尿液分析儀檢驗的原理與方法

尿液分析儀檢驗的原理與方法尿液潛血檢查是尿液檢驗中一個必不可少的項目，常用的檢驗方法有尿液分析儀潛血反應和尿液顯微鏡檢查紅細胞（鏡檢RBC）兩種。由于顯微鏡檢查對鑒別腎小球性與非腎小球血尿有重要的臨床價值，故有學者提出顯微鏡檢查是尿液紅細胞檢驗的“金標準”，是尿液分析儀無法替代的。但是，近年來隨著尿液分析儀的迅速普及，測量參數(shù)向著快速、簡便、準確的方向發(fā)展，為臨床提供了更好的診斷依據(jù)；顯微鏡檢查耗時費力，許多人不愿意做尿液沉渣檢查。因而在一些醫(yī)院尿液顯微鏡檢查有逐漸被尿液分析儀替代的趨勢。為此，筆者對400例門診患者的隨機尿樣，用尿液分析儀潛血反應和尿液顯微鏡檢查紅細胞兩種方法進行檢驗，并對兩種方法的符合程度進行比較。原理與方法1、原理。尿液分析儀使用的是干化學試紙法，是根據(jù)多聯(lián)試帶上各模塊與尿液成分發(fā)生化學反應后顏色變化的深淺來檢測尿液中的某化學物質(zhì)，如直接檢測紅細胞、白細胞的胞質(zhì)內(nèi)涵物，間接推斷細胞的有無。尿液分析儀潛血反應原理是：血紅蛋白(Hb)中亞鐵血紅素的過氧化物酶樣活性可使過氧化物分解釋放出新生態(tài)［O］，后者氧化底物鄰甲苯胺變成鄰聯(lián)甲苯胺發(fā)生由黃色f草綠色f深藍色的顏色變化。尿液顯微鏡檢查則是通過顯微鏡的放大作用直接將細胞等有形成分直觀真實地呈現(xiàn)在鏡下，是對底物的真實反映。2、方法尿液分析儀檢測尿潛血于混勻的10ml新鮮尿液中浸入尿試紙條1s后取出，上儀器進行測定，自動打印結(jié)果。鏡檢取尿液10ml于試管中，以1500r/min離心5min，棄去上清液，留沉淀0.2ml。充分混勻后，取出約20Pl于載玻片上，加蓋玻片(2.0cmX2.0cm)，然后用較弱的光線以低倍鏡觀察全貌，以免漏掉量少而有意義的物體，再用高倍鏡辨認細胞。結(jié)果報告為：X個/高倍視野（HP）。結(jié)果分析由于兩種檢驗方法的原理不同，影響它們的因素也不同，因而兩種檢驗方法的結(jié)果存在一定的差異。1、假陽性。即尿液分析儀潛血反應陽性，鏡檢陰性，其常見原因有：（1）血紅蛋白（Hb）尿液分析儀潛血反應既能與完整的RBC發(fā)生陽性反應，也可與RBC溶解釋放的Hb發(fā)生陽性反應，而顯微鏡只能檢出尿中未溶解的RBC。健康人尿中Hb含量極微，定性為陰性。疾病時，尿中Hb有兩個來源：一是發(fā)生血管內(nèi)溶血，血漿Hb超過了結(jié)合珠蛋白的結(jié)合能力，游離Hb從尿中排出。另一個是尿路（尤其是上尿路）出血，RBC在高滲或（和）低滲時破壞Hb逸出。此時，尿液分析儀潛血反應陽性，但尿沉渣鏡檢不見RBC或僅見RBC碎片。（2） 肌紅蛋白（Mb）分子中也含有血紅素基團，具有過氧化物酶活性°Mb主要存在于心肌和骨骼肌組織中，正常人尿中含量甚微，不能檢出。當心肌或骨骼肌發(fā)生嚴重損傷時，血漿Mb增高，經(jīng)腎臟排泄，使尿液Mb含量增高，故潛血反應呈陽性，鏡檢RBC為陰性。（3） 某些患者尿液中含有對熱不穩(wěn)定酶，也可使試劑塊發(fā)生顏色改變，出現(xiàn)潛血反應陽性，鏡檢為陰性。（4） 某些氧化性污染物，例如次氯酸鹽會導致潛血反應假陽性。（5）菌尿尿液是細菌良好的培養(yǎng)基，菌尿時有些細菌會產(chǎn)生氧化性物質(zhì)，使得試劑塊發(fā)生顏色變化，導致潛血反應陽性，鏡檢RBC為陰性。此外，微生物過氧化酶的侵入也可引起假陽性。（6）長時間存放及高溫實驗證明，標本不新鮮，存放時間長或高溫存放，使?jié)撗磻年栃月氏鄬υ龈?，而RBC鏡檢相應減少，測試結(jié)果極有可能出現(xiàn)假陽性。因此，建議尿液標本存放時間不得超過4h。（7）尿試紙條的超期使用或被污染以及不妥善保存和操作方法的不正確，均可造成測試結(jié)果假陽性。（8）尿液分析儀靈敏度過高（0.2mg/dl出現(xiàn)++），“級差”范圍太大（0.8?50mg/dl級為+++），常會遇到儀器測試為++，而鏡檢測試紅細胞為陰性，臨床上又找不到任何導致血紅蛋白尿原因的情況。2、假陰性。即鏡檢陽性，尿液分析儀潛血反應陰性，其常見原因有:（1）食物或藥物的影響：由于飲食或藥物使尿液呈堿性時，RBC溶解破裂，形成褐色顆粒，潛血反應呈陽性，而鏡檢呈陰性。（2）VitC尿液中大量存在時，能競爭性奪取反應產(chǎn)生的氧，引起假陰性反應。（3）高比重、高蛋白尿樣降低了試劑塊潛血反應的靈敏度，使?jié)撗磻霈F(xiàn)假陰性。（4）尿液中黏液成分增多，使RBC被包裹起來，試劑接觸不到Hb，而使?jié)撗磻尸F(xiàn)假陰性。3、離心對結(jié)果的影響。離心時如速度過快，可使有形成分破壞；但速度過慢，當每毫升尿液中的RBC在5000以下時，沉渣中可能找不到RBC，以至把隱匿型腎小球腎炎漏掉，因而在對檢驗結(jié)果有懷疑時，可用潛血反應證實。分析結(jié)論尿液分析儀法檢測尿中紅細胞異常敏感，有時可與鏡檢結(jié)果存在差異，要充分考慮影響測定結(jié)果因素，并結(jié)合臨床進行全面分析，原則上尿液分析儀潛血反應陽性結(jié)果都應以顯微鏡法復檢，這是做好尿液檢驗質(zhì)量保證的重要環(huán)