第五章-溶血性貧血檢驗-臨床檢驗專業(yè)知識課件

第五章-溶血性貧血檢驗—臨床檢驗專業(yè)知識課件學(xué)習(xí)目標○背誦溶血性貧血的概念和分類○記住溶血性貧血檢驗的基本方法○敘述紅細胞滲透脆性試驗、蔗糖溶血試驗、酸溶血試驗的原理、試劑、操作、注意事項和臨床意義返回上一頁下一頁學(xué)習(xí)目標○背誦溶血性貧血的概念和分類返回上一頁下一頁本章目錄第一節(jié)概述第二節(jié)紅細胞膜缺陷的檢驗第三節(jié)紅細胞酶缺陷的檢驗第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗第五節(jié)免疫性溶血性貧血的檢驗返回上一頁下一頁本章目錄第一節(jié)概述返回上一頁下一頁

一、溶血性貧血定義和分類二、溶血性貧血檢驗的基本方法第一節(jié)概述返回上一頁下一頁一、溶血性貧血定義和分類第一節(jié)概述返回上一頁下一一、溶血性貧血定義和分類返回上一頁下一頁一、溶血性貧血定義和分類返回上一頁下一頁一、溶血性貧血定義和分類（一）溶血性貧血的定義溶血性貧血是由于各種原因?qū)е碌募t細胞壽命縮短，破壞過多或加速，超過了骨髓造血代償能力所發(fā)生的一組疾病。返回上一頁下一頁一、溶血性貧血定義和分類（一）溶血性貧血的定義返回上一頁下一一、溶血性貧血定義和分類（二）溶血性貧血的分類

1.根據(jù)紅細胞破壞場所，分為血管內(nèi)和血管外溶血；

2.根據(jù)溶血發(fā)生的急緩，分為急性和慢性；返回上一頁下一頁一、溶血性貧血定義和分類（二）溶血性貧血的分類返回上一頁下一、溶血性貧血定義和分類（二）溶血性貧血的分類

3.根據(jù)病因可分為紅細胞內(nèi)在缺陷和紅細胞外在因素所致。紅細胞內(nèi)在缺陷：膜缺陷酶缺陷血紅蛋白異常返回上一頁下一頁一、溶血性貧血定義和分類（二）溶血性貧血的分類返回上一頁下一一、溶血性貧血定義和分類（二）溶血性貧血的分類

3.根據(jù)病因可分為紅細胞內(nèi)在缺陷和紅細胞外在因素所致。紅細胞內(nèi)在缺陷紅細胞外在因素血液中含有破壞紅細胞的抗體，或感染、物理、化學(xué)因素等。返回上一頁下一頁一、溶血性貧血定義和分類（二）溶血性貧血的分類返回上一頁下一二、溶血性貧血檢驗的基本方法返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法（一）確定是否有溶血的實驗

1.網(wǎng)織紅細胞計數(shù)

2.血清膽紅素測定

3.尿和糞中尿膽原測定

4.骨髓細胞檢驗最直接的確證試驗是紅細胞壽命測定。返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法（一）確定是否有溶血的實驗返回上二、溶血性貧血檢驗的基本方法（二）確定紅細胞破壞場所的實驗說明紅細胞在血管內(nèi)破壞的實驗及結(jié)果:1.血漿游離血紅蛋白增加

2.結(jié)合珠蛋白降低

3.高鐵血紅蛋白增多

4.尿隱血試驗陽性

5.尿含鐵血黃素陽性等返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法（二）確定紅細胞破壞場所的實驗返二、溶血性貧血檢驗的基本方法（二）確定紅細胞破壞場所的實驗說明紅細胞在血管外破壞的實驗血清膽紅素測定返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法（二）確定紅細胞破壞場所的實驗返二、溶血性貧血檢驗的基本方法（三）確定溶血性貧血原因的實驗１．紅細胞膜缺陷的有關(guān)試驗

(1)診斷遺傳性球形紅細胞增多癥的實驗:

紅細胞滲透脆性試驗自身溶血試驗及糾正試驗酸化甘油溶血試驗等返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法（三）確定溶血性貧血原因的實驗返二、溶血性貧血檢驗的基本方法（三）確定溶血性貧血原因的實驗１．紅細胞膜缺陷的有關(guān)試驗

(1)診斷遺傳性球形紅細胞增多癥的實驗

(2)診斷PNH的實驗:

酸化血清溶血試驗蔗糖溶血試驗蛇毒溶血試驗冷抗體溶血試驗返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法（三）確定溶血性貧血原因的實驗返二、溶血性貧血檢驗的基本方法

（三）確定溶血性貧血原因的實驗１．紅細胞膜缺陷的有關(guān)試驗

2．紅細胞酶缺陷的實驗

(1)丙酮酸激酶熒光斑點試驗和活性測定

(2)高鐵血紅蛋白還原試驗

(3)變性珠蛋白小體試驗

(4)G6PD熒光斑點試驗和活性測定

(5)硝基四氮唑藍試驗等其中G6PD活性測定是G6PD缺乏的確證試驗。返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法（三）確定溶血性貧血原因的實驗二、溶血性貧血檢驗的基本方法（三）確定溶血性貧血原因的實驗１．紅細胞膜缺陷的有關(guān)試驗

2．紅細胞酶缺陷的實驗

3．血紅蛋白異常的實驗

(1)血紅蛋白電泳檢測返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法（三）確定溶血性貧血原因的實驗返二、溶血性貧血檢驗的基本方法(2)抗堿血紅蛋白檢測

(3)胎兒血紅蛋白（HbF）酸洗脫試驗

(4)紅細胞鐮變試驗

(5)變性珠蛋白小體測定

(6)異丙醇沉淀試驗

(7)熱變性試驗等。返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法(2)抗堿血紅蛋白二、溶血性貧血檢驗的基本方法（三）確定溶血性貧血原因的實驗１．紅細胞膜缺陷的有關(guān)試驗

2．紅細胞酶缺陷的實驗

3．血紅蛋白異常的實驗

4．免疫性溶血原因的有關(guān)檢查

(1)抗人球蛋白試驗

(2)冷熱溶血試驗

(3)冷凝集素試驗返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法（三）確定溶血性貧血原因的實驗返第二節(jié)紅細胞膜缺陷的檢驗一、紅細胞滲透脆性的試驗二、自身溶血試驗及糾正三、蔗糖溶血試驗四、酸化血清溶血試驗返回上一頁下一頁第二節(jié)紅細胞膜缺陷的檢驗一、紅細胞滲透脆性的試驗返回上一頁★遺傳性溶血性疾病重要篩選試驗紅細胞膜缺陷：滲透脆性增加血紅蛋白異常：滲透脆性降低紅細胞酶缺陷：滲透脆性正常一、紅細胞滲透脆性試驗返回上一頁下一頁★遺傳性溶血性疾病重要篩選試驗一、紅細胞滲透脆性試驗返回上一一、紅細胞滲透脆性試驗（一）簡易半定量法（Sanford法）【原理】紅細胞在低滲鹽水中，水分通過細胞膜進入細胞內(nèi)，使之膨脹破壞而溶血。本試驗是測定紅細胞對不同濃度低滲鹽水的抵抗力，紅細胞對低滲鹽水的抵抗力與其表面積和體積的比值有關(guān)，比值越大，則抵抗力越大，脆性越??；反之比值越小，則抵抗力越小，脆性越大。返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗（一）簡易半定量法（Sanford法）一、紅細胞滲透脆性試驗

（二）孵育脆性試驗【原理】遺傳性球形紅細胞增多癥及某些遺傳性非球形紅細胞溶血性貧血患者的紅細胞，經(jīng)37℃孵育24h后，由于葡萄糖消耗，ATP的儲備減少，導(dǎo)致需要能量的紅細胞膜對鈉離子的主動運轉(zhuǎn)受阻，使鈉離子在紅細胞內(nèi)積聚，細胞膨脹，而致滲透脆性明顯增加。返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗（二）孵育脆性試驗返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗

