02-LCMS8050方法編輯操作步驟V2

LCMS-8050方法編輯操作步驟打開(kāi)實(shí)時(shí)分析窗口—鼠標(biāo)左鍵單擊需要使用的儀器配置類(lèi)型聯(lián)機(jī)成功后聽(tīng)到“嘀”一聲，界面顯示如下，LC和MS應(yīng)顯示為“Ready”3．新建文件存儲(chǔ)路徑點(diǎn)擊數(shù)據(jù)管理器窗口右上角的“SelectProject(Folder)”圖標(biāo)（若數(shù)據(jù)管理器窗口沒(méi)有出現(xiàn)，請(qǐng)點(diǎn)擊工具欄中的“ToggleDataExploror”圖標(biāo)）文件存儲(chǔ)路徑為樹(shù)狀結(jié)構(gòu)，下圖藍(lán)色標(biāo)記的文件夾即為選中的文件夾，若需要重新建立新的文件夾，可以先選擇路徑，再點(diǎn)擊下圖中“NewFolder”，新文件夾會(huì)自動(dòng)建立在所選路徑下，文件夾名稱(chēng)可根據(jù)項(xiàng)目要求自行輸入，復(fù)選框中“MethodFiles”、“ReportFormatFiles”、“BatchFiles”默認(rèn)為選中狀態(tài)，表示將當(dāng)前文件夾下的這些文件均復(fù)制到新建立的文件夾中，如果想建立完全空的文件夾，可以將復(fù)選框中的“√”去掉。請(qǐng)將上圖中selectproject和toggledataexploror標(biāo)注互換請(qǐng)將上圖中selectproject和toggledataexploror標(biāo)注互換4．創(chuàng)建新方法鼠標(biāo)左鍵單擊“NewMethodFile”，單擊“Save”圖標(biāo)，在彈出的對(duì)話框中輸入方法文件名，方法文件的保存路徑默認(rèn)為當(dāng)前文件夾，如果需要更換文件夾，“保存”在對(duì)應(yīng)的下拉菜單中可以進(jìn)行更改。5．MRM方法的建立定量工作一般采用MRM模式，對(duì)于目標(biāo)化合物首先需要建立化合物的MRM分析方法。注：MRM參數(shù)與分離條件無(wú)關(guān)，優(yōu)化好的MRM方法可以在不同分析方法中使用。Q1/Q3掃描配制一定濃度（例如100μg/L）的目標(biāo)化合物單標(biāo)或者混標(biāo)，通過(guò)自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣（例如1μL），采用FIA模式，進(jìn)行Q1/Q3掃描尋找目標(biāo)物質(zhì)的母離子，可正負(fù)離子同時(shí)掃描，添加負(fù)離子掃描事件時(shí)，選中“Negative”，鼠標(biāo)左鍵單擊Scan（-），即可自動(dòng)添加負(fù)離子掃描事件。在掃描條件設(shè)置中根據(jù)目標(biāo)化合物的分子量設(shè)置合適的“Startm/z”和“Endm/z”，同時(shí)“EventTime”設(shè)置為0.2sec，“Acq.Time”修改為0-0.5min掃描分析時(shí)“Interface”參數(shù)可采用默認(rèn)參數(shù)，不需要修改分析時(shí)間“DataAcquisition”設(shè)置為0.5min“TimeProgram”不進(jìn)行設(shè)置“Pump”部分選擇“Binarygradient”，“TotalFlow”0.4mL/min，“PumpBConc.”80%“ColumnOven”前的“√”去掉“Autosampler”將RinseType改為“off（FastLC）”將以上條件設(shè)置好后，保存方法，鼠標(biāo)左鍵點(diǎn)擊快捷鍵“”，然后鼠標(biāo)左鍵按“Download”鍵。單針/批處理進(jìn)樣分析。數(shù)據(jù)結(jié)果查察看打開(kāi)Postrun的“再解析”窗口，打開(kāi)數(shù)據(jù)文件，使用“AverageSpectrum”工具，查看某段時(shí)間內(nèi)的平均質(zhì)譜圖，找到目標(biāo)化合物的[M+H]+或者[M-H]-及加合離子信息，根據(jù)分析結(jié)果選擇合適的母離子。上圖中“上圖中“前提離子”改為“前體離子”使用軟件自動(dòng)優(yōu)化產(chǎn)物離子及MRM參數(shù)鼠標(biāo)左鍵單擊“OptimizationforMethod”，彈出的對(duì)話框中選擇“SearchproductionandoptimizeMRM”作為優(yōu)化方式，點(diǎn)擊“下一步”。在彈出的對(duì)話框中依次輸入“CompoundName”、“Precursorm/z”、“End(min)”、“Vial”、“Tray”、“InjVol.”等信息?！