GB/T 31793-2015油菜莖基潰瘍病菌檢疫鑒定方法

ICS65020010

B16..

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T31793—2015

油菜莖基潰瘍病菌檢疫鑒定方法

DetectionandidentificationofLeptosphaeriamaculansFuckelCes.etDeNot.

()

2015-07-03發(fā)布2015-11-27實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T31793—2015

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國檢驗檢疫科學(xué)研究院中華人民共和國上海出入境檢驗檢疫局

:、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人吳品珊易建平周國梁杜洪忠

:、、、。

Ⅰ

GB/T31793—2015

油菜莖基潰瘍病菌檢疫鑒定方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了油菜莖基潰瘍病菌的檢疫鑒定方法

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于油菜和油菜莖基潰瘍病菌其他十字花科寄主種子和植株中油菜莖基潰瘍病菌的檢疫

和鑒定

。

2儀器和用具

21儀器

.

電子天平感量生物顯微鏡體視顯微鏡高速冷凍離心機純水儀超凈工作臺高壓滅菌

(0.01g)、、、、、、

鍋制冰機儀凝膠成像系統(tǒng)電泳儀實時熒光儀培養(yǎng)箱冰箱

、、PCR、、、PCR、、。

22用具

.

燒杯三角瓶量筒培養(yǎng)皿酒精燈鑷子剪刀解剖刀接種針載玻片蓋玻片研缽移液器移

、、、、、、、、、、、、、

液器吸頭離心管液氮罐孔徑和的網(wǎng)篩

、、、2.5mm1.5mm。

3試劑和培養(yǎng)基

31試劑

.

次氯酸鈉瓊脂粉馬鈴薯葡萄糖乳酸瓊脂糖無菌雙蒸水液氮蛋白胨磷酸二

1.0%(NaClO),,,,,,,,,

氫鉀硫酸鎂鏈霉素新霉素五氯硝基苯氯四環(huán)素利福平

,,,,,,,Tris-HCl,MgCl2,HCl,EDTA,NaOH,

無水乙醇苯酚溴化乙錠三氯甲烷

NaOAc,KCl,Tris,CTAB,TAE,(ethanol),(phenol),(EB),(chloro-

異丙醇異戊醇蛋白酶Taq聚合酶相對

form),(isopropanol),(isoamylalcohol),K,DNA,dNTP,DNA

分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物特異性引物和實時熒光特異性引物及探針

,PCRPCR。

32培養(yǎng)基

.

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基酸性馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基具體配方參見附錄

(PDA),(APDA)。A。

4檢疫鑒定方法

41種子檢測

.

未帶有種衣劑的種子解剖鏡下挑取皺縮干癟變色畸形殘缺或有霉變的種子帶有種

,、、、、1g~2g;

衣劑的種子先用自來水浸泡洗去種衣劑或用紗布包裹浸泡搓洗種子自來水沖洗去種衣劑待風(fēng)干后

,,,,

挑取異常種子做分離培養(yǎng)

,。

商用油菜籽樣品取用孔徑和的網(wǎng)篩過篩孔徑篩上物多為豆莢和

1kg,2.5mm1.5mm,2.5mm

莖等植株殘體孔徑篩下物多為碎屑和細(xì)小油菜籽篩上物和篩下物混勻后取制

,1.5mm。,