生物化學(xué)有動(dòng)畫(huà)

生物化學(xué)有動(dòng)畫(huà)第一頁(yè)，共十三頁(yè)，2022年，8月28日已知某蛋白的分子量約為17kDa，等電點(diǎn)3.9~4.1，它能耐一定的高溫，在90°C加熱3~4min后仍然能夠保持80%的活性。該蛋白含有較多的疏水性殘基，與Ca2+結(jié)合后可以暴露它的疏水基團(tuán)。該蛋白的作用是作為生物體內(nèi)酶的激活劑。題目解析在鈣離子的作用下才能起到暴露疏水集團(tuán)發(fā)揮性能，結(jié)合蛋白質(zhì)基礎(chǔ)知識(shí)從而可以判斷其為鈣調(diào)蛋白。第二頁(yè)，共十三頁(yè)，2022年，8月28日鈣調(diào)蛋白（英語(yǔ)：Calmodulin，又稱鈣調(diào)素、攜鈣素，簡(jiǎn)稱CaM），是一種能與鈣離子結(jié)合的蛋白質(zhì)，普遍存在真核生物細(xì)胞中。鈣調(diào)素由148個(gè)氨基酸組成（分子量為16700）；含有大量酸性氨基酸（有1/3是谷氨酸和天冬氨酸），為酸性蛋白質(zhì)（等電點(diǎn)為4.3）。鈣調(diào)素含有4個(gè)EF手結(jié)構(gòu)片斷，其中每一個(gè)都可以結(jié)合一個(gè)鈣離子。鈣調(diào)蛋白是一種鈣結(jié)合蛋白，存在于幾乎所有的真核細(xì)胞中。它的作用是對(duì)任何微量的鈣都能敏感地捕獲。鈣調(diào)蛋白只有在與Ca2+結(jié)合后才有活性。與鈣結(jié)合后，CaM發(fā)生構(gòu)型上的變化，成為一些酶的激活物。因不含有易氧化的絡(luò)氨酸、半胱氨酸，因此十分的穩(wěn)定第三頁(yè)，共十三頁(yè)，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)方法：熱變性吸附層析法，基因重組大

腸桿菌法（論文無(wú)法下載）蛋白檢測(cè)：分為定性檢測(cè)和活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)總結(jié)：總結(jié)當(dāng)前實(shí)驗(yàn)第18卷第4期JournalofShanxiTeachersUniversityVol.18No.42004年12月NaturalScienceEdition動(dòng)物腦組織中鈣調(diào)蛋白的分離純化袁麗環(huán),段江燕第四頁(yè)，共十三頁(yè)，2022年，8月28日試劑準(zhǔn)備：

新鮮鼠腦；標(biāo)準(zhǔn)鈣調(diào)蛋白；PDE；Pipes；

BufferA：10mmol/LPipes,1mmol/LEDTA,pH=7.0;

BufferB：10mmol/LPipes,1mmol/LCaCl2,pH=7.0;

BufferC：50mmol/LTris-HCl,0.5mmol/LNaCl,10mmol/LEDTA,

pH=8.0;

測(cè)定Buffer：360mmol/LTris-HCl，360mmol/L咪唑，4.5mmol/L

MgAc2。第五頁(yè)，共十三頁(yè)，2022年，8月28日儀器準(zhǔn)備：

TGL-16L-A高速冷凍離心機(jī)；

2001-B-C七件套豪華層析系統(tǒng)；

UV-2201紫外分光光度計(jì)。第六頁(yè)，共十三頁(yè)，2022年，8月28日取新鮮的鼠腦共20g，切碎并于100mL

BufferA中勻漿．將勻漿液置100℃水浴中煮沸3min，冷卻后離心10000rpm，60min.取上清液調(diào)成2mmol/LCaCl2溶液。取樣，采用離心法：第七頁(yè)，共十三頁(yè)，2022年，8月28日粗樣品的純化：（吸附層析法）裝柱：采用葡聚糖G-50(分離蛋白質(zhì)的范圍在1.5×103-3×104)用蒸餾水浸充分膨脹(3h-4h)后再裝柱；

平衡：用提取鈣調(diào)蛋白的緩沖溶液BufferA平衡；上樣：經(jīng)過(guò)平衡的凝膠過(guò)濾柱。當(dāng)平衡液流動(dòng)到與固定相表面一致時(shí)，用滴管輕輕地把分離樣品的溶液加到固定相表面，要盡量避免沖毀基質(zhì)．加入樣品液的體積一般應(yīng)少于床體積的1/2;洗脫：待樣品液的液面流到固定相表面時(shí)，用50mLBufferB淋洗之后用200mL0.5mol/LNaCl的BufferB淋洗，最后用BufferC洗脫；收集：在進(jìn)行洗脫的同時(shí)柱的下端與部分收集器接通。按時(shí)間分管收集，每管滴2min，流速控制在大約1.5mL/min。第八頁(yè)，共十三頁(yè)，2022年，8月28日鈣調(diào)蛋白的定性檢測(cè)如圖，倘若兩者最大吸收峰以及峰形基本重合，那么可以判斷該物質(zhì)即為鈣調(diào)蛋白采用紫外光譜法：第九頁(yè)，共十三頁(yè)，2022年，8月28日鈣調(diào)蛋白的活性檢測(cè)根據(jù)磷酸二酯酶(PDE)可特異地把環(huán)核苷酸水解為5’-核苷酸,并在蛇毒中的核苷酸作用下,進(jìn)一步水解成腺苷和磷酸.而鈣調(diào)蛋白可以激活PDE,從而使最終的產(chǎn)物無(wú)機(jī)磷的量增加,因此可依據(jù)磷的含量判斷鈣調(diào)蛋白的生物學(xué)活性.機(jī)理圖如下對(duì)活性的計(jì)算存在以下定量關(guān)系：采用PDE法：第十頁(yè)，共十三頁(yè)，2022年，8月28日熱變性離心，以及用鈣離子絡(luò)合鈣調(diào)蛋白組提取采用葡聚糖柱交換吸附法鈣調(diào)蛋白純化采用紫外光譜法與標(biāo)準(zhǔn)CaM譜圖對(duì)比鈣調(diào)蛋白定性鑒別采用PDE水解法和磷的含量測(cè)定鈣調(diào)蛋白活性測(cè)定第十一頁(yè)，共十三頁(yè)，2022年，8月28日本文通過(guò)動(dòng)物腦組織為材料經(jīng)熱變性、離心、葡聚糖SephadexG-50分離純化，通過(guò)紫外吸收?qǐng)D譜、二步酶解法檢驗(yàn)