細菌和真菌感染多重核酸檢測試劑盒

細菌和真菌感染多重核酸檢測試劑盒1范圍本標準規(guī)定了細菌和真菌感染多重核酸檢測試劑盒（以下簡稱“試劑盒”）的術語和定義、要求、試驗方法、標簽和使用說明書、包裝、運輸和貯存等。本標準適用于對人體樣本（包括血液、腦脊液和糞便等）或其培養(yǎng)物進行單次檢測可報告三種及以上細菌和真菌（以下簡稱“病原菌”,不包括支原體和衣原體）的試劑盒的質量控制。適用于檢測原理為聚合酶鏈反應等溫擴增以及第二代測序等技術的試劑盒。本標準不適用于單次檢測可報告一種或兩種病原菌的試劑盒。不適用于單次檢測可報告一種或兩種病原菌的不同基因的試劑盒。不適用于單次檢測可報告一種或兩種病原菌的不同型別（基因型或血清型）的試劑盒。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲運圖示標志GB/T29791.2體外診斷醫(yī)療器械制造商提供的信息（標示）第2部分：專業(yè)用體外診斷試劑3術語和定義以下術語與定義適用于本文件。3.1核酸nucleicacid由核苷酸或脫氧核苷酸通過3’，5’-磷酸二酯鍵連接而成的一類生物大分子。注：具有非常重要的生物功能，主要是貯存遺傳信息和傳遞遺傳信息。包括核糖核酸（RNA）和脫氧核糖核酸（DNA）兩類。4要求外觀外觀應符合但不限于以下要求：a）試劑盒各組分應齊全、完整，液體無滲漏;b）中文包裝標簽應清晰，無磨損。核酸提取功能核酸提取功能應符合如下要求：

a）b）料；a）b）料；c）內標和（或）對照制造商宜根據其產品工藝特點，在反應體系中合理設置內標和（或）對照，內標和（或）對照宜與樣本同等對待。陰性參考品符合率對國家參考品或企業(yè)參考品中的陰性參考品進行檢測，檢測結果應為陰性。陰性參考品設置宜參考如下要求：a）包含一定數量的非目標病原菌，可以是獨立或混合樣本；b）包含與目標病原菌種屬相近、感染部位相同或感染癥狀相似的非目標病原菌。注：本標準所涉及的國家參考品信息可參見附錄A。陽性參考品符合率對國家參考品或企業(yè)參考品中的陽性參考品進行檢測，檢測結果應為陽性且與已知病原體種類相符。陽性參考品設置宜參考如下要求：a）包含全部目標病原菌，可以是獨立或混合樣本；b）可以每種目標病原菌只選擇一株具有代表性的菌株；c）對于難以獲得標準株或臨床分離株的病原菌可以使用模擬樣本，如包裹病原菌核酸的噬菌體顆粒。注：本標準所涉及的國家參考品信息可參見附錄A。檢出限對國家參考品或企業(yè)參考品中的檢出限參考品進行檢測，檢測結果應符合相應要求。制造商應規(guī)定并提供試劑盒對于每種目標病原菌的檢出限。宜優(yōu)先選擇感染性單位，如菌落形成單位每毫升（CFU/mL）；如難以獲得感染性單位，可以選擇非感染性單位，如拷貝數每毫升（copies/mL）等。注：本標準所涉及的國家參考品信息可參見附錄A。重復性對國家參考品或企業(yè)參考品中的重復性參考品進行檢測，檢測結果應滿足：a）對于報告Ct值的試劑盒，對同一份樣本進行重復檢測，檢測結果應均為陽性且與已知病原體種類相符，目標病原菌Ct值的變異系數（CV）應不大于5.0%；或b）對于不報告Ct值的試劑盒，對同一份樣本進行重復檢測，檢測結果應均為陽性且與已知病原體種類相符。重復性參考品應包括高、低兩個濃度，具體設置宜參考如下要求：a）可以使用包含目標病原菌的混合樣本進行驗證，覆蓋全部目標病原菌；或b）可以使用包含代表性的目標病原菌的獨立或混合樣本進行驗證，覆蓋有限數量目標病原菌；c）對于難以獲得標準株或臨床分離株的病原菌可以使用模擬樣本，如包裹病原菌核酸的噬菌體顆粒。注：本標準所涉及的國家參考品信息可參見附錄A。穩(wěn)定性可對效期穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性進行驗證：a）效期穩(wěn)定性：制造商應規(guī)定產品的有效期。取到效期后一定時間內的產品檢測陽性參考品符合率、陰性參考品符合率、檢出限、重復性，應符合4.4?4.7項要求。效期穩(wěn)定性試驗，一般情況下效期為1年時選擇不超過1個月的產品進行試驗，效期為半年時選擇不超過半個月的產品進行試驗，以此類推。但如超過規(guī)定時間，產品符合要求時也可以接受；b）熱穩(wěn)定性：取有效期內的試劑盒在制造商規(guī)定的溫度放置規(guī)定時間，檢測陽性參考品符合率、陰性參考品符合率、檢出限、重復性，應符合4?4.7項要求。注1：熱穩(wěn)定性試驗不能用于推導產品有效期，除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數據建立的推導公式。注2：根據產品特性可選擇），^方法的組合，但所選用方法宜能驗證產品的穩(wěn)定性。以保證在效期內產品性能符合標準要求。試驗方法外觀在自然光下以正常視力或矯正視力目視檢查。核酸提取及純化按照制造商提供的方法進行試驗。內標和對照按照制造商提供的方法進行試驗。陰性參考品符合率參考國家或企業(yè)參考品說明書并按照試劑盒說明書操作，對國家或企業(yè)參考品中的陰性參考品進行檢測。陽性參考品符合率參考國家或企業(yè)參考品說明書并按照試劑盒說明書操作，對國家或企業(yè)參考品中的陽性參考品進行檢測。檢出限參考國家或企業(yè)參考品說明書并按照試劑盒說明書操作，對國家或企業(yè)參考品中的檢出限參考品進行檢測。