【試劑】

5g/LNaCl溶液返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗【試劑】返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗(一)半定量法【操作】

1.取12支清潔干燥的試管置試管架上，用蒸餾水稀釋NaCl溶液。

2.靜脈采血1ml，立即依次向每管加入1滴血（貧血患者可加2滴），輕輕顛倒混勻.3.于室溫中靜止2h，觀察溶血情況。返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗(一)半定量法返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗

【結(jié)果判斷】上層溶液開始出現(xiàn)透明紅色者為開始溶血管；溶液呈透明紅色且管底紅細胞完全消失的最高濃度管為完全溶血管。返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗【結(jié)果判斷】返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗【注意事項】

1.氯化鈉必須干燥后準確稱量，用前新鮮配制。

2.所用器具要清潔干燥，混勻時不能用力過大。

3.本試驗忌用抗凝血，如遇特殊情況時可用肝素抗凝。

4.加血時持針角度應(yīng)一致。

5.在白色背景下觀察結(jié)果，結(jié)果不易判斷時可離心后觀察。返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗【注意事項】返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗半定量法返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗半定量法返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗（二）孵育脆性試驗【操作】

1.取肝素抗凝血1份→37℃孵育24h。

2.稀釋氯化鈉磷酸鹽緩沖液成不同濃度。

3.于每管內(nèi)加肝素抗凝血0.05ml,輕輕顛倒混勻。置室溫（20℃左右）30min。返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗（二）孵育脆性試驗返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗（二）孵育脆性試驗【操作】

4.將各管再混勻，離心取上清液，測定各管的吸光度，并以第一管上清液為100%溶血，計算出每一管的溶血百分率。

5.繪制溶血曲線。從曲線上找出50%溶血度的氯化鈉濃度，即為紅細胞中間脆性。返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗（二）孵育脆性試驗返回上一頁下一頁返回上一頁下一頁返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗【參考值】

(一)半定量法開始溶血：4.2～4.6g/LNaCl溶液完全溶血：2.8～3.2g/LNaCl溶液（二）孵育脆性試驗未孵育：50%溶血為4.00～4.45gNaCl/L37℃孵育24h:50%溶血為4.65～5.90gNaCl/L返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗【參考值】返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗【臨床意義】患者比正常對照高0.4g/L即有診斷價值。脆性增加：常見于遺傳性球形紅細胞增多癥、遺傳性橢圓形紅細胞增多癥和部分遺傳性口形紅細胞增多癥。輕型遺傳性球形紅細胞增多癥患者孵育后脆性明顯增加。脆性減低：見于缺鐵性貧血、地中海貧血等。返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗【臨床意義】返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗

檢測患者血液在孵育后，自發(fā)產(chǎn)生溶血的程度并觀察加GLU和/或ATP后，溶血是否糾正，對遺傳性球形紅細胞增多癥有較大診斷價值，對PK缺乏癥、自身免疫性溶血性貧血、G6PD缺乏癥、不穩(wěn)定血紅蛋白病有一定篩選意義。返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗檢測患者血液在孵育后，自發(fā)產(chǎn)生溶二、自身溶血試驗及糾正試驗【原理】正常人血液經(jīng)孵育后，可產(chǎn)生輕微溶血，但遺傳性球形紅細胞增多癥和遺傳性非球形紅細胞溶血性貧血等，自身溶血明顯增強。當加入葡萄糖或ATP后，可獲得不同程度的糾正。因此，本試驗有助于某些溶血性貧血的鑒別。返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗【原理】返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗【操作】返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗【操作】返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗【注意事項】

1．嚴格無菌操作過程。

2．若溶血明顯，A值過大，可增加稀釋倍數(shù)。返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗【注意事項】返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗【參考值】溶血率＜4.0%，加葡萄糖管溶血率＜0.6%，加ATP管溶血率＜0.8%。二、自身溶血試驗及糾正試驗【參考值】二、自身溶血試驗及糾正試驗

【臨床意義】

1.遺傳性球形紅細胞增多癥溶血率增加，加葡萄糖或ATP后可明顯糾正。

2.葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏時溶血率增加，能被葡萄糖和ATP糾正。返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗【臨床意義】返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗

【臨床意義】

3.丙酮酸激酶缺乏癥時溶血率明顯增加，不能被葡萄糖糾正，但能被ATP糾正。

4.陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥、自身免疫性溶血性貧血和藥物性溶血等均不能被葡萄糖糾正。返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗【臨床意義】返回上一頁下一頁三、蔗糖溶血試驗

為PNH的篩選試驗敏感性高，陰性可排除PNH返回上一頁下一頁三、蔗糖溶血試驗為PNH的篩選試驗返回上一頁下一三、蔗糖溶血試驗【原理】等滲低離子強度的蔗糖溶液，經(jīng)溫浴后可加強補體成分與紅細胞膜的結(jié)合，使對補體敏感的紅細胞膜形成缺損，導(dǎo)致蔗糖溶液進入紅細胞內(nèi)，引起細胞膜破裂，發(fā)生溶血。返回上一頁下一頁三、蔗糖溶血試驗【原理】返回上一頁下一頁三、蔗糖溶血試驗【操作】返回上一頁下一頁三、蔗糖溶血試驗【操作】返回上一頁下一頁三、蔗糖溶血試驗

【參考值】正常人為陰性（無溶血）。第一管溶血率﹤5%。返回上一頁下一頁三、蔗糖溶血試驗【參考值】返回上一頁下一頁三、蔗糖溶血試驗

【臨床意義】

1.陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿（PNH）患者本試驗為陽性。本試驗是PNH的簡易過篩試驗，如為陰性，一般可排除PNH。

2.再生障礙性貧血、巨幼細胞性貧血和自身免疫性溶血性貧血患者也偶見陽性，故必要時需作酸化血清溶血試驗加以鑒別。返回上一頁下一頁三、蔗糖溶血試驗【臨床意義】返回上一頁下一頁四、酸化血清溶血試驗

為PNH的確定試驗特異性強，陽性可確診返回上一頁下一頁四、酸化血清溶血試驗為PNH的確定試驗返回上一頁四、酸化血清溶血試驗【原理】在pH6.4～6.6的酸化血清中，補體易被激活，PNH患者體內(nèi)的補體敏感紅細胞，在此條件下易被破壞而發(fā)生溶血，而正常人紅細胞不被破壞。將血清加熱56℃30min滅活補體后，因補體被破壞而失去溶血作用。返回上一頁下一頁四、酸化血清溶血試驗【原理】返回上一頁下一頁四、酸化血清溶血試驗【操作】返回上一頁下一頁四、酸化血清溶血試驗【操作】返回上一頁下一頁四、酸化血清溶血試驗【參考值】正常人為陰性返回上一頁下一頁四、酸化血清溶血試驗【參考值】返回上一頁下一頁四、酸化血清溶血試驗

【臨床意義】陽性主要見于PNH?？勺鳛镻NH的診斷依據(jù)。某些自身免疫性溶血性貧血患者溶血發(fā)作嚴重時，也偶呈陽性。返回上一頁下一頁四、酸化血清溶血試驗【臨床意義】返回上一頁下一頁返回上一頁下一頁返回上一頁下一頁返回上一頁下一頁返回上一頁下一頁小結(jié)

溶血性貧血是由于各種原因?qū)е碌募t細胞壽命縮短，破壞過多或加速，超過了骨髓造血代償能力所發(fā)生的一組疾病。其根據(jù)病因和發(fā)病機制可分為紅細胞內(nèi)在缺陷和紅細胞外在缺陷兩大類，紅細胞內(nèi)在異常又可分為膜缺陷、酶缺陷和血紅蛋白病三種。有關(guān)試驗主要包括診斷遺傳性球形紅細胞增多癥的紅細胞滲透脆性試驗；診斷PNH的酸化血清溶血試驗、蔗糖溶血試驗等，酸化血清溶血試驗是PNH的確證試驗。返回上一頁下一頁小結(jié)溶血性貧血是由于各種原因?qū)е碌募t細胞壽命縮短，破壞過多目標形成性測試返回上一頁下一頁目標形成性測試返回上一頁下一頁請您練習(xí)

什么叫溶血性貧血?