癈ompoundName”為目標(biāo)化合物名稱(chēng)“Precursorm/z”為目標(biāo)化合物對(duì)應(yīng)的前體離子“End(min)”設(shè)為0.5min“Vial”為樣品瓶放置的孔位“Tray”為樣品瓶放置的樣品架架號(hào)“InjVol.”為進(jìn)樣體積，通常采用1.0μL前體離子和產(chǎn)物離子質(zhì)量數(shù)“前體離子和產(chǎn)物離子質(zhì)量數(shù)“校準(zhǔn)”建議改為“優(yōu)化”。優(yōu)化結(jié)果的存儲(chǔ)路徑為“OutputFolder”中所顯示的文件夾，可對(duì)文件夾名字進(jìn)行修改。其他條件采用默認(rèn)即可，不必進(jìn)行修改。可以同時(shí)進(jìn)行多個(gè)化合物的優(yōu)化，只需要在列表中依次選中“Target”，編輯相應(yīng)行的內(nèi)容即可。完成以上編輯，鼠標(biāo)左鍵點(diǎn)擊“Start”，開(kāi)始MRM優(yōu)化過(guò)程。注：“采用這種方式完成一個(gè)化合物的MRM優(yōu)化需要5步，通常4分鐘內(nèi)可以完成一個(gè)化合物的優(yōu)化，若時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，建議Stop整個(gè)優(yōu)化過(guò)程，檢查End(min)是否修改為0.5min（默認(rèn)為10min）。產(chǎn)物離子掃描如果需要目標(biāo)化合物的產(chǎn)物離子掃描圖，或者采用自動(dòng)優(yōu)化模式優(yōu)化出來(lái)的離子對(duì)不滿意，需要進(jìn)行目標(biāo)化合物產(chǎn)物離子掃描，了解產(chǎn)物離子的碎裂情況，此時(shí)建議采用產(chǎn)物離子掃描。根據(jù)前體離子的正負(fù)性，選擇“ProductIonScan(+)”或“ProductIonScan(-)”。編輯產(chǎn)物離子掃描范圍，定義“Startm/z”和“Endm/z”，一般設(shè)置50~稍大于母離子質(zhì)荷比輸入母離子信息“PrecursorIonm/z”，根據(jù)Q1/Q3Scan的結(jié)果輸入合適的母離子“CollisionEnergyEngrgy”可從-10.0V開(kāi)始（注：碰撞能量正離子為負(fù)值，負(fù)離子為正值）“EventTime”設(shè)為0.2sec其他部分條件設(shè)置見(jiàn)2）部分，此處不再重復(fù)將此事件復(fù)制，添加到MS的事件表格中添加多個(gè)ProductIonScan數(shù)據(jù)每個(gè)事件中“CollisionEnergy”以5V遞增，考察到-50V數(shù)據(jù)結(jié)果察看打開(kāi)Postrun的“再解析”窗口，打開(kāi)數(shù)據(jù)文件，鼠標(biāo)左鍵單擊色譜圖，在相應(yīng)的“SpectrumView”窗口查看質(zhì)譜圖信息。如果為多Event分析，會(huì)出現(xiàn)多張產(chǎn)物離子質(zhì)譜圖信息，通常選擇前體離子為最大產(chǎn)物離子豐度1/10的質(zhì)譜圖作為典型產(chǎn)物離子分布圖。從產(chǎn)物離子質(zhì)譜圖中可以獲得豐度較高的碎片離子，作為進(jìn)一步MRM優(yōu)化的基礎(chǔ)。使用指定離子對(duì)優(yōu)化的方式進(jìn)行MRM優(yōu)化添加MRM方法，將指定優(yōu)化的前體離子和產(chǎn)物離子輸入表格中，修改Acq.Time0-0.5min注：推薦一個(gè)化合物一個(gè)Event，一個(gè)Event下可以對(duì)應(yīng)這個(gè)化合物的定量、定性離子對(duì)DwellTime不能為0，可以用任意數(shù)字CE值不需要修改一定要修改Acq.Time為0-0.5min（默認(rèn)為0-10min），否則會(huì)使得優(yōu)化時(shí)間大大增加鼠標(biāo)左鍵點(diǎn)擊助手欄“OptimizationforMethod”，在彈出的對(duì)話框中選擇第二種優(yōu)化方式“OptimizeMRMevent”，點(diǎn)擊“下一步”在彈出的對(duì)話框中依次輸入“Vial”、“Tray”、“InjVol.”等信息?！癡ial”為樣品瓶放置的孔位“Tray”為樣品瓶放置的樣品架架號(hào)“InjVol.”為進(jìn)樣體積，通常采用1.0優(yōu)化結(jié)果的存儲(chǔ)路徑為“OutputFolder”中所顯示的文件夾，可對(duì)文件夾名字進(jìn)行修改。其他條件采用默認(rèn)即可，不必進(jìn)行修改?？梢酝瑫r(shí)進(jìn)行多個(gè)化合物的優(yōu)化，只需要在列表中依次選中“Target”，編輯相應(yīng)行的內(nèi)容即可。完成以上編輯，鼠標(biāo)左鍵點(diǎn)擊“Start”，開(kāi)始MRM優(yōu)化過(guò)程。