重復性參考國家或企業(yè)參考品說明書并按照試劑盒說明書操作，對國家或企業(yè)參考品中的重復性參考品重復檢測10次。穩(wěn)定性效期穩(wěn)定性取到效期后一定時間內的試劑盒，按照5.4?5.7方法進行檢測。熱穩(wěn)定性取有效期內的試劑盒在制造商規(guī)定的溫度放置規(guī)定時間，按照5.4?5.7方法進行檢測。標簽和使用說明書應符合GB/T29791.2的規(guī)定。包裝、運輸和貯存包裝包裝儲運圖示標志應符合GB/T191的規(guī)定。包裝容器應保證密封性良好，完整，無泄漏，無破損。運輸試劑盒應按制造商的要求運輸。在運輸過程中，應防潮，防止重物堆壓，避免陽光直射和雨雪浸淋，防止與酸堿物質接觸，防止內外包裝破損。貯存試劑盒應在制造商規(guī)定條件下保存。A.6A.6規(guī)格和組成A.6A.6規(guī)格和組成附錄A（資料性附錄）34種細菌和真菌感染多重核酸檢測試劑國家參考品說明書A.1總則附錄A給出了本標準“4要求”項中適用的國家參考品信息，該國家參考品為“34種細菌和真菌感染多重核酸檢測試劑國家參考品（參考品批號：370026-201801）”。A.2類別體外診斷試劑參考品。A.3批號370026-201801。A.4性狀液體。A.5用途本參考品為首批研制，參考品原料系34種可導致中樞神經系統(tǒng)、血液、呼吸道、腸道以及生殖道感染的致病性細菌或真菌（以下簡稱“病原菌”，不包括支原體和衣原體）的培養(yǎng)物。本參考品適用于對人體樣本或其培養(yǎng)物進行單次檢測可報告3種及以上病原菌檢測結果的多重核酸檢測試劑盒（聚合酶鏈反應法、恒溫擴增法以及第二代測序法）部分性能要求的質量控制和評價：陽性參考品符合率、陰性參考品符合率、重復性及最低檢出限。本參考品不適用于單次檢測可報告一種或兩種病原菌的試劑盒。不適用于單次檢測可報告1種或2種病原菌的不同靶基因的試劑盒。不適用于單次檢測可報告1種或2種病原菌的不同型別（基因型或血清型）的試劑盒。A.7A.7使用方法本品由7支混合參考品組成。參考品規(guī)格見表A.1,混合參考品詳細組成見梃.2表A.1參考品規(guī)格類型編號規(guī)格支數混合參考品M10.2mL/支1M20.2mL/支1M30.2mL/支1M40.2mL/支1M50.2mL/支1M60.2mL/支1M70.2mL/支1■■本品規(guī)格均不少于0.2ml/支。表A.2混合參考品M1?M7詳細組成編號細菌和真菌及其耐藥基因細菌或真菌英文濃度CFU/mLM1屎腸球菌[vanA]Enterococcusfaecium4.9X108肺炎鏈球菌Streptococcuspneumoniae1.0X107粘質沙雷氏菌Serratiamarcescens1.0X109大腸埃希氏菌Escherichiacoli7.8X108表皮葡萄球菌Staphylococcusepidermidis2.9X108M2鮑曼不動桿菌Acinetobacterbaumannii2.7X108肺炎克雷伯菌[KPC]Klebsiellapneumoniae1.8X108熱帶念珠菌Candidatropicalis1.8X106克柔念珠菌Candidakrusei2.3X106緩癥鏈球菌Streptococcusmitis2.1X108M3糞腸球菌[vanB]Enterococcusfaecalis1.8X108白色念珠菌Candidaalbicans4.0X106產酸克雷伯菌Klebsiellaoxytoca3.2X108化膿鏈球菌Streptococcuspyogenes2.2X108M4流感嗜血桿菌Haemophilusinfluenzae5.0X108光滑念珠菌Candidaglabrata9.6X106金黃色葡萄球菌[mecA]Staphylococcusaureus2.3X109奇異變形桿菌Proteusmirabilis1.1X108無乳鏈球菌Streptococcusagalactiae1.6X108M5單核細胞增多性李斯特菌Listeriamonocytogenes1.6X109陰溝腸桿菌Enterobactercloacae4.8X109銅綠假單胞菌Pseudomonasaeruginosa5.4X108近平滑念珠菌Candidaparapsilosis1.7X107腦膜炎奈瑟菌Neisseriameningitidis5.5X108M6滕黃微球菌Micrococcusluteus8.0X107馬紅球菌Rhodococcusequi7.2X108格氏李斯特菌Listeriagrayi2.0X109瓊氏不動桿菌Acinetobacterjunii1.1X109副流感嗜血桿菌Haemophilusparainfluenzae1.5X109M7干燥奈瑟氏菌Neisseriasicca6.9X108熒光假單胞菌Pseudomonasfluorescens6.9X108嗜水氣單胞菌Aeromonoashydrophila7.6X108葡萄牙念珠菌Candidalusitaniae2.1X107嗜肺軍團菌Legionellapneumophila5.4X108注：本參考品中的大腸埃希氏菌屬于O157：H7血清型。注：vanA/B,萬古霉素耐藥基因；KPC,碳青酶烯耐藥基因；mecA,甲氧西林耐藥基因。參考品稀釋：所有混合參考品復融至室溫后，用無核