答案:

溶血性貧血是由于各種原因?qū)е碌募t細胞壽命縮短，破壞過多或加速，超過了骨髓造血代償能力所發(fā)生的一組疾病。返回上一頁下一頁請您練習(xí)什么叫溶血性貧血?返回上一頁下一頁請您練習(xí)

根據(jù)病因可將溶血性貧血分為哪幾種?

答案:

可分為紅細胞內(nèi)在缺陷和紅細胞外在缺陷兩大類，紅細胞內(nèi)在異常又可分為膜缺陷、酶缺陷和血紅蛋白病三種。返回上一頁下一頁請您練習(xí)根據(jù)病因可將溶血性貧血分為哪幾種?返回上一頁下一頁請您練習(xí)

請將試驗和對應(yīng)的疾病連線紅細胞滲透脆性試驗PNH的確證試驗蔗糖溶血試驗遺傳性球形紅細胞增多癥酸化血清溶血試驗PNH的篩選試驗返回上一頁下一頁請您練習(xí)請將試驗和對應(yīng)的疾病連線返回上一頁下一頁請您練習(xí)

紅細胞對低滲鹽水的抵抗力與什么有關(guān)?

答案:

紅細胞對低滲鹽水的抵抗力與其表面積和體積的比值有關(guān)，比值越大，則抵抗力越大，脆性越?。环粗戎翟叫?，則抵抗力越小，脆性越大。返回上一頁下一頁請您練習(xí)紅細胞對低滲鹽水的抵抗力與什么有關(guān)?返回上一頁下一請您練習(xí)紅細胞滲透脆性試驗增加有何臨床意義?

答案:

脆性增加：常見于遺傳性球形紅細胞增多癥、遺傳性橢圓形紅細胞增多癥和部分遺傳性口形紅細胞增多癥。輕型遺傳性球形紅細胞增多癥患者孵育后脆性明顯增加。返回上一頁下一頁請您練習(xí)紅細胞滲透脆性試驗增加有何臨床意義?返回上一頁下一頁蔗糖溶血試驗的原理是什么?

答案:

等滲低離子強度的蔗糖溶液，經(jīng)溫浴后可加強補體成分與紅細胞膜的結(jié)合，使對補體敏感的紅細胞膜形成缺損，導(dǎo)致蔗糖溶液進入紅細胞內(nèi)，引起細胞膜破裂，發(fā)生溶血。請您練習(xí)返回上一頁下一頁蔗糖溶血試驗的原理是什么?請您練習(xí)返回上一頁下一頁再見胡建新再見胡建新第五章-溶血性貧血檢驗—臨床檢驗專業(yè)知識課件第三節(jié)紅細胞酶缺陷的檢驗第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗第五節(jié)免疫性溶血性貧血的檢驗

返回上一頁下一頁第三節(jié)紅細胞酶缺陷的檢驗返回上一頁下一頁學(xué)習(xí)目標○說出珠蛋白合成異常檢驗常用試驗的原理、操作及主要臨床意義○概述免疫性溶血性貧血有關(guān)試驗的原理、操作和臨床意義。返回上一頁下一頁學(xué)習(xí)目標○說出珠蛋白合成異常檢驗常用試驗的原理、操作及主要臨第三節(jié)紅細胞酶缺陷的檢驗一、高鐵血紅蛋白還原試驗二、G6PD缺陷變性珠蛋白小體試驗返回上一頁下一頁第三節(jié)紅細胞酶缺陷的檢驗一、高鐵血紅蛋白還原試驗返回上一第三節(jié)紅細胞酶缺陷的檢驗

與溶血有關(guān)的酶缺陷主要有以下三類情況：

1．無氧糖酵解途徑的酶缺陷己糖激酶（HK）、葡萄糖磷酸異構(gòu)酶（GPI）、丙酮酸激酶（PK）等。

2．戊糖磷酸旁路途徑的酶缺陷葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）、6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶（6-PGD）等缺陷。

3．核苷酸代謝的酶缺陷嘧啶5′核苷酸酶（P5′N）和腺苷酸激酶（AK）缺陷可引起溶血。最常見的為葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺陷癥，其次是丙酮酸激酶缺陷癥。返回上一頁下一頁第三節(jié)紅細胞酶缺陷的檢驗與溶血有關(guān)的酶缺陷主要有以下三一、高鐵血紅蛋白還原試驗為G6PD缺乏癥最常用的篩選試驗通過使高鐵血紅蛋白還原的程度了解G6PD酶活性返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗為G6PD缺乏癥最常用的篩選試驗返回一、高鐵血紅蛋白還原試驗原理返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗原理返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗

操作

1.取1︰9的枸櫞酸鈉抗凝血2ml,加入20mg葡萄糖，混勻后以125g離心5min.棄去部分血漿，調(diào)整血細胞與血漿比例為1:1后再混勻。

2.取處理后的血標本1ml，加反應(yīng)液0.1ml,顛倒混合15次，使之與空氣中的氧充分接觸。

3.加塞后37℃水浴3h，同時將以上未加反應(yīng)液的血標本同樣放于37℃水浴3h。返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗操作返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗

【操作】

4.取孵育后混勻的標本和未加反應(yīng)液的孵育標本各0.1ml,加入pH7.4的磷酸鹽緩沖液10ml,混勻放置2min,用分光光度計檢測其吸光度（SA和B）。然后在未加反應(yīng)液的孵育標本中再加入亞硝酸鈉葡萄糖混合液1滴，混勻后放5min，再測定其吸光度為St,此為高鐵血紅蛋白對照。

5.結(jié)果計算返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗【操作】返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗

【參考值】

正常人（G6PD活性正常）還原率≥75%；臍血≥77%。返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗【參考值】返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗

【臨床意義】減低主要見于蠶豆病和伯氨喹啉型藥物溶液血性貧血等患者，G6PD缺乏癥雜合子型還原率為31%～74%，臍血為41%～76%；純合子型還原率≤30%，臍血<40%。返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗【臨床意義】返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗★不穩(wěn)定血紅蛋白病篩選試驗返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗★不穩(wěn)定血紅蛋白病篩選試驗返回上二、變性珠蛋白小體生成試驗【原理】變性珠蛋白小體（Heinz小體）實際是一種變性血紅蛋白顆粒，一般附著在細胞膜上，故又稱血紅蛋白包涵體，多發(fā)生于敏感個體服用藥物或接觸化學(xué)物質(zhì)后。變性珠蛋白小體可被某些堿性染料如結(jié)晶紫、耐爾藍等染成紫色或藍黑色。本試驗可作為G6PD缺乏的篩選試驗。返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗【原理】返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗（耐爾藍法）【操作】（1）取5g/L耐爾藍乙醇溶液1滴，置于玻片一端，待干。（2）取受檢血液1滴置于干燥的染料膜上，用另一玻片角輕輕攪勻。（3）覆以蓋玻片，靜置5～10min。（4）于油鏡下計數(shù)500～1000個紅細胞，計算含Heinz小體的紅細胞的百分率。返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗（耐爾藍法）【操作】返回上一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗（甲紫法）【操作】返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗（甲紫法）【操作】返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗【參考值】正常人無Heinz小體或僅偶見幾個（＜1%）含Heinz的紅細胞。返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗【參考值】返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗

【臨床意義】陽性細胞增高見于G6PD缺乏癥所致的蠶豆病、伯氨喹啉類藥物所致的溶血性貧血和不穩(wěn)定血紅蛋白病患者。返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗【臨床意義】返回上一頁下一頁第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗

血紅蛋白合成異常（血紅蛋白病）包括兩大類，一類是珠蛋白鏈不能合成或合成不足導(dǎo)致血紅蛋白多肽鏈的量異常，引起珠蛋白生成障礙性貧血；另一類是珠蛋白鏈合成但其一級結(jié)構(gòu)不正常導(dǎo)致多肽鏈的質(zhì)的異常，引起異常血紅蛋白病。返回上一頁下一頁第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗血紅蛋白合成異常（血紅蛋白病第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗珠蛋白合成異常的種類1.珠蛋白肽生成障礙性貧血（1）β珠蛋白生成障礙性貧血：常見。β珠蛋白鏈合成障礙，HbA↓，HbF和HbA2↑；或生成α4；（2）α珠蛋白生成障礙性貧血：是α珠蛋白鏈合成受到抑制→HbA和HbF↓，生成HbH或γ4。返回上一頁下一頁第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗珠蛋白合成異常的種類返回上一頁下第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗2.異常血紅蛋白病是由于控制多肽鏈合成的基因發(fā)生突變，氨基酸組成改變，產(chǎn)生結(jié)構(gòu)異常的肽鏈。異常血紅蛋白主要有HbS（引起鐮狀細胞綜合征）、HbC、HbE和不穩(wěn)定血紅蛋白病等。返回上一頁下一頁第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗2.異常血紅蛋白病返回上一頁第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗

檢驗方法１．發(fā)現(xiàn)異常血紅蛋白的初篩試驗２．異常Hｂ的定量試驗：

HｂＡ2定量、抗堿Hｂ測定等。３．紅細胞形態(tài)學(xué)檢查：小細胞低色素。易見靶形紅細胞，常伴有幼紅細胞。HｂH紅細胞內(nèi)包涵體檢查，Heinz小體檢查等。返回上一頁下一頁第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗檢驗方法返回上一頁下一頁第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗發(fā)現(xiàn)異常血紅蛋白的初篩試驗醋酸纖維膜Hｂ電泳檢查HｂF的紅細胞：酸洗脫試驗、檢查HｂS：紅細胞鐮變試驗、血紅蛋白溶解度試驗、檢查HｂH：變性珠蛋白小體、檢查不穩(wěn)定Hｂ：異丙醇試驗和熱變性試驗等。返回上一頁下一頁第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗發(fā)現(xiàn)異常血紅蛋白的初篩試驗返回上第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗

４．異常Hｂ的進一步檢查異常Hｂ珠蛋白肽鏈分析、異常Hｂ的一級結(jié)構(gòu)分析等。檢測珠蛋白中何種肽鏈缺乏及肽鏈中氨基酸排列的順序和替換的位置，確證為某種異常Hｂ。５．血紅蛋白病的產(chǎn)前檢查ａ-珠蛋白基因探針限制性內(nèi)切酶譜分析，限制片段長度多態(tài)性（RELP）聯(lián)鎖分析和寡核苷酸探針雜交試驗等。返回上一頁下一頁第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗４．異常Hｂ的進一步檢查返第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗常用試驗一、血紅蛋電泳二、抗堿血紅蛋白檢測三、異丙醇沉淀實試驗返回上一頁下一頁第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗常用試驗返回上一頁下一頁

一、血紅蛋電泳

血紅蛋白電泳是發(fā)現(xiàn)和分離異常血紅蛋白的重要方法，是診斷血紅蛋白病不可缺少的手段。臨床實驗室多首選醋酸纖維薄膜電泳。返回上一頁下一頁一、血紅蛋電泳血紅蛋白電泳是發(fā)現(xiàn)和分離異常血紅蛋白的重Hb電泳原理組成各種Hｂ珠蛋白的不同肽鏈含有不同的氨基酸，在一定pH值（通常用pH8.5）的緩沖液中可帶有不同的電荷，在電場作用下其移動的方向和速度各不相同而分離出不同區(qū)帶。返回上一頁下一頁Hb電泳原理組成各種Hｂ珠蛋白的不同肽鏈含有不同的氨基酸，AA2

起點HAA2

起點JAA2

起點AFA2

起點AGA2

起點

SDAA2

起點

CE＋－返回上一頁下一頁AA2起點HAA二、抗堿血紅蛋白檢測HbF檢測方法之一β-珠蛋白生成障礙性貧血診斷試驗抗堿血紅蛋白不能完全代表HbF,須電泳法區(qū)分返回上一頁下一頁二、抗堿血紅蛋白檢測HbF檢測方法之一返回上一頁下一頁二、抗堿血紅蛋白檢測

原理胎兒血紅蛋白（HbF）抗堿能力比HbA和HbA2強，在堿性溶液HbF不易變性沉淀，而HbA變性沉淀。測定其上清液中血紅蛋白含量即為抗堿血紅蛋白濃度。此試驗也稱為堿變性試驗。返回上一頁下一頁二、抗堿血紅蛋白檢測原理返回上一頁下一頁二、抗堿血紅蛋白檢測操作返回上一頁下一頁二、抗堿血紅蛋白檢測操作返回上一頁下一頁二、抗堿血紅蛋白檢測

參考值本試驗主要測定HbF,2歲以上的正常人＜2%，新生兒可≥40%。返回上一頁下一頁二、抗堿血紅蛋白檢測參考值返回上一頁下一頁二、抗堿血紅蛋白檢測

臨床意義珠蛋白生成障礙性貧血病人HbF明顯增加，重型者可達30%～90%。返回上一頁下一頁二、抗堿血紅蛋白檢測臨床意義返回上一頁下一頁三、異丙醇沉淀試驗不穩(wěn)定血紅蛋白篩選試驗原理非極性溶劑如異丙醇，可使血紅蛋白分子內(nèi)的氫鍵結(jié)合減弱，在這種溶劑中不穩(wěn)定血紅蛋白的穩(wěn)定性明顯下降，更容易沉淀。含不穩(wěn)定血紅蛋白的血標本在加入異丙醇后很快混濁，并形成絨毛狀沉淀。返回上一頁下一頁三、異丙醇沉淀試驗不穩(wěn)定血紅蛋白篩選試驗返回上一頁下一頁三、異丙醇沉淀試驗操作返回上一頁下一頁三、異丙醇沉淀試驗操作返回上一頁下一頁三、異丙醇沉淀試驗

結(jié)果判斷

5min內(nèi)出現(xiàn)混濁，40min內(nèi)出現(xiàn)沉淀為陽性。返回上一頁下一頁三、異丙醇沉淀試驗結(jié)果判斷返回上一頁下一頁三、異丙醇沉淀試驗

參考值正常人臍血為陽性結(jié)果，出生1個月后逐漸轉(zhuǎn)為陰性，6個月后為陰性。返回上一頁下一頁三、異丙醇沉淀試驗參考值返回上一頁下一頁三、異丙醇沉淀試驗

臨床意義本試驗陽性提示存在不穩(wěn)定血紅蛋白。在HbF、HbH、HbE含量高（＞4%）時、G6PD缺乏及a珠蛋白生成障礙性貧血時均可出現(xiàn)陽性結(jié)果。返回上一頁下一頁三、異丙醇沉淀試驗臨床意義返回上一頁下一頁第五節(jié)免疫性溶血性貧血一、抗人球蛋白試驗二、冷凝集素試驗三、冷熱溶血試驗返回上一頁下一頁第五節(jié)免疫性溶血性貧血一、抗人球蛋白試驗返回上一頁下一頁第四節(jié)免疫性溶血性貧血

免疫性溶血性貧血（AHA）是指由抗體參與的溶血反應(yīng)所導(dǎo)致的貧血。此類溶血是由于紅細胞表面自身的抗原或結(jié)合的外來抗原，在有或無補體的參與下,與抗紅細胞抗體結(jié)合,導(dǎo)致紅細胞凝集或溶解。根據(jù)病因其主要分為自身免疫性、同種免疫性和藥物免疫性溶血性貧血。返回上一頁下一頁第四節(jié)免疫性溶血性貧血免疫性溶血性貧血（AHA）是指由免疫性溶血性貧血

自身免疫性溶血性貧血是指機體免疫功能紊亂，產(chǎn)生抗自身紅細胞的抗體，導(dǎo)致紅細胞破壞加速造成的獲得性溶血性貧血。返回上一頁下一頁免疫性溶血性貧血自身免疫性溶血性貧血是指機體免疫功能紊亂，免疫性溶血性貧血

