紅算盤子中三萜類化學(xué)成分及其細(xì)胞毒活性研究

紅算盤子中三萜類化學(xué)成分及其細(xì)胞毒活性研究

作者：肖海濤，王躍虎，郝小燕，楊小生，郝小江【摘要】

目的研究紅算盤子的化學(xué)成分及其細(xì)胞毒活性。方法采用多種色譜方法分離純化，根據(jù)理化性質(zhì)和各種波譜技術(shù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定；用MTT法評價(jià)其細(xì)胞毒活性。結(jié)果從醋酸乙酯部位分離得到6個(gè)三萜類化合物，鑒定為算盤子二醇①，羽扇豆-20(29)-烯-3α，23-二醇②，算盤子酮③，表-羽扇豆醇④，3β,19α,23α-三羥基-12-烯-28-齊墩果酸⑤，2β,3β,23α-三羥基-12-烯-28-齊墩果酸⑥。結(jié)論以上化合物均為首次從紅算盤子中分離得到；其中化合物1～4對人肝癌BEL-7402細(xì)胞，化合物5，6對非小細(xì)胞肺癌A-549細(xì)胞具有一定程度的細(xì)胞毒作用?！娟P(guān)鍵詞】

紅算盤子三萜細(xì)胞毒AbstractObjectiveTostudythechemicalconstituentsofGlochidioncoccineumandtheircytotoxicityinvitro.MethodsVariouscolumnchromatographictechnologieswereappliedforisolationandpurificationandthestructureswereelucidatedbyspectralevidence.MTTmethodwasappliedtoinvestigatetheircytotoxicactivities.ResultsSixcompoundswereisolatedfromthepartofethylacetateandidentifiedasGlochidiol①,Lup-20(29)-ene-1α,23-diol②,Glochidone③,Epi-lupeol④,3β,19α,23α-trihydroxy-12-oleanen-28-oicacid⑤,2β,3β,23α-trihydroxy-12-oleanen-28-oicacid⑥.ConclusionTheabovecompoundswereobtainedfromthisplantforthefirsttime;compounds1～4showedcytotoxicactivitiestohumanhepatoma(BEL-7402),aswellascompounds5and6tolungadenocarcinoma(A-549）celllines.KeywordsGlochidioncoccineum;

Triterpene;

Cytotoxicity紅算盤子Glochidioncoccineum(Buch.-Ham.)Muell.Arg.為大戟科算盤子屬植物，又名算盤珠、野南瓜、饅頭果等，產(chǎn)于廣西、貴州和云南等省區(qū)，生于海拔450～1000m山地疏林或山坡、山谷灌木叢。論文學(xué)術(shù)科研網(wǎng)根、莖、葉和果實(shí)均可藥用，有清熱利濕、活血散淤、消腫解毒之功效，民間常用來治療感冒發(fā)熱、痢疾、瘧疾、急性胃腸炎、消化不良、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、跌打損傷等癥［1］，其化學(xué)成分和生物活性研究尚未見報(bào)道，而現(xiàn)代藥理研究表明算盤子屬植物中的羽扇豆烷型三萜具有潛在的抗腫瘤、抗病毒作用，引起人們極大的關(guān)注［2,3］。為了充分開發(fā)和利用算盤子屬植物資源，我們對該屬植物中的紅算盤子進(jìn)行了化學(xué)成分分析和研究，共分離得到二十多種化學(xué)成分，其結(jié)構(gòu)類型涉及三萜、倍半萜、木脂素、黃酮等。進(jìn)一步的藥理實(shí)驗(yàn)表明，這些化學(xué)成分具有不同程度的抗腫瘤和抗氧化活性。本論文報(bào)道其中的三萜類化學(xué)成分。1

材料與儀器紅算盤子(采自貴州貴陽，經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院陳德媛研究員鑒定，為大戟科算盤子屬植物紅算盤子)。實(shí)驗(yàn)所用硅膠（200-300目）和高效薄層層析板（GF254）為青島海洋化工廠生產(chǎn)；SephadexLH-20為AmershamPharmaciaBiotech公司生產(chǎn)；核磁共振譜由BrukerAM-400、DRX-500型核磁共振儀測定，TMS為內(nèi)標(biāo)；質(zhì)譜由VGAuto-Spec3000或HP5973質(zhì)譜儀測定，電離條件為70eV。2

方法與結(jié)果2.1

提取和分離紅算盤子干燥根莖12.0kg，經(jīng)粉碎成粗品后，用90%的乙醇回流提取3次（3h/次），合并提取液，回收乙醇得濃稠浸膏。用適量水分散，用醋酸乙酯反復(fù)萃取得醋酸乙酯萃取物。醋酸乙酯萃取物（201g）以粗硅膠（80～100目）拌樣（比例為1∶1），上硅膠柱（200目），用石油醚-醋酸乙酯梯度洗脫，分為7段。其中第2段經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析（石油醚-氯仿梯度洗脫）和制備薄層純化，共分離鑒定得到化合物1(6mg）、2(221mg）、3(232mg）、4(26mg）。第3段經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析（石油醚-氯仿，石油醚-丙酮洗脫）、SephadexLH-20［CHCl3-MeOH(1∶1)］層析、制備薄層純化共分離鑒定得到化合物5(29mg）和6(17mg)。2.2

結(jié)構(gòu)鑒定學(xué)術(shù)科研網(wǎng)2.3

活性篩選采用MTT法，以羥基喜樹堿為陽性對照，對化合物1～6進(jìn)行了人肝癌BEL-7402細(xì)胞株和非小細(xì)胞肺癌A-549細(xì)胞株細(xì)胞毒活性篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)羽扇豆烷型三萜對人肝癌BEL-7402細(xì)胞株具有不同程度的抑制作用，其作用順序?yàn)楸?羽扇豆醇＞算盤子二醇＞羽扇豆-20(29)-烯-3α，23-二醇＞算盤子酮，其中以表-羽扇豆醇的毒性最強(qiáng)，半數(shù)抑制濃度（IC50）為34.0μmol?L-1。而齊墩果烷型三萜3β,19α,23α-三羥基-12-烯-28-齊墩果酸和2β,3β,23α-三羥基-12-烯-28-齊墩果酸對非小細(xì)胞肺癌A-549均表現(xiàn)出一定的細(xì)胞毒活性，其半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為35.7μmol?L-1和38.9μmol?L-1。3

討論算盤子屬植物在我國資源豐富，作為藥用植物在世界許多地區(qū)長期應(yīng)用，其化學(xué)及生理活性成分的研究也歷時(shí)悠久，但主要是集中在國外，國內(nèi)研究則相對較少，且不夠深入，這或許與該屬植物前期研究工作所獲知的化學(xué)成分有一定的關(guān)聯(lián)。目前從該屬植物中發(fā)現(xiàn)的化合物類型包括萜類、甾體、生物堿、黃酮、酚酸、木脂素、環(huán)丁烯內(nèi)酯、有機(jī)酸、糖類等。我們選取貴州產(chǎn)紅算盤子作為研究對象，對其化學(xué)成分及其生物活性進(jìn)行研究，從中首次分離了一系列新奇的沒藥烷型降倍半萜類化合物［8，9］。通過活性篩選發(fā)現(xiàn)從該植物中分離得到的倍半萜類、三萜、木脂素、黃酮等化學(xué)單體具有不同程度的抗腫瘤和抗氧化活性，其中三萜是紅算盤子抗腫瘤的主要活性成分。該工作為紅算盤子植物的開發(fā)與應(yīng)用奠定了較好的物質(zhì)基礎(chǔ)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】

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