標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 36829-2018 甘蔗宿根矮化病菌實時熒光PCR檢測方法》是一項國家標(biāo)準(zhǔn)，主要針對甘蔗生產(chǎn)中常見的宿根矮化病進行快速準(zhǔn)確的病原菌鑒定。該標(biāo)準(zhǔn)詳細規(guī)定了采用實時熒光PCR技術(shù)對引起甘蔗宿根矮化病的主要病原——細菌（如Ralstonia solanacearum）進行檢測的方法流程。

首先，標(biāo)準(zhǔn)明確了實驗所需的基本材料與試劑，包括但不限于DNA提取試劑盒、特定引物和探針等，并指出了這些材料的具體要求。接著，對于樣品處理部分，給出了從田間采集樣本到實驗室中如何正確保存以及準(zhǔn)備待測樣品的具體步驟。這一步驟至關(guān)重要，因為良好的樣品處理是確保后續(xù)檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的基礎(chǔ)。

在核酸提取環(huán)節(jié)，標(biāo)準(zhǔn)推薦使用高效且能保證DNA質(zhì)量的方法來進行總DNA的提取，同時強調(diào)了避免污染的重要性。隨后，在實時熒光PCR反應(yīng)體系構(gòu)建方面，提供了詳細的配方指導(dǎo)，包括各組分的最佳濃度范圍及添加順序，以期達到最佳擴增效果。

此外，《GB/T 36829-2018》還特別強調(diào)了對照設(shè)置的重要性，建議設(shè)置陽性對照、陰性對照以及空白對照來驗證整個實驗過程的有效性和可靠性。最后，關(guān)于數(shù)據(jù)分析部分，標(biāo)準(zhǔn)提出了基于Ct值判斷樣本是否含有目標(biāo)病原體的標(biāo)準(zhǔn)，并給出了相應(yīng)的閾值參考。


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....

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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2018-09-17 頒布
  • 2019-04-01 實施
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GB/T 36829-2018甘蔗宿根矮化病菌實時熒光PCR檢測方法_第1頁
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文檔簡介

ICS6502001

B16..

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T36829—2018

甘蔗宿根矮化病菌

實時熒光PCR檢測方法

DetectionofLeifsoniaxylisubsp.xylibyreal-timePCR

2018-09-17發(fā)布2019-04-01實施

國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

中華人民共和國

國家標(biāo)準(zhǔn)

甘蔗宿根矮化病菌

實時熒光PCR檢測方法

GB/T36829—2018

*

中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行

北京市朝陽區(qū)和平里西街甲號

2(100029)

北京市西城區(qū)三里河北街號

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務(wù)熱線

:400-168-0010

年月第一版

20189

*

書號

:155066·1-61319

版權(quán)專有侵權(quán)必究

GB/T36829—2018

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位福建農(nóng)林大學(xué)國家甘蔗工程技術(shù)研究中心農(nóng)業(yè)部甘蔗及制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試

:、

中心農(nóng)業(yè)部福建甘蔗生物學(xué)與遺傳育種重點實驗室

、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人高三基孫生仁王恒波傅華英黃美婷王錦達張慧麗陳如凱

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T36829—2018

引言

本文件的發(fā)布機構(gòu)提請注意聲明符合本文件時可能涉及到與甘蔗宿根矮化病菌實時熒光定量

,,

相關(guān)的專利的利用

PCR。

本文件的發(fā)布機構(gòu)對于該專利的真實性有效性和范圍無任何立場

、。

該專利持有人已向本文件的發(fā)布機構(gòu)保證他愿意同任何申請人在合理且無歧視的條款和條件下

,,

就專利授權(quán)許可進行談判該專利持有人的聲明已在本文件的發(fā)布機構(gòu)備案相關(guān)信息可以通過以下

。。

聯(lián)系方式獲得

:

專利持有人姓名王恒波

:。

地址福建省福州市倉山區(qū)上下店路號

:15。

請注意除上述專利外本文件的某些內(nèi)容仍可能涉及專利本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別這些專

,。

利的責(zé)任

。

Ⅱ

GB/T36829—2018

甘蔗宿根矮化病菌

實時熒光PCR檢測方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了甘蔗宿根矮化病菌Leifsoniaxylixyli實時熒光檢測方法的儀器與

(subsp.)PCR

設(shè)備試劑與材料樣品的采集與前處理檢測以及結(jié)果判斷與表述等

、、、。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于可能帶有甘蔗宿根矮化病菌的活體寄主植物的快速檢測診斷

、。

2縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

十六烷基三甲基溴化銨

CTAB:(CetyltrimethylAmmoniumBromide)

值循環(huán)閾值

Ct:(CycleThreshold)

脫氧核糖核酸酶

DNase:(Deoxyribonuclease)

羧基熒光素

FAM:6-(6-Carboxy-Fluorescein)

甘蔗宿根矮化病菌Leifsoniaxylixyli

Lxx:(subsp.)

Part甘蔗宿根矮化病菌基因組上編碼的一種致病性基因

-1:(PathogenicityGene-1)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

PCR:(PolymeraseChainReaction)

核糖核酸酶

RNase:(Ribonuclease)

羧基四甲基羅丹明

TAMRA:6-(6-Carboxytetramethylrhodamine)

3甘蔗宿根矮化病菌基本信息

甘蔗宿根矮化病菌屬于微桿菌科Microbacteriaceae雷弗松氏細菌屬Leisonia成員拉丁文學(xué)名

f,

名稱為Leifsoniaxylixyli縮寫為甘蔗宿根矮化病菌其他信息參見附錄

subsp.,Lxx。A。

4方法原理

根據(jù)宿根矮化病菌的致病基因Pat-序列設(shè)計一對僅在該病菌Pat基因間保守的特異性引物和

1-1

一條特異性的熒光雙標(biāo)記探針在實時熒光擴增反應(yīng)中探針的熒光信號強度

TaqMan。PCR,TaqMan

伴隨著目標(biāo)序列擴增產(chǎn)物的增加呈正比關(guān)系通過收集擴增過程的熒光信號值即可判斷試

PCR,PCR,

樣是否帶有目標(biāo)序列

。

5儀器與設(shè)備

51實時熒光檢測儀激發(fā)檢測波長范圍可用染料和

.PCR:/350nm~750nm;SYBRGreenⅠ

探針升降溫速度均一性準(zhǔn)確性溫度范圍

Ta

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