同種免疫性溶血性貧血是由于人類的異種紅細胞抗原(如ABO血型或Rh血型不合的抗原)刺激機體產(chǎn)生抗體,作用于紅細胞產(chǎn)生溶血,常見于溶血性輸血反應(yīng)和母嬰血型不合引起的新生兒同種免疫性溶血病(IHDN)。返回上一頁下一頁免疫性溶血性貧血同種免疫性溶血性貧血是由于人類的異種紅細免疫性溶血性貧血藥物免疫性溶血性貧血某些藥物通過免疫反應(yīng)誘發(fā)溶血的貧血。臨床上主要有半抗原細胞型、免疫復(fù)合型、自身免疫型。返回上一頁下一頁免疫性溶血性貧血藥物免疫性溶血性貧血某些藥物通過免疫反應(yīng)誘發(fā)一、抗人球蛋白試驗返回上一頁下一頁一、抗人球蛋白試驗返回上一頁下一頁一、抗人球蛋白試驗

參考值正常人直接和間接抗人球蛋白試驗均為陰性。返回上一頁下一頁一、抗人球蛋白試驗參考值返回上一頁下一頁一、抗人球蛋白試驗

臨床意義直接Coombs試驗陽性見于自身免疫性溶血性貧血、冷凝集素綜合征、新生兒溶血病、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、藥物性免疫性溶血、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、惡性淋巴瘤等。當抗體和紅細胞結(jié)合后，有過?？贵w時直接和間接試驗均為陽性。返回上一頁下一頁一、抗人球蛋白試驗臨床意義返回上一頁下一頁二、冷凝集素試驗為冷凝集綜合癥的確定試驗抗體實質(zhì)為IgM返回上一頁下一頁二、冷凝集素試驗為冷凝集綜合癥的確定試驗返回上一頁下一頁二、冷凝集素試驗

原理冷凝集素綜合征的患者血清中存在冷凝集素，其為IgM類完全抗體，在低溫時可使自身紅細胞、O型紅細胞或與受檢者血型相同的紅細胞發(fā)生凝集。凝集反應(yīng)的高峰在0～4℃,當溫度回升到37℃時凝集消失。返回上一頁下一頁二、冷凝集素試驗原理返回上一頁下一頁二、冷凝集素試驗操作返回上一頁下一頁二、冷凝集素試驗操作返回上一頁下一頁二、冷凝集素試驗結(jié)果判斷在4℃出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，放入37℃水浴30min后凝集現(xiàn)象消失者為陽性。出現(xiàn)凝集的血清的最高稀釋度的倒數(shù)為凝集素效價。返回上一頁下一頁二、冷凝集素試驗結(jié)果判斷返回上一頁下一頁二、冷凝集素試驗

參考值正常人冷凝集素效價≤1：16。返回上一頁下一頁二、冷凝集素試驗參考值返回上一頁下一頁二、冷凝集素試驗

臨床意義冷凝集素綜合征患者該試驗為陽性，效價可達1:1000以上。返回上一頁下一頁二、冷凝集素試驗臨床意義返回上一頁下一頁三、冷熱溶血試驗陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿癥的確定試驗免疫抗體本質(zhì)為IgG，屬特殊的冷反應(yīng)抗體返回上一頁下一頁三、冷熱溶血試驗陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿癥的確定試驗返回上一頁下三、冷熱溶血試驗

原理陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿患者血清中有一種特殊的冷反應(yīng)抗體（D-L抗體），該抗體在37℃時不能與紅細胞牢固結(jié)合，在20℃以下時與紅細胞結(jié)合，同時吸附補體，但不溶血。當溫度再升至37℃時，補體激活而發(fā)生血管內(nèi)溶血。此試驗又稱為D-L試驗。返回上一頁下一頁三、冷熱溶血試驗原理返回上一頁下一頁三、冷熱溶血試驗

操作

1．取受檢者靜脈血3ml，加到3支已預(yù)溫至37℃的小試管中，每管1ml,分別標記為A、B、C。

2．A管血凝固后置37℃水浴1h；B管血凝固后置4℃中1h；C管則先置4℃中30min，再置37℃水浴1h，各管均不可搖動。

3．觀察結(jié)果，如僅C管溶血，A、B管不溶血，結(jié)果為陽性，表明患者可能有D-L抗體.返回上一頁下一頁三、冷熱溶血試驗操作返回上一頁下一頁三、冷熱溶血試驗

參考值正常人為陰性。返回上一頁下一頁三、冷熱溶血試驗參考值返回上一頁下一頁三、冷熱溶血試驗

臨床意義本試驗是一種冷溶血抗體簡易過篩試驗，陽性對陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿患者的診斷有一定價值，D-L抗體效價可高于1:40。某些病毒感染及梅毒可出現(xiàn)陽性反應(yīng)。返回上一頁下一頁三、冷熱溶血試驗臨床意義返回上一頁下一頁小結(jié)

本次課主要介紹了紅細胞酶缺陷和血紅蛋白異常的常用篩選試驗，主要有用于檢測葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺陷的高鐵血紅蛋白還原試驗、變性珠蛋白小體試驗；檢測血紅蛋白異常的抗堿血紅蛋白檢測、變性珠蛋白小體測定、異丙醇沉淀試驗等。此外還介紹了免疫性溶血性貧血檢查的試驗,包括抗人球蛋白試驗、冷凝集素試驗、冷熱溶血試驗等，其中抗人球蛋白試驗是檢測不完全抗體的一種重要試驗。返回上一頁下一頁小結(jié)本次課主要介紹了紅細胞酶缺陷和血紅蛋白異常的常用篩選目標形成性測試返回上一頁下一頁目標形成性測試返回上一頁下一頁請您練習(xí)請將試驗和對應(yīng)的疾病連線.

高鐵血紅蛋白還原試驗G6PD缺乏癥抗堿血紅蛋白檢測冷凝集素綜合征患者冷熱溶血試驗血紅蛋白異常冷凝集素試驗陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿患者

返回上一頁下一頁請您練習(xí)請將試驗和對應(yīng)的疾病連線.返回上一頁下一頁請您練習(xí)

紅細胞酶缺陷中哪種酶缺陷最常見?

返回上一頁下一頁答案:

最常見的為葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺陷癥，其次是丙酮酸激酶缺陷癥。請您練習(xí)紅細胞酶缺陷中哪種酶缺陷最常見?返回上一頁下一頁答請您練習(xí)

什么是免疫性溶血性貧血?

返回上一頁下一頁答案:

免疫性溶血性貧血（AHA）是指由抗體參與的溶血反應(yīng)所導(dǎo)致的貧血。請您練習(xí)什么是免疫性溶血性貧血?返回上一頁下一頁答案:請您練習(xí)免疫性溶血性貧血根據(jù)病因分哪幾種?

返回上一頁下一頁答案:

分為自身免疫性、同種免疫性和藥物免疫性溶血性貧血。請您練習(xí)免疫性溶血性貧血根據(jù)病因分哪幾種?返回上一頁下一頁答請您練習(xí)

確定是免疫性溶血性貧血的試驗是什么?

