大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞工廠課件

細(xì)胞工廠細(xì)胞工廠1內(nèi)容一〕動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞工廠二〕生物制品三〕疫苗四〕現(xiàn)代生物技術(shù)與基因工程五〕單克隆抗體與抗體藥物六〕干細(xì)胞與體細(xì)胞治療內(nèi)容一〕動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞工廠2我們熟知的細(xì)胞培養(yǎng)——?jiǎng)游锛?xì)胞培養(yǎng)我們熟知的細(xì)胞培養(yǎng)——?jiǎng)游锛?xì)胞培養(yǎng)3動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)1〕無菌環(huán)境：超凈臺(tái)、平安柜2〕生長(zhǎng)環(huán)境：CO2培養(yǎng)箱3〕營(yíng)養(yǎng)環(huán)境：培養(yǎng)基4〕貼壁環(huán)境：培養(yǎng)瓶〔皿〕等、細(xì)胞工廠動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)1〕無菌環(huán)境：超凈臺(tái)、平安柜4動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài)貼壁細(xì)胞：細(xì)胞的生長(zhǎng)必須有可以貼附的支持物外表，依靠自身分泌的或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能在該外表上生長(zhǎng)、增殖，當(dāng)細(xì)胞在該外表生長(zhǎng)后，一般形成兩種形態(tài)，即成纖維樣細(xì)胞型或上皮樣細(xì)胞型懸浮細(xì)胞：懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)，如淋巴細(xì)胞、Namalwa細(xì)胞兼性貼壁細(xì)胞：中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞、小鼠L929細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài)貼壁細(xì)胞：細(xì)胞的生長(zhǎng)必須有可以貼附的支持物外表5〔一〕貼附型：大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞貼附生長(zhǎng)，屬于貼壁依賴性細(xì)胞貼附:是大多數(shù)有機(jī)體細(xì)胞在體內(nèi)生存和生長(zhǎng)發(fā)育的根本存在方式結(jié)果:基于貼附特性，使細(xì)胞與細(xì)胞之間相互結(jié)合形成組織，有機(jī)體的絕大多數(shù)細(xì)胞必須貼附于一固相外表才能生存和生長(zhǎng)。培養(yǎng)時(shí)：這些細(xì)胞被放到體外環(huán)境中以后,同樣需要貼附于某一固相外表才能生存和生長(zhǎng)，因而屬于貼附型細(xì)胞貼附(錨定或錨著)依賴型(性)細(xì)胞：唯有貼附于固相外表才能生存的細(xì)胞〔一〕貼附型：6貼附生長(zhǎng)型細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)常用的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、6孔板、96孔板貼附生長(zhǎng)型細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)常用的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、6孔板、96孔板7細(xì)胞貼附材料與外表貼附的固相外表材料：玻璃、塑料〔聚苯乙烯〕玻璃：本身具有親水性，適于細(xì)胞貼壁塑料：沒有親水性，不能使細(xì)胞貼壁，所以必須在塑料外表進(jìn)展親水性接枝〔等離子處理〕細(xì)胞貼附材料與外表貼附的固相外表材料：玻璃、塑料〔聚苯乙烯〕8〔二〕懸浮型：見于少數(shù)特殊的細(xì)胞，如某些類型的癌細(xì)胞及白血病細(xì)胞。胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長(zhǎng)。這類細(xì)胞容易大量繁殖。概念：培養(yǎng)時(shí)不貼附于底物而呈懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)或以機(jī)械方法使保持懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)來源：自血，脾或骨髓，血中白細(xì)胞癌腫細(xì)胞特點(diǎn)：在懸浮中生長(zhǎng)良好細(xì)胞圓形，單個(gè)或小細(xì)胞團(tuán)優(yōu)點(diǎn)：生存空間大，提供數(shù)量大，傳代方便(不需消化)，易于收獲，可獲得穩(wěn)定狀態(tài)缺點(diǎn)：純化不方便，不能通過離心將死、活細(xì)胞別離〔二〕懸浮型：9懸浮生長(zhǎng)型細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)型細(xì)胞10懸浮培養(yǎng)磁力攪拌器懸浮培養(yǎng)磁力攪拌器11大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞工廠培養(yǎng)技術(shù)在大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用.doc大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞工廠培養(yǎng)技術(shù)在大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用.do12轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的缺點(diǎn)轉(zhuǎn)瓶技術(shù)為傳統(tǒng)的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，細(xì)胞接種在旋轉(zhuǎn)的圓筒形培養(yǎng)器-轉(zhuǎn)瓶中，培養(yǎng)過程中轉(zhuǎn)瓶不斷旋轉(zhuǎn)，使細(xì)胞交替接觸培養(yǎng)液和空氣。缺點(diǎn)：勞動(dòng)強(qiáng)度大，占地空間大，單位體積提供細(xì)胞生長(zhǎng)的外表積小，細(xì)胞生長(zhǎng)密度低，瓶間差異較難控制等，因而難以產(chǎn)業(yè)化或規(guī)模化生產(chǎn)。重要的是：轉(zhuǎn)瓶由于不是靜止培養(yǎng)，產(chǎn)品質(zhì)量經(jīng)常達(dá)不到要求或由于細(xì)胞易破碎而存在DNA毒性潛在危險(xiǎn)，據(jù)稱國(guó)家準(zhǔn)備淘汰轉(zhuǎn)瓶生產(chǎn)技術(shù)。

轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的缺點(diǎn)轉(zhuǎn)瓶技術(shù)為傳統(tǒng)的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，細(xì)胞接種在旋13細(xì)胞工廠用于大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)與生產(chǎn)細(xì)胞工廠用于大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)與生產(chǎn)14細(xì)胞工廠關(guān)鍵技術(shù)：貼壁處理：高真空等離子接枝外表處理〔know-how:接枝材料與接枝技術(shù)〕材料性能：生物相容性〔無細(xì)胞毒性〕多層焊接技術(shù)：密封性與結(jié)實(shí)性滅菌技術(shù)：Y射線輻照細(xì)胞工廠關(guān)鍵技術(shù)：15細(xì)胞工廠競(jìng)爭(zhēng)NuncCorningDHS細(xì)胞工廠競(jìng)爭(zhēng)Nunc16DHS細(xì)胞工廠DHS大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)單頁.pdfDHS細(xì)胞工廠DHS大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)單頁.pdf17NuncCellFactoryNuncCellFactory18CorningCellSTACKChamberChoiceoftraditionalsurfacetreatment(TC),newCorning?CellBIND?Surfaceforenhancedcellattachment,orUltra-LowAttachmentSurfaceforreducedcellattachmentCorningCellSTACKChamberChoic19CorningCellSTACKChamberCorningCellSTACKChamber20三種細(xì)胞工廠的比較材料：均為PS塑料外表處理：各自的Know-how頂層：DHS同Nunc,便于顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況焊接工藝：Nunc采用超聲焊接，Corning采用特殊膠粘接，Corning的更加結(jié)實(shí)〔不易開裂〕，所以DHS采用Corning的粘接工藝只有DHS是可以定制任意層的細(xì)胞工廠三種細(xì)胞工廠的比較材料：均為PS塑料21細(xì)胞工廠的使用細(xì)胞工廠的使用22實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用：替代培養(yǎng)瓶及多層培養(yǎng)瓶實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用：替代培養(yǎng)瓶及多層培養(yǎng)瓶23細(xì)胞培養(yǎng)的評(píng)價(jià)貼壁率細(xì)胞生長(zhǎng)密度細(xì)胞形態(tài)毒力測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)的評(píng)價(jià)貼壁率24謝謝！謝謝！25細(xì)胞工廠細(xì)胞工廠26內(nèi)容一〕動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞工廠二〕生物制品三〕疫苗四〕現(xiàn)代生物技術(shù)與基因工程五〕單克隆抗體與抗體藥物六〕干細(xì)胞與體細(xì)胞治療內(nèi)容一〕動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞工廠27我們熟知的細(xì)胞培養(yǎng)——?jiǎng)游锛?xì)胞培養(yǎng)我們熟知的細(xì)胞培養(yǎng)——?jiǎng)游锛?xì)胞培養(yǎng)28動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)1〕無菌環(huán)境：超凈臺(tái)、平安柜2〕生長(zhǎng)環(huán)境：CO2培養(yǎng)箱3〕營(yíng)養(yǎng)環(huán)境：培養(yǎng)基4〕貼壁環(huán)境：培養(yǎng)瓶〔皿〕等、細(xì)胞工廠動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)1〕無菌環(huán)境：超凈臺(tái)、平安柜29動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài)貼壁細(xì)胞：細(xì)胞的生長(zhǎng)必須有可以貼附的支持物外表，依靠自身分泌的或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能在該外表上生長(zhǎng)、增殖，當(dāng)細(xì)胞在該外表生長(zhǎng)后，一般形成兩種形態(tài)，即成纖維樣細(xì)胞型或上皮樣細(xì)胞型懸浮細(xì)胞：懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)，如淋巴細(xì)胞、Namalwa細(xì)胞兼性貼壁細(xì)胞：中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞、小鼠L929細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài)貼壁細(xì)胞：細(xì)胞的生長(zhǎng)必須有可以貼附的支持物外表30〔一〕貼附型：大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞貼附生長(zhǎng)，屬于貼壁依賴性細(xì)胞貼附:是大多數(shù)有機(jī)體細(xì)胞在體內(nèi)生存和生長(zhǎng)發(fā)育的根本存在方式結(jié)果:基于貼附特性，使細(xì)胞與細(xì)胞之間相互結(jié)合形成組織，有機(jī)體的絕大多數(shù)細(xì)胞必須貼附于一固相外表才能生存和生長(zhǎng)。