(jié)果分析1、效價(jià)遞增或恢復(fù)期比初次≥4倍有診斷意義2、O、H均升高：傷寒、副傷寒

O不高，H高：回憶反應(yīng)

O高，H不高：感染早期或交叉反應(yīng)，一周后復(fù)查，H升高可診斷3、O、H均不高者少見(jiàn)

結(jié)果分析入院后第4天入院后第12天TO1：801：320TH1：801：80TA（甲）1：401：160TB（乙）1：401：20TC（丙）1：401：20結(jié)果分析與報(bào)告1、從血及骨髓中分離出傷寒沙門菌應(yīng)及時(shí)報(bào)告并隔離病人2、培養(yǎng)（-），O≥1：80，H≥1：160，傷寒

A、B、C：H≥1：80，甲、乙、丙副傷寒3、沙門菌胃腸炎或食物中毒：從腹瀉患者糞便、嘔吐物及殘余食物中培養(yǎng)出非傷寒或副傷寒沙門菌4、傷寒?dāng)y帶者：從無(wú)癥狀患者糞便或膽汁中分離出傷寒沙門菌第六節(jié)耶爾森菌屬

Yersinia法國(guó)學(xué)者耶爾森，1894年發(fā)現(xiàn)鼠疫桿菌（鼠疫巴斯德氏菌，又稱鼠疫耶爾森菌）。日本的北里柴三郎也幾乎同時(shí)在香港作出同一發(fā)現(xiàn)。鼠疫耶爾森菌的發(fā)現(xiàn)從公元6～19世紀(jì)發(fā)生過(guò)3次大流行哈爾濱1910年鼠疫事件卷走了6萬(wàn)余人性命的災(zāi)難。目前我國(guó)在青海和其他個(gè)別地區(qū)有少數(shù)散在病例。伍連德鼠疫耶爾森菌的流行情況2014年7月，酒泉玉門市發(fā)生一例鼠疫病例。鼠疫耶爾森菌的流行情況一、分類：11個(gè)菌種引起人類致病的有3種：鼠疫耶爾森菌(Y.pestis)、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(Y.enterocolitica)、假結(jié)核耶爾森菌(Y.pseutuberculosis)。耶爾森菌屬(Yersinia)鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)概述

鼠疫耶爾森菌（Y.pestis），俗稱鼠疫桿菌，是鼠疫的病原菌。鼠疫是一種人獸共患的自然疫源性烈性傳染病，人類鼠疫多為疫鼠的跳蚤叮咬而感染，是我國(guó)法定的甲類傳染病。此菌引起的是嚙齒動(dòng)物中的自然疫源性疾病，傳染性強(qiáng)，病死率高，易釀成大流行。此菌主要累及皮膚和淋巴結(jié)，其次為敗血癥、肺炎、腦膜炎。鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)傳染源：患病的鼠類和人傳播媒介：鼠蚤傳染途徑:

帶菌鼠蚤的叮咬人與染疫動(dòng)物（嚙齒動(dòng)物、黃鼠屬、旱獺屬）接觸或與病人接觸所致。鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)臨床類型⑴腺鼠疫－嗜淋巴組織性→特征性淋巴腺腫局部淋巴結(jié)腫脹、壞死和膿腫。傳播途徑：鼠-蚤-人鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)⑵敗血性鼠疫－最嚴(yán)重，可發(fā)展腦膜炎鼠疫，2-3天內(nèi)死亡。⑶肺鼠疫－繼發(fā)、原發(fā)。

傳播途徑：人-人呼吸道傳播鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)少見(jiàn)的－皮膚鼠疫、腸鼠疫、腦膜炎鼠疫、眼鼠疫。鼠疫常常發(fā)展為外周血管壞死性損傷，皮膚變黑→黑死病鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)臨床意義⒈致病因素⑴內(nèi)毒素：引起典型病理生理變化鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)⑵鼠毒素可溶性蛋白抗原（Pst1抗原），劇毒，可制成類毒素、抗毒素。細(xì)胞裂解或自溶后釋放。抑制心肌細(xì)胞線粒體的呼吸作用，引起不可逆休克及死亡。鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)⑶Fra1抗原（FI封套抗原）：（蛋白多糖復(fù)合物），莢膜抗原?？雇淌勺饔?高度特異性→產(chǎn)生保護(hù)性抗體⑷VW表面抗原：V－蛋白質(zhì)，W－類脂蛋白菌體表面抗原（毒力抗原）抗吞噬，由質(zhì)粒介導(dǎo)，與本菌的毒力和侵襲力有關(guān)鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)⑸其它Pgm（色素形成能力）PI鼠疫耶爾森菌素C凝固酶、F纖維蛋白因子PU嘌呤依賴性都與鼠疫耶爾森菌的毒力有關(guān)，缺一不可。鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)鼠疫的臨床癥狀主要表現(xiàn)為危重的全身中毒癥狀。發(fā)病急劇，體溫突然上升至39℃～40℃。伴有頭痛，嘔吐，頭暈，呼吸促迫等癥狀并很快陷入極度虛弱狀態(tài)。腺鼠疫局部淋巴結(jié)腫大肺鼠疫表現(xiàn)出咳嗽、胸悶、呼吸困難顏面潮紅，眼結(jié)膜充血，口唇、顏面及四肢皮膚呈青紫色，可咯出鮮紅色血痰，