返回上一頁下一頁答案:

抗人球蛋白試驗請您練習(xí)確定是免疫性溶血性貧血的試驗是什么?返回上一頁下一第五章-溶血性貧血檢驗—臨床檢驗專業(yè)知識課件學(xué)習(xí)目標○背誦溶血性貧血的概念和分類○記住溶血性貧血檢驗的基本方法○敘述紅細胞滲透脆性試驗、蔗糖溶血試驗、酸溶血試驗的原理、試劑、操作、注意事項和臨床意義返回上一頁下一頁學(xué)習(xí)目標○背誦溶血性貧血的概念和分類返回上一頁下一頁本章目錄第一節(jié)概述第二節(jié)紅細胞膜缺陷的檢驗第三節(jié)紅細胞酶缺陷的檢驗第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗第五節(jié)免疫性溶血性貧血的檢驗返回上一頁下一頁本章目錄第一節(jié)概述返回上一頁下一頁

一、溶血性貧血定義和分類二、溶血性貧血檢驗的基本方法第一節(jié)概述返回上一頁下一頁一、溶血性貧血定義和分類第一節(jié)概述返回上一頁下一一、溶血性貧血定義和分類返回上一頁下一頁一、溶血性貧血定義和分類返回上一頁下一頁一、溶血性貧血定義和分類（一）溶血性貧血的定義溶血性貧血是由于各種原因?qū)е碌募t細胞壽命縮短，破壞過多或加速，超過了骨髓造血代償能力所發(fā)生的一組疾病。返回上一頁下一頁一、溶血性貧血定義和分類（一）溶血性貧血的定義返回上一頁下一一、溶血性貧血定義和分類（二）溶血性貧血的分類

1.根據(jù)紅細胞破壞場所，分為血管內(nèi)和血管外溶血；

2.根據(jù)溶血發(fā)生的急緩，分為急性和慢性；返回上一頁下一頁一、溶血性貧血定義和分類（二）溶血性貧血的分類返回上一頁下一、溶血性貧血定義和分類（二）溶血性貧血的分類

3.根據(jù)病因可分為紅細胞內(nèi)在缺陷和紅細胞外在因素所致。紅細胞內(nèi)在缺陷：膜缺陷酶缺陷血紅蛋白異常返回上一頁下一頁一、溶血性貧血定義和分類（二）溶血性貧血的分類返回上一頁下一一、溶血性貧血定義和分類（二）溶血性貧血的分類

3.根據(jù)病因可分為紅細胞內(nèi)在缺陷和紅細胞外在因素所致。紅細胞內(nèi)在缺陷紅細胞外在因素血液中含有破壞紅細胞的抗體，或感染、物理、化學(xué)因素等。返回上一頁下一頁一、溶血性貧血定義和分類（二）溶血性貧血的分類返回上一頁下一二、溶血性貧血檢驗的基本方法返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法（一）確定是否有溶血的實驗

1.網(wǎng)織紅細胞計數(shù)

2.血清膽紅素測定

3.尿和糞中尿膽原測定

4.骨髓細胞檢驗最直接的確證試驗是紅細胞壽命測定。返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法（一）確定是否有溶血的實驗返回上二、溶血性貧血檢驗的基本方法（二）確定紅細胞破壞場所的實驗說明紅細胞在血管內(nèi)破壞的實驗及結(jié)果:1.血漿游離血紅蛋白增加

2.結(jié)合珠蛋白降低

3.高鐵血紅蛋白增多

4.尿隱血試驗陽性

5.尿含鐵血黃素陽性等返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法（二）確定紅細胞破壞場所的實驗返二、溶血性貧血檢驗的基本方法（二）確定紅細胞破壞場所的實驗說明紅細胞在血管外破壞的實驗血清膽紅素測定返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法（二）確定紅細胞破壞場所的實驗返二、溶血性貧血檢驗的基本方法（三）確定溶血性貧血原因的實驗１．紅細胞膜缺陷的有關(guān)試驗

(1)診斷遺傳性球形紅細胞增多癥的實驗:

紅細胞滲透脆性試驗自身溶血試驗及糾正試驗酸化甘油溶血試驗等返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法（三）確定溶血性貧血原因的實驗返二、溶血性貧血檢驗的基本方法（三）確定溶血性貧血原因的實驗１．紅細胞膜缺陷的有關(guān)試驗

(1)診斷遺傳性球形紅細胞增多癥的實驗

(2)診斷PNH的實驗:

酸化血清溶血試驗蔗糖溶血試驗蛇毒溶血試驗冷抗體溶血試驗返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法（三）確定溶血性貧血原因的實驗返二、溶血性貧血檢驗的基本方法

（三）確定溶血性貧血原因的實驗１．紅細胞膜缺陷的有關(guān)試驗

2．紅細胞酶缺陷的實驗

(1)丙酮酸激酶熒光斑點試驗和活性測定

(2)高鐵血紅蛋白還原試驗

(3)變性珠蛋白小體試驗

(4)G6PD熒光斑點試驗和活性測定

(5)硝基四氮唑藍試驗等其中G6PD活性測定是G6PD缺乏的確證試驗。返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法（三）確定溶血性貧血原因的實驗二、溶血性貧血檢驗的基本方法（三）確定溶血性貧血原因的實驗１．紅細胞膜缺陷的有關(guān)試驗

2．紅細胞酶缺陷的實驗

3．血紅蛋白異常的實驗

(1)血紅蛋白電泳檢測返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法（三）確定溶血性貧血原因的實驗返二、溶血性貧血檢驗的基本方法(2)抗堿血紅蛋白檢測

(3)胎兒血紅蛋白（HbF）酸洗脫試驗

(4)紅細胞鐮變試驗

(5)變性珠蛋白小體測定

(6)異丙醇沉淀試驗

(7)熱變性試驗等。返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法(2)抗堿血紅蛋白二、溶血性貧血檢驗的基本方法（三）確定溶血性貧血原因的實驗１．紅細胞膜缺陷的有關(guān)試驗

2．紅細胞酶缺陷的實驗

3．血紅蛋白異常的實驗

4．免疫性溶血原因的有關(guān)檢查

(1)抗人球蛋白試驗

(2)冷熱溶血試驗

(3)冷凝集素試驗返回上一頁下一頁二、溶血性貧血檢驗的基本方法（三）確定溶血性貧血原因的實驗返第二節(jié)紅細胞膜缺陷的檢驗一、紅細胞滲透脆性的試驗二、自身溶血試驗及糾正三、蔗糖溶血試驗四、酸化血清溶血試驗返回上一頁下一頁第二節(jié)紅細胞膜缺陷的檢驗一、紅細胞滲透脆性的試驗返回上一頁★遺傳性溶血性疾病重要篩選試驗紅細胞膜缺陷：滲透脆性增加血紅蛋白異常：滲透脆性降低紅細胞酶缺陷：滲透脆性正常一、紅細胞滲透脆性試驗返回上一頁下一頁★遺傳性溶血性疾病重要篩選試驗一、紅細胞滲透脆性試驗返回上一一、紅細胞滲透脆性試驗（一）簡易半定量法（Sanford法）【原理】紅細胞在低滲鹽水中，水分通過細胞膜進入細胞內(nèi)，使之膨脹破壞而溶血。本試驗是測定紅細胞對不同濃度低滲鹽水的抵抗力，紅細胞對低滲鹽水的抵抗力與其表面積和體積的比值有關(guān)，比值越大，則抵抗力越大，脆性越??；反之比值越小，則抵抗力越小，脆性越大。返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗（一）簡易半定量法（Sanford法）一、紅細胞滲透脆性試驗

（二）孵育脆性試驗【原理】遺傳性球形紅細胞增多癥及某些遺傳性非球形紅細胞溶血性貧血患者的紅細胞，經(jīng)37℃孵育24h后，由于葡萄糖消耗，ATP的儲備減少，導(dǎo)致需要能量的紅細胞膜對鈉離子的主動運轉(zhuǎn)受阻，使鈉離子在紅細胞內(nèi)積聚，細胞膨脹，而致滲透脆性明顯增加。返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗（二）孵育脆性試驗返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗

【試劑】

5g/LNaCl溶液返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗【試劑】返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗(一)半定量法【操作】

1.取12支清潔干燥的試管置試管架上，用蒸餾水稀釋NaCl溶液。

2.靜脈采血1ml，立即依次向每管加入1滴血（貧血患者可加2滴），輕輕顛倒混勻.3.于室溫中靜止2h，觀察溶血情況。返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗(一)半定量法返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗

【結(jié)果判斷】上層溶液開始出現(xiàn)透明紅色者為開始溶血管；溶液呈透明紅色且管底紅細胞完全消失的最高濃度管為完全溶血管。返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗【結(jié)果判斷】返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗【注意事項】

