GB/T 35912-2018豬繁殖與呼吸綜合征病毒熒光RT-PCR檢測方法

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標準

GB/T35912—2018

豬繁殖與呼吸綜合征病毒

熒光RT-PCR檢測方法

Real-timeRT-PCRmethodfordetectionofporcinereproductive

andrespiratorysyndromevirus

2018-02-06發(fā)布2018-09-01實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T35912—2018

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本標準由全國動物衛(wèi)生標準化技術(shù)委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標準起草單位中華人民共和國上海出入境檢驗檢疫局中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所中華

:、、

人民共和國深圳出入境檢驗檢疫局湖南圣湘生物科技有限公司中國檢驗檢疫科學研究院

、、。

本標準主要起草人張強李健熊煒童光志趙和平李樹清花群義楊忠蘋李國新王巧全

:、、、、、、、、、、

王艷林穎崢蔡開妹喻正軍林祥梅吳紹強

、、、、、。

Ⅰ

GB/T35912—2018

豬繁殖與呼吸綜合征病毒

熒光RT-PCR檢測方法

1范圍

本標準規(guī)定了豬繁殖與呼吸綜合征病毒熒光檢測的操作方法

RT-PCR。

本標準適用于豬繁殖與呼吸道綜合征病毒美洲型毒株核酸檢測

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

豬常溫精液生產(chǎn)與保存技術(shù)規(guī)范

GB/T25172

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)

Real-timeRT-PCR:(real-timereversetranscriptpolymerasechainre-

action)

Ct值每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號量達到設(shè)定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)

:(cyclethreshold)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

Taq酶Taq聚合酶Taq

:DNA(DNApolymerase)

緩沖液緩沖液

TE:Tris-EDTA(Tris-EDTAbuffer)

焦碳酸二乙酯

DEPC:(diethylpyrocarbonate)

豬繁殖與呼吸綜合征病毒

PRRSV:(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus)

磷酸鹽緩沖液

PBS:(phosphatebufferedsolution)

4儀器

41熒光檢測儀

.PCR。

42高速臺式冷凍離心機可控溫至離心速度可達以上

.:4℃、12000r/min。

43組織研磨器或者研缽

.。

44普通冰箱

.:2℃~8℃。

45超低溫冰箱可控溫至以下

.:-70℃。

46微量移液器并

.:0.2μL~2μL、1μL~10μL、