㈠生物學(xué)性狀⒈形態(tài)結(jié)構(gòu)：G-b、G-cb，兩極濃染，有莢膜無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛陳舊物：多形性鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)2.培養(yǎng)特性：兼性厭氧，耐低溫，4～43℃生長(zhǎng)普通培養(yǎng)基：可生長(zhǎng)，但緩慢。血平板：典型→培養(yǎng)48小時(shí)后為柔軟、粘稠、粗糙菌落。大菌落有一個(gè)鋸齒樣花邊MAC：不分解乳糖小菌落鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)鼠疫耶爾森菌落有一個(gè)鋸齒樣花邊鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)肉湯培養(yǎng)基：24小時(shí)----沉淀生長(zhǎng)48小時(shí)----菌膜輕搖-------“鐘乳石”狀下垂鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)生化特性：25℃和37℃動(dòng)力陰性IMVC為－＋－－分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣賴氨酸、鳥(niǎo)氨酸、苯丙氨酸脫胺酶、脲酶、硫化氫均陰性。鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)（四）微生物檢驗(yàn)安全規(guī)則①鼠疫耶爾森菌：生物危險(xiǎn)二類病原體②生物安全級(jí)別：二級(jí)生物安全操作室③試驗(yàn)人員：穿隔離衣戴手套和防毒面具《人間傳染的病原微生物名錄》1.標(biāo)本采集：血液→24h內(nèi)取三份腺腫抽取液→注射1ml無(wú)菌生理鹽水，立即抽取痰、咽拭子、皮膚拭子或刮取物、腦脊液。動(dòng)物（死、活）跳蚤→采集前必須用消毒劑處理。鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)2.標(biāo)本直接檢查：⑴革蘭、吉姆薩或瑞氏染色

臨床標(biāo)本：形態(tài)→兩極濃染⑵熒光抗體染色：檢測(cè)F1抗原⑶酶聯(lián)免疫吸附：檢測(cè)F1抗原F1抗原主要在37℃表達(dá)。冷凍30h以上及35℃以下培養(yǎng)→F1陰性鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)3.分離培養(yǎng)與鑒定⑴分離培養(yǎng)：血液、無(wú)菌體液：增菌（腦心浸液）或商品試劑→血平板痰、拭子(污染）：MAC、CIN鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)⑵鑒定：初步鑒定：菌落特征、菌體形態(tài)、肉湯生長(zhǎng)特點(diǎn)及生化特征，結(jié)合臨床流行病學(xué)資料綜合分析判斷最終鑒定：噬菌體裂解試驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：小白鼠豚鼠免疫學(xué)方法：雙份F1抗體滴度檢測(cè)鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)一旦疑為本菌，立即向本地區(qū)疾控中心報(bào)告。并立即將菌株上送疾控中心鑒定!!預(yù)防：嚴(yán)格控制傳染源管理患者、消滅嚙齒動(dòng)物切斷傳播途徑：滅蚤鼠疫耶爾森菌(Yersinia

pestis)小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(Y.enterocolitica)小腸結(jié)腸炎耶爾森菌天然寄居在多種動(dòng)物體內(nèi)，如豬、鼠、家畜和兔等傳播途徑：通過(guò)污染食物和水源經(jīng)糞-口途徑或直接接觸感染動(dòng)物感染所致疾?、判∧c炎、結(jié)腸炎回腸盲端炎癥腸系膜淋巴結(jié)炎→假性闌尾炎：發(fā)熱、嘔吐、黏液便、水樣便（血水便成人）及腹痛⑵菌血癥⑶免疫性疾?。航Y(jié)節(jié)性紅斑、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎等小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(Y.enterocolitica)微生物特性⒈形態(tài)結(jié)構(gòu)：G-b，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜

22～25℃培養(yǎng)有鞭毛，翻滾螺旋運(yùn)動(dòng)。35℃無(wú)鞭毛。

2.培養(yǎng)特性：兼性厭氧菌，耐低溫，4～40℃生長(zhǎng)最適溫度22－28℃。普通瓊脂基：生長(zhǎng)良好MAC－乳糖不發(fā)酵菌落小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(Y.enterocolitica)小腸結(jié)腸炎耶爾森菌菌落特征（MAC）

乳糖不發(fā)酵，無(wú)色，半透明小菌落小腸結(jié)腸炎耶爾森菌菌落特征（CIN瓊脂平板)

粉紅色菌落3.抗原成分O抗原：50種以上只有幾種血清型與致病性有關(guān)我國(guó)主要為O9、O8、O5、O3小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(Y.enterocolitica)⒋生化特性：脲酶陽(yáng)性、鳥(niǎo)氨酸脫羧酶陽(yáng)性動(dòng)力、V-P、ONPG：

22℃-25℃陽(yáng)性，35℃陰性吲哚陰或陽(yáng)性小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(Y.enterocolitica)㈢、微生物檢驗(yàn)1、標(biāo)本采集：糞便或食物、血液2、標(biāo)本直接檢查3、冷增菌：糞便標(biāo)本可用5～7mlPBS4℃冷增菌2-3周。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(Y.enterocolitica)4、分離培養(yǎng)與鑒定⑴分離培養(yǎng)：接種MAC、NYE或CIN平板⑵初步鑒定：嗜冷性典型生化：動(dòng)力、V-P22-25℃陽(yáng)性脲酶陽(yáng)性、鳥(niǎo)氨酸脫羧酶陽(yáng)性、

IND-/+、KIA→KA--或AA--小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(Y.enterocolitica)5、血清學(xué)試驗(yàn)血清群：O3、O9、O5、O8O抗原的抗體滴度≥1:40H