1.氯化鈉必須干燥后準確稱量，用前新鮮配制。

2.所用器具要清潔干燥，混勻時不能用力過大。

3.本試驗忌用抗凝血，如遇特殊情況時可用肝素抗凝。

4.加血時持針角度應(yīng)一致。

5.在白色背景下觀察結(jié)果，結(jié)果不易判斷時可離心后觀察。返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗【注意事項】返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗半定量法返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗半定量法返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗（二）孵育脆性試驗【操作】

1.取肝素抗凝血1份→37℃孵育24h。

2.稀釋氯化鈉磷酸鹽緩沖液成不同濃度。

3.于每管內(nèi)加肝素抗凝血0.05ml,輕輕顛倒混勻。置室溫（20℃左右）30min。返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗（二）孵育脆性試驗返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗（二）孵育脆性試驗【操作】

4.將各管再混勻，離心取上清液，測定各管的吸光度，并以第一管上清液為100%溶血，計算出每一管的溶血百分率。

5.繪制溶血曲線。從曲線上找出50%溶血度的氯化鈉濃度，即為紅細胞中間脆性。返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗（二）孵育脆性試驗返回上一頁下一頁返回上一頁下一頁返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗【參考值】

(一)半定量法開始溶血：4.2～4.6g/LNaCl溶液完全溶血：2.8～3.2g/LNaCl溶液（二）孵育脆性試驗未孵育：50%溶血為4.00～4.45gNaCl/L37℃孵育24h:50%溶血為4.65～5.90gNaCl/L返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗【參考值】返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗【臨床意義】患者比正常對照高0.4g/L即有診斷價值。脆性增加：常見于遺傳性球形紅細胞增多癥、遺傳性橢圓形紅細胞增多癥和部分遺傳性口形紅細胞增多癥。輕型遺傳性球形紅細胞增多癥患者孵育后脆性明顯增加。脆性減低：見于缺鐵性貧血、地中海貧血等。返回上一頁下一頁一、紅細胞滲透脆性試驗【臨床意義】返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗

檢測患者血液在孵育后，自發(fā)產(chǎn)生溶血的程度并觀察加GLU和/或ATP后，溶血是否糾正，對遺傳性球形紅細胞增多癥有較大診斷價值，對PK缺乏癥、自身免疫性溶血性貧血、G6PD缺乏癥、不穩(wěn)定血紅蛋白病有一定篩選意義。返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗檢測患者血液在孵育后，自發(fā)產(chǎn)生溶二、自身溶血試驗及糾正試驗【原理】正常人血液經(jīng)孵育后，可產(chǎn)生輕微溶血，但遺傳性球形紅細胞增多癥和遺傳性非球形紅細胞溶血性貧血等，自身溶血明顯增強。當加入葡萄糖或ATP后，可獲得不同程度的糾正。因此，本試驗有助于某些溶血性貧血的鑒別。返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗【原理】返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗【操作】返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗【操作】返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗【注意事項】

1．嚴格無菌操作過程。

2．若溶血明顯，A值過大，可增加稀釋倍數(shù)。返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗【注意事項】返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗【參考值】溶血率＜4.0%，加葡萄糖管溶血率＜0.6%，加ATP管溶血率＜0.8%。二、自身溶血試驗及糾正試驗【參考值】二、自身溶血試驗及糾正試驗

【臨床意義】

1.遺傳性球形紅細胞增多癥溶血率增加，加葡萄糖或ATP后可明顯糾正。

2.葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏時溶血率增加，能被葡萄糖和ATP糾正。返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗【臨床意義】返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗

【臨床意義】

3.丙酮酸激酶缺乏癥時溶血率明顯增加，不能被葡萄糖糾正，但能被ATP糾正。

4.陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥、自身免疫性溶血性貧血和藥物性溶血等均不能被葡萄糖糾正。返回上一頁下一頁二、自身溶血試驗及糾正試驗【臨床意義】返回上一頁下一頁三、蔗糖溶血試驗

為PNH的篩選試驗敏感性高，陰性可排除PNH返回上一頁下一頁三、蔗糖溶血試驗為PNH的篩選試驗返回上一頁下一三、蔗糖溶血試驗【原理】等滲低離子強度的蔗糖溶液，經(jīng)溫浴后可加強補體成分與紅細胞膜的結(jié)合，使對補體敏感的紅細胞膜形成缺損，導(dǎo)致蔗糖溶液進入紅細胞內(nèi)，引起細胞膜破裂，發(fā)生溶血。返回上一頁下一頁三、蔗糖溶血試驗【原理】返回上一頁下一頁三、蔗糖溶血試驗【操作】返回上一頁下一頁三、蔗糖溶血試驗【操作】返回上一頁下一頁三、蔗糖溶血試驗

【參考值】正常人為陰性（無溶血）。第一管溶血率﹤5%。返回上一頁下一頁三、蔗糖溶血試驗【參考值】返回上一頁下一頁三、蔗糖溶血試驗

【臨床意義】

1.陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿（PNH）患者本試驗為陽性。本試驗是PNH的簡易過篩試驗，如為陰性，一般可排除PNH。

2.再生障礙性貧血、巨幼細胞性貧血和自身免疫性溶血性貧血患者也偶見陽性，故必要時需作酸化血清溶血試驗加以鑒別。返回上一頁下一頁三、蔗糖溶血試驗【臨床意義】返回上一頁下一頁四、酸化血清溶血試驗

為PNH的確定試驗特異性強，陽性可確診返回上一頁下一頁四、酸化血清溶血試驗為PNH的確定試驗返回上一頁四、酸化血清溶血試驗【原理】在pH6.4～6.6的酸化血清中，補體易被激活，PNH患者體內(nèi)的補體敏感紅細胞，在此條件下易被破壞而發(fā)生溶血，而正常人紅細胞不被破壞。將血清加熱56℃30min滅活補體后，因補體被破壞而失去溶血作用。返回上一頁下一頁四、酸化血清溶血試驗【原理】返回上一頁下一頁四、酸化血清溶血試驗【操作】返回上一頁下一頁四、酸化血清溶血試驗【操作】返回上一頁下一頁四、酸化血清溶血試驗【參考值】正常人為陰性返回上一頁下一頁四、酸化血清溶血試驗【參考值】返回上一頁下一頁四、酸化血清溶血試驗

【臨床意義】陽性主要見于PNH。可作為PNH的診斷依據(jù)。某些自身免疫性溶血性貧血患者溶血發(fā)作嚴重時，也偶呈陽性。返回上一頁下一頁四、酸化血清溶血試驗【臨床意義】返回上一頁下一頁返回上一頁下一頁返回上一頁下一頁返回上一頁下一頁返回上一頁下一頁小結(jié)

溶血性貧血是由于各種原因?qū)е碌募t細胞壽命縮短，破壞過多或加速，超過了骨髓造血代償能力所發(fā)生的一組疾病。其根據(jù)病因和發(fā)病機制可分為紅細胞內(nèi)在缺陷和紅細胞外在缺陷兩大類，紅細胞內(nèi)在異常又可分為膜缺陷、酶缺陷和血紅蛋白病三種。有關(guān)試驗主要包括診斷遺傳性球形紅細胞增多癥的紅細胞滲透脆性試驗；診斷PNH的酸化血清溶血試驗、蔗糖溶血試驗等，酸化血清溶血試驗是PNH的確證試驗。返回上一頁下一頁小結(jié)溶血性貧血是由于各種原因?qū)е碌募t細胞壽命縮短，破壞過多目標形成性測試返回上一頁下一頁目標形成性測試返回上一頁下一頁請您練習(xí)

什么叫溶血性貧血?

答案:

溶血性貧血是由于各種原因?qū)е碌募t細胞壽命縮短，破壞過多或加速，超過了骨髓造血代償能力所發(fā)生的一組疾病。返回上一頁下一頁請您練習(xí)什么叫溶血性貧血?返回上一頁下一頁請您練習(xí)

根據(jù)病因可將溶血性貧血分為哪幾種?

