GB/T 31808-2015向日葵白銹病菌檢疫鑒定方法

ICS6502001

B16..

中華人民共和國國家標準

GB/T31808—2015

向日葵白銹病菌檢疫鑒定方法

DetectionandidentificationofAlbugotragopogonisPers.S.F.Gra

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2015-07-03發(fā)布2015-11-27實施

中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

中華人民共和國

國家標準

向日葵白銹病菌檢疫鑒定方法

GB/T31808—2015

*

中國標準出版社出版發(fā)行

北京市朝陽區(qū)和平里西街甲號

2(100029)

北京市西城區(qū)三里河北街號

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務熱線

:400-168-0010

年月第一版

20159

*

書號

:155066·1-49963

版權專有侵權必究

GB/T31808—2015

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由全國植物檢疫標準化技術委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標準起草單位中華人民共和國新疆出入境檢驗檢疫局新疆生產(chǎn)建設兵團農(nóng)業(yè)技術推廣總站

:、。

本標準主要起草人張祥林王翀趙冰梅王文正張江國乾義柯

:、、、、、。

Ⅰ

GB/T31808—2015

向日葵白銹病菌檢疫鑒定方法

1范圍

本標準規(guī)定了向日葵白銹病菌的檢疫鑒定方法

。

本標準適用于向日葵種子和植株中向日葵白銹病菌的檢疫和鑒定

。

2儀器和用具

生物顯微鏡體視顯微鏡超凈工作臺高壓滅菌器高速離心機制冰機全溫水浴擴增儀

、、、、、、、PCR、

電泳儀凝膠成像儀往復式振蕩器培養(yǎng)皿燒杯酒精燈三角瓶載玻片蓋玻片鑷子剪刀量筒

、、、、、、、、、、、、

吸管

。

3試劑

乳酸苯酚甘油棉藍藏紅花次氯酸鈉十二烷基硫酸鈉三羥甲基氨基甲烷鹽

、、、、、(NaClO),(SDS),-

酸氯化鎂乙二胺四乙酸四鈉鹽氫氧化鈉醋酸鈉

(Tris-HCl),(MgCl2),(EDTA),(NaOH),(NaOAc),

氯化鉀十六烷基三甲基溴化銨無水乙醇苯酚三氯甲烷

(KCl),(CTAB),(Ethanol),(Phenol),(Chloro-

異丙醇異戊醇核酸染料蛋白酶Taq

form),(Isopropanol),(Isoamylalcohol),(SYBRGreenⅠ),K,

聚合酶Taq脫氧核糖核苷三磷酸分子量標記

DNA(DNApolymerase),(dNTP),DNA(DNA

電泳緩沖液

Marker),TAE(TAEbuffer)。

4檢疫鑒定方法

41田間癥狀檢查

.

在向日葵現(xiàn)蕾中期至盛花期到向日葵隔離種植區(qū)或大田進行調查觀察向日葵植株發(fā)病情況

,,。

42種子帶菌檢查

.

選取癟小的向日葵種子置于干凈三角瓶中加入清水和少量洗衣粉在往復式振蕩器

5g,,200mL,

上振蕩倒去洗滌液再加入等量的清水重復洗滌次次直至洗凈向日葵種子上的種衣劑

10min,,,3~5,

如無種子包衣可省略此步晾干剝開向日葵種子將果皮和種仁一起放入裝有乳酚油的燒杯中酒

(,),,,,

精燈下煮沸冷卻后在解剖鏡下用鑷子剝取內果皮和種皮放入一干凈培養(yǎng)皿中加入少量棉藍

3min,,,-

藏紅花染色液靜置左右用乙醇清洗后用鑷子夾取內果皮或種皮置于載玻片上加一滴乳酚

,5h,95%,,

油作浮載劑蓋片鏡檢

,。

43病原菌形態(tài)觀察

.

用干凈刀片刮取少量向日葵病葉背面或葉柄花盤等的白色皰斑中的病菌置于載玻片上在生

(、),,

物顯微鏡下觀察該病菌形態(tài)特征記錄孢囊梗孢子囊卵孢子的形狀及大小

,、、。

將制備的向日葵內果皮或種皮玻片置于生物顯微鏡下觀察病