培養(yǎng)時(shí)：這些細(xì)胞被放到體外環(huán)境中以后,同樣需要貼附于某一固相外表才能生存和生長(zhǎng)，因而屬于貼附型細(xì)胞貼附(錨定或錨著)依賴型(性)細(xì)胞：唯有貼附于固相外表才能生存的細(xì)胞〔一〕貼附型：31貼附生長(zhǎng)型細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)常用的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、6孔板、96孔板貼附生長(zhǎng)型細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)常用的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、6孔板、96孔板32細(xì)胞貼附材料與外表貼附的固相外表材料：玻璃、塑料〔聚苯乙烯〕玻璃：本身具有親水性，適于細(xì)胞貼壁塑料：沒有親水性，不能使細(xì)胞貼壁，所以必須在塑料外表進(jìn)展親水性接枝〔等離子處理〕細(xì)胞貼附材料與外表貼附的固相外表材料：玻璃、塑料〔聚苯乙烯〕33〔二〕懸浮型：見于少數(shù)特殊的細(xì)胞，如某些類型的癌細(xì)胞及白血病細(xì)胞。胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長(zhǎng)。這類細(xì)胞容易大量繁殖。概念：培養(yǎng)時(shí)不貼附于底物而呈懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)或以機(jī)械方法使保持懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)來源：自血，脾或骨髓，血中白細(xì)胞癌腫細(xì)胞特點(diǎn)：在懸浮中生長(zhǎng)良好細(xì)胞圓形，單個(gè)或小細(xì)胞團(tuán)優(yōu)點(diǎn)：生存空間大，提供數(shù)量大，傳代方便(不需消化)，易于收獲，可獲得穩(wěn)定狀態(tài)缺點(diǎn)：純化不方便，不能通過離心將死、活細(xì)胞別離〔二〕懸浮型：34懸浮生長(zhǎng)型細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)型細(xì)胞35懸浮培養(yǎng)磁力攪拌器懸浮培養(yǎng)磁力攪拌器36大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞工廠培養(yǎng)技術(shù)在大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用.doc大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞工廠培養(yǎng)技術(shù)在大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用.do37轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的缺點(diǎn)轉(zhuǎn)瓶技術(shù)為傳統(tǒng)的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，細(xì)胞接種在旋轉(zhuǎn)的圓筒形培養(yǎng)器-轉(zhuǎn)瓶中，培養(yǎng)過程中轉(zhuǎn)瓶不斷旋轉(zhuǎn)，使細(xì)胞交替接觸培養(yǎng)液和空氣。缺點(diǎn)：勞動(dòng)強(qiáng)度大，占地空間大，單位體積提供細(xì)胞生長(zhǎng)的外表積小，細(xì)胞生長(zhǎng)密度低，瓶間差異較難控制等，因而難以產(chǎn)業(yè)化或規(guī)模化生產(chǎn)。重要的是：轉(zhuǎn)瓶由于不是靜止培養(yǎng)，產(chǎn)品質(zhì)量經(jīng)常達(dá)不到要求或由于細(xì)胞易破碎而存在DNA毒性潛在危險(xiǎn)，據(jù)稱國(guó)家準(zhǔn)備淘汰轉(zhuǎn)瓶生產(chǎn)技術(shù)。

轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的缺點(diǎn)轉(zhuǎn)瓶技術(shù)為傳統(tǒng)的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，細(xì)胞接種在旋38細(xì)胞工廠用于大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)與生產(chǎn)細(xì)胞工廠用于大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)與生產(chǎn)39細(xì)胞工廠關(guān)鍵技術(shù)：貼壁處理：高真空等離子接枝外表處理〔know-how:接枝材料與接枝技術(shù)〕材料性能：生物相容性〔無細(xì)胞毒性〕多層焊接技術(shù)：密封性與結(jié)實(shí)性滅菌技術(shù)：Y射線輻照細(xì)胞工廠關(guān)鍵技術(shù)：40細(xì)胞工廠競(jìng)爭(zhēng)NuncCorningDHS細(xì)胞工廠競(jìng)爭(zhēng)Nunc41DHS細(xì)胞工廠DHS大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)單頁.pdfDHS細(xì)胞工廠DHS大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)單頁.pdf42NuncCellFactoryNuncCellFactory43CorningCellSTACKChamberChoiceoftraditionalsurfacetreatment(TC),newCorning?CellBIND?Surfaceforenhancedcellattachment,orUltra-LowAttachmentSurfaceforreducedcellattachmentCorningCellSTACKChamberChoic44CorningCellSTACKChamberCorningCellSTACKChamber45三種細(xì)胞工廠的比較材料：均為PS塑料外表處理：各自的Know-how頂層：DHS同Nunc,便于顯微鏡觀察細(xì)胞生