答案:

可分為紅細胞內(nèi)在缺陷和紅細胞外在缺陷兩大類，紅細胞內(nèi)在異常又可分為膜缺陷、酶缺陷和血紅蛋白病三種。返回上一頁下一頁請您練習(xí)根據(jù)病因可將溶血性貧血分為哪幾種?返回上一頁下一頁請您練習(xí)

請將試驗和對應(yīng)的疾病連線紅細胞滲透脆性試驗PNH的確證試驗蔗糖溶血試驗遺傳性球形紅細胞增多癥酸化血清溶血試驗PNH的篩選試驗返回上一頁下一頁請您練習(xí)請將試驗和對應(yīng)的疾病連線返回上一頁下一頁請您練習(xí)

紅細胞對低滲鹽水的抵抗力與什么有關(guān)?

答案:

紅細胞對低滲鹽水的抵抗力與其表面積和體積的比值有關(guān)，比值越大，則抵抗力越大，脆性越??；反之比值越小，則抵抗力越小，脆性越大。返回上一頁下一頁請您練習(xí)紅細胞對低滲鹽水的抵抗力與什么有關(guān)?返回上一頁下一請您練習(xí)紅細胞滲透脆性試驗增加有何臨床意義?

答案:

脆性增加：常見于遺傳性球形紅細胞增多癥、遺傳性橢圓形紅細胞增多癥和部分遺傳性口形紅細胞增多癥。輕型遺傳性球形紅細胞增多癥患者孵育后脆性明顯增加。返回上一頁下一頁請您練習(xí)紅細胞滲透脆性試驗增加有何臨床意義?返回上一頁下一頁蔗糖溶血試驗的原理是什么?

答案:

等滲低離子強度的蔗糖溶液，經(jīng)溫浴后可加強補體成分與紅細胞膜的結(jié)合，使對補體敏感的紅細胞膜形成缺損，導(dǎo)致蔗糖溶液進入紅細胞內(nèi)，引起細胞膜破裂，發(fā)生溶血。請您練習(xí)返回上一頁下一頁蔗糖溶血試驗的原理是什么?請您練習(xí)返回上一頁下一頁再見胡建新再見胡建新第五章-溶血性貧血檢驗—臨床檢驗專業(yè)知識課件第三節(jié)紅細胞酶缺陷的檢驗第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗第五節(jié)免疫性溶血性貧血的檢驗

返回上一頁下一頁第三節(jié)紅細胞酶缺陷的檢驗返回上一頁下一頁學(xué)習(xí)目標○說出珠蛋白合成異常檢驗常用試驗的原理、操作及主要臨床意義○概述免疫性溶血性貧血有關(guān)試驗的原理、操作和臨床意義。返回上一頁下一頁學(xué)習(xí)目標○說出珠蛋白合成異常檢驗常用試驗的原理、操作及主要臨第三節(jié)紅細胞酶缺陷的檢驗一、高鐵血紅蛋白還原試驗二、G6PD缺陷變性珠蛋白小體試驗返回上一頁下一頁第三節(jié)紅細胞酶缺陷的檢驗一、高鐵血紅蛋白還原試驗返回上一第三節(jié)紅細胞酶缺陷的檢驗

與溶血有關(guān)的酶缺陷主要有以下三類情況：

1．無氧糖酵解途徑的酶缺陷己糖激酶（HK）、葡萄糖磷酸異構(gòu)酶（GPI）、丙酮酸激酶（PK）等。

2．戊糖磷酸旁路途徑的酶缺陷葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）、6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶（6-PGD）等缺陷。

3．核苷酸代謝的酶缺陷嘧啶5′核苷酸酶（P5′N）和腺苷酸激酶（AK）缺陷可引起溶血。最常見的為葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺陷癥，其次是丙酮酸激酶缺陷癥。返回上一頁下一頁第三節(jié)紅細胞酶缺陷的檢驗與溶血有關(guān)的酶缺陷主要有以下三一、高鐵血紅蛋白還原試驗為G6PD缺乏癥最常用的篩選試驗通過使高鐵血紅蛋白還原的程度了解G6PD酶活性返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗為G6PD缺乏癥最常用的篩選試驗返回一、高鐵血紅蛋白還原試驗原理返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗原理返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗

操作

1.取1︰9的枸櫞酸鈉抗凝血2ml,加入20mg葡萄糖，混勻后以125g離心5min.棄去部分血漿，調(diào)整血細胞與血漿比例為1:1后再混勻。

2.取處理后的血標本1ml，加反應(yīng)液0.1ml,顛倒混合15次，使之與空氣中的氧充分接觸。

3.加塞后37℃水浴3h，同時將以上未加反應(yīng)液的血標本同樣放于37℃水浴3h。返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗操作返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗

【操作】

4.取孵育后混勻的標本和未加反應(yīng)液的孵育標本各0.1ml,加入pH7.4的磷酸鹽緩沖液10ml,混勻放置2min,用分光光度計檢測其吸光度（SA和B）。然后在未加反應(yīng)液的孵育標本中再加入亞硝酸鈉葡萄糖混合液1滴，混勻后放5min，再測定其吸光度為St,此為高鐵血紅蛋白對照。

5.結(jié)果計算返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗【操作】返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗

【參考值】

正常人（G6PD活性正常）還原率≥75%；臍血≥77%。返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗【參考值】返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗

【臨床意義】減低主要見于蠶豆病和伯氨喹啉型藥物溶液血性貧血等患者，G6PD缺乏癥雜合子型還原率為31%～74%，臍血為41%～76%；純合子型還原率≤30%，臍血<40%。返回上一頁下一頁一、高鐵血紅蛋白還原試驗【臨床意義】返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗★不穩(wěn)定血紅蛋白病篩選試驗返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗★不穩(wěn)定血紅蛋白病篩選試驗返回上二、變性珠蛋白小體生成試驗【原理】變性珠蛋白小體（Heinz小體）實際是一種變性血紅蛋白顆粒，一般附著在細胞膜上，故又稱血紅蛋白包涵體，多發(fā)生于敏感個體服用藥物或接觸化學(xué)物質(zhì)后。變性珠蛋白小體可被某些堿性染料如結(jié)晶紫、耐爾藍等染成紫色或藍黑色。本試驗可作為G6PD缺乏的篩選試驗。返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗【原理】返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗（耐爾藍法）【操作】（1）取5g/L耐爾藍乙醇溶液1滴，置于玻片一端，待干。（2）取受檢血液1滴置于干燥的染料膜上，用另一玻片角輕輕攪勻。（3）覆以蓋玻片，靜置5～10min。（4）于油鏡下計數(shù)500～1000個紅細胞，計算含Heinz小體的紅細胞的百分率。返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗（耐爾藍法）【操作】返回上一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗（甲紫法）【操作】返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗（甲紫法）【操作】返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗【參考值】正常人無Heinz小體或僅偶見幾個（＜1%）含Heinz的紅細胞。返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗【參考值】返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗

【臨床意義】陽性細胞增高見于G6PD缺乏癥所致的蠶豆病、伯氨喹啉類藥物所致的溶血性貧血和不穩(wěn)定血紅蛋白病患者。返回上一頁下一頁二、變性珠蛋白小體生成試驗【臨床意義】返回上一頁下一頁第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗

血紅蛋白合成異常（血紅蛋白?。┌▋纱箢?，一類是珠蛋白鏈不能合成或合成不足導(dǎo)致血紅蛋白多肽鏈的量異常，引起珠蛋白生成障礙性貧血；另一類是珠蛋白鏈合成但其一級結(jié)構(gòu)不正常導(dǎo)致多肽鏈的質(zhì)的異常，引起異常血紅蛋白病。返回上一頁下一頁第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗血紅蛋白合成異常（血紅蛋白病第四節(jié)珠蛋白合成異常的檢驗珠蛋白合成異常的種類1.珠蛋白肽生成障礙性貧血（1）β珠蛋白生成障礙性貧血：常見。β珠蛋白鏈合成障礙，HbA↓，HbF和HbA2↑；或生成α4；