標(biāo)準(zhǔn)解讀
《GB/T 28067-2011 甘蔗黃葉病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)方法》是一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),規(guī)定了采用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR技術(shù)對(duì)甘蔗黃葉病毒進(jìn)行檢測(cè)的具體方法。該標(biāo)準(zhǔn)適用于甘蔗及其相關(guān)材料中甘蔗黃葉病毒的定性檢測(cè)。
標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)描述了實(shí)驗(yàn)所需的主要儀器設(shè)備和試劑,包括但不限于核酸提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq DNA聚合酶等,并明確了這些試劑的選擇要求與質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于樣本處理,給出了詳細(xì)的步驟指導(dǎo),從樣品采集到RNA提取再到cDNA合成,每一步都做了具體說(shuō)明,以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性和準(zhǔn)確性。
在引物設(shè)計(jì)方面,《GB/T 28067-2011》提供了針對(duì)甘蔗黃葉病毒特定序列區(qū)域設(shè)計(jì)引物的原則及推薦使用的引物序列。此外,還介紹了如何設(shè)置反應(yīng)體系、選擇合適的擴(kuò)增條件以及如何通過(guò)熔解曲線分析來(lái)判斷陽(yáng)性或陰性結(jié)果的方法。
標(biāo)準(zhǔn)中特別強(qiáng)調(diào)了質(zhì)量控制的重要性,不僅包括內(nèi)部對(duì)照(如無(wú)模板對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照)的使用,還提出了對(duì)外部質(zhì)控品的要求,以保證整個(gè)檢測(cè)過(guò)程的有效性和可靠性。同時(shí),對(duì)于可能出現(xiàn)的各種問(wèn)題,比如假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果的原因分析及解決策略也有所涉及。
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....
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2011-12-30 頒布
- 2012-06-01 實(shí)施



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GB/T 28067-2011甘蔗黃葉病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)方法-免費(fèi)下載試讀頁(yè)文檔簡(jiǎn)介
ICS6502001
B16..
中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
GB/T28067—2011
甘蔗黃葉病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)方法
Detectionofsugarcaneyellowleafvirususingthereal-timeRT-PCR
2011-12-30發(fā)布2012-06-01實(shí)施
中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布
中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)
GB/T28067—2011
前言
本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草
GB/T1.1—2009。
本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口
(SAC/TC271)。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位福建農(nóng)林大學(xué)甘蔗綜合研究所農(nóng)業(yè)部甘蔗及制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心農(nóng)業(yè)
:、、
部甘蔗遺傳改良重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室
。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人高三基陳平華陳如凱郭晉隆張華許莉萍王恒波陳由強(qiáng)
:、、、、、、、。
Ⅰ
GB/T28067—2011
甘蔗黃葉病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)方法
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了甘蔗黃葉病毒實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)方法所需的儀器與試劑樣品的采集與前處
RT-PCR、
理操作方法以及結(jié)果判定
、。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于甘蔗植株種苗及種莖中甘蔗黃葉病毒的快速檢測(cè)診斷
、、。
2術(shù)語(yǔ)和定義
下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件
。
21
.
反轉(zhuǎn)錄reversetranscription
以為模板合成的過(guò)程也稱逆轉(zhuǎn)錄
RNADNA,。
22
.
實(shí)時(shí)熒光RT-PCRrealtimeRT-PCR
實(shí)時(shí)熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
-。
23
.
Ct值cycletime
每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)
。
3縮略語(yǔ)
下列縮略語(yǔ)適用于本文件
。
核糖核酸
RNA:
Taq酶Taq聚合酶
:DNA
種脫氧核苷三磷酸混合液
dNTPs:45′-
酶
RNase:RNA
莫洛尼鼠白血病病毒Moloneymurineleukeminvirus反轉(zhuǎn)錄酶
M-MLV:()
羧基熒光素
FAM:6-
羧基四甲基羅丹明
TAMRA:6-
4方法原理
在反轉(zhuǎn)錄酶作用下將反轉(zhuǎn)錄成再以為模板利用Taq酶進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光擴(kuò)
RNAcDNA,cDNAPCR
增反應(yīng)采用Taq探針?lè)椒ㄔ诒葘?duì)甘蔗黃葉病毒外殼蛋白基因的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)一對(duì)僅在甘蔗黃
(Man)。,
葉病毒外殼蛋白基因間保守的特異性引物和一條特異性的熒光雙標(biāo)記探針探針的端標(biāo)記熒
。5’FAM
光素為報(bào)告熒光基團(tuán)端標(biāo)記熒光素為淬滅熒光基團(tuán)結(jié)合部位位于目的擴(kuò)增片段內(nèi)部
,3’TAMRA,。
當(dāng)完整的探針與目的序列配對(duì)時(shí)熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與端的淬滅劑接近而被淬滅儀器檢測(cè)不
,3’,
到熒光信號(hào)但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí)Taq酶發(fā)揮的外切核酸酶功能
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