注：“采用這種方式完成一個(gè)化合物的MRM優(yōu)化需要4步，通常4分鐘內(nèi)可以完成一個(gè)化合物的優(yōu)化，若時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，建議Stop整個(gè)優(yōu)化過(guò)程，檢查方法中是否修改為0.5min（默認(rèn)為10min）。6.液質(zhì)方法建立1）參考之前的步驟建立新方法2）將第5步優(yōu)化好的MRM方法加載到建立好的方法文件中找到MRM方法文件所在的文件夾，選中所有需要的MRM方法文件將Acq.Time修改為分析一個(gè)樣品所需的時(shí)間，例如0-10min?？梢灾恍薷囊粋€(gè)Event采集時(shí)間，鼠標(biāo)右鍵調(diào)出菜單，選擇“Setsamemeasurementtime”。3）Interface參數(shù)設(shè)置如果分析時(shí)靈敏度可以滿足要求，可以使用默認(rèn)條件；若需要提高靈敏度，可以對(duì)離子源參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。4）采集時(shí)長(zhǎng)設(shè)置液相條件設(shè)置Pump選項(xiàng)卡欄條件設(shè)置液相色譜的初始條件在Pump選項(xiàng)卡一欄中設(shè)置二元高壓系統(tǒng)選擇“Binarygradient”，設(shè)置“TotalFlow”、初始濃度“PumpBConc.”、最高壓力限“Maximum”、最低壓力限“Minimum”注：PumpBCurve如果采用線性梯度，請(qǐng)采用默認(rèn)值0如果為UHPLC系統(tǒng)，請(qǐng)?jiān)O(shè)置壓縮系數(shù)，鼠標(biāo)左鍵點(diǎn)擊“CompressibilitySettings”，在彈出的對(duì)話框中選擇流動(dòng)相對(duì)應(yīng)的類(lèi)型。梯度時(shí)間程序設(shè)置在表格中輸入時(shí)間程序注：初始條件即0.00minBConc.設(shè)置已經(jīng)在Pump中設(shè)定，時(shí)間程序中無(wú)法輸入0.00min的命令；時(shí)間程序編寫(xiě)時(shí)不需要嚴(yán)格按照時(shí)間先前后順序編寫(xiě)；不要?jiǎng)h除ControllerStop命令，否則程序會(huì)報(bào)錯(cuò)。柱溫設(shè)定將“ColumnOven”前的復(fù)選框選中，在“OvenTemperature”中設(shè)置柱溫。注：“Temperature”90℃（CTO-20A/20AC，CTO-30AS），“Temperature”160℃（CTO-30A）表示柱溫箱的最高溫度，可設(shè)置為色譜柱的最高使用溫度進(jìn)而保護(hù)色譜柱?？刂破髂J(rèn)為“Poweron”，不作修改。自動(dòng)進(jìn)樣器設(shè)置如果分析時(shí)出現(xiàn)樣品架找不到，可以使用“DetectRack”自動(dòng)識(shí)別，系統(tǒng)會(huì)根據(jù)樣品架類(lèi)型自動(dòng)識(shí)別；如果還是找不到，檢查樣品架是否推到位。NeedleStroke為進(jìn)樣針扎入樣品瓶的深度，默認(rèn)52mm，建議不作修改；ControlVialNeedleStroke為0號(hào)架進(jìn)樣針扎入的深度，默認(rèn)52mm；SamplingSpeed為吸樣速度，5.0μL/sec，建議不作修改，如果樣品粘度較大，可以適當(dāng)改??；CoolerTemperature對(duì)于有制冷功能的自動(dòng)進(jìn)樣器可以設(shè)置自動(dòng)進(jìn)樣器冷卻溫度MeasuringLinePurgeVolume為定量環(huán)排氣體積，默認(rèn)100μL，建議不作修改自動(dòng)進(jìn)樣器型號(hào)為SIL-30AC時(shí)：洗針?lè)绞侥J(rèn)采用“Externalonly”，表示進(jìn)行進(jìn)樣針外壁清洗，清洗液默認(rèn)為R0路；清洗速度35μL/sec為最大速度，清洗體積默認(rèn)500μL，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要調(diào)整，最大為2000μL；DipTime為進(jìn)樣針在進(jìn)樣口停留的時(shí)間，最長(zhǎng)為60sec，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要調(diào)整；“Rinepump”默認(rèn)為“Rinseportonly”，表示只使用R0路清洗液對(duì)進(jìn)樣針外壁進(jìn)行清洗；如果化合物殘留嚴(yán)重，SIL-30AC支持使用R3路清洗液作為強(qiáng)洗溶劑對(duì)針外壁進(jìn)行清洗，建議使用“R