系統(tǒng)溶劑法考察羊蹄根對小鼠血小板減少癥的實驗研究

系統(tǒng)溶劑法考察羊蹄根對小鼠血小板減少癥的實驗研究【摘要】目的研究不同極性羊蹄根提取物對小鼠血小板減少癥的治療效果。方法采用72只BAB/小鼠，雌雄各半，隨機分為6組，皮下注射環(huán)磷酰胺〔0.31/20g〕，連續(xù)注射3d；再將6個模型組隨機設為陰性對照組、不同極性的羊蹄根提取物作為給藥組，分別以色拉油以及溶于色拉油中不同極性羊蹄根提取物灌胃，定時采血，檢測血小板數(shù)。結(jié)果與給藥前相比，第12天小鼠血小板減少極顯著(P0.01)；實驗完畢陰性對照組與各羊蹄根提取物之間差異極顯著(P0.01)，其中乙醚、醋酸乙酯組升高明顯；不同極性羊蹄根提取物組于第12天的血小板數(shù)相比差異極顯著(P0.01)。結(jié)論用環(huán)磷酰胺對BAB/小鼠注射方法制造模型簡單易行；羊蹄根各極性提取物對小鼠血小板減少癥有治療效果?！娟P(guān)鍵詞】羊蹄根血小板減少癥血小板減少癥是一種常見的血液玻由于腫瘤的化療、放療也可導致患者血小板數(shù)明顯減少，影響患者的繼續(xù)治療，輸注血小板價格昂貴，且有感染多種病毒的潛在危險，所以這種疾病的研究日益受到醫(yī)學界的重視。羊蹄為蓼科多年生草本植物羊蹄的枯燥根，始見于?神農(nóng)本草經(jīng)?，其主要成分為大黃酸、大黃酚、大黃素及酸模素等。民間驗方用其單味湯劑治療咯、吐、衄血，我們在臨床上以羊蹄根湯劑治療血少板減少癥，療效確切。本文以化療藥物環(huán)磷酰胺制作血小板減少癥模型和羊蹄根不同極性提取物對BAB/小鼠灌胃，觀察其對小鼠血小板減少癥的治療效果?，F(xiàn)將實驗結(jié)果報告如下。1器材及動物飼養(yǎng)環(huán)境1.1藥品與試劑羊蹄根，采自于吉林市郊區(qū)，由吉林醫(yī)藥學院雷鈞濤副教授鑒定為蓼科酸模屬RuexL.植物巴天酸模RpatientiaL.的根，分別以乙醚、氯仿、醋酸乙酯、丙酮、水作為試劑提取羊蹄根的有效成分；環(huán)磷酰胺〔TX〕(上海華聯(lián)制藥，批號010802，200g/瓶，白色方晶)。1.2儀器FA1104型精細電子天平(上海天平廠)，A——800全自動血球分析儀(日本吉泰)；BX51光學顯微鏡(日本LYPUS)，透明小鼠籠(318×202×135)。1.3動物72只安康7周齡二級BAB/小鼠，17～21g，雌雄各半，由長春生物制品研究所實驗動物中心提供，合格證號SXK-2022-0001。1.4飼養(yǎng)環(huán)境溫度〔24±2〕℃，濕度〔50±4〕%，噪聲dB≤60，氨濃度(g/3)≤14；光照12/12；飼喂實驗動物的全價顆粒飼料，飲水以及墊料經(jīng)高溫高壓蒸氣消毒；實驗室、籠具經(jīng)過氧乙酸消毒。2方法2.1血小板減少癥模型的制作將72只BAB/小鼠隨機分為6組，每組12只，雌雄各半按0.3l/20g體重皮下注射用生理鹽水配制成10g/l的環(huán)磷酰胺，1次/d，連續(xù)3次，實驗前1天和注射后經(jīng)尾部取血(20μl)，檢測血小板數(shù)。2.2羊蹄根提取物對小鼠血小板升高影響的實驗設計將6組隨機設為陰性對照組、各極性羊蹄根提取物作為實驗組〔提取試劑分別為乙醚、氯仿、醋酸乙酯、丙酮、水〕。陰性對照組連續(xù)20d以色拉油灌胃，實驗組連續(xù)20d以色拉油配制的各極性羊蹄根提取物灌胃〔0.5g生藥/kg〕。同時在給藥前以及第8，12，16，20天各講行1次尾部采血(20μl)，檢測血小板數(shù)，觀察20d，第20天處死動物。2.3統(tǒng)計學分析計量資料以±s表示,采用t檢驗。3結(jié)果3.1血小板減少癥模型的評價由表1可見，各組實驗動物在研究過程中，血小板數(shù)目有明顯變化。第12天各實驗動物血小板數(shù)目降到最低，與給藥前相比降低極顯著(P0.01)，造模成功。3.2羊蹄根提取物對實驗動物血小板數(shù)目變化的影響情況由表1可見，到實驗完畢時實驗組實驗動物血小板數(shù)目與第12天的相比升高極顯著(P＜0.01)，而以乙醚和醋酸乙酯升高明顯；與陰性對照組相比，實驗組〔乙醚組、醋酸乙酯組〕實驗動物的血小板數(shù)目升高極顯著(P0.01)。表1不同提取物的羊蹄根提取物對血小板數(shù)的影響〔略〕4討論環(huán)磷酰胺為腫瘤化療藥物有抑制免疫功能的作用，給予大劑量的環(huán)磷酰胺可使淋巴結(jié)腸腺及脾臟明顯縮小，B，T淋巴細胞免疫功能下降。在一般臨床使用劑量(≤20g/kg)下，即可引起體液及細胞免疫功能的全面抑制，從而對血小板產(chǎn)生、生成起抑制作用［1］。有關(guān)文獻報道，小鼠連續(xù)3d皮下注射100g/kg的環(huán)磷酰胺，停藥后3d左右血小板可下降20%～30%［2］。本研究即應用環(huán)磷酰胺對血小板的抑制作用，以環(huán)磷酰胺150g/kg連續(xù)3d給小鼠皮下注射，進展血小板減少癥的造模，在第12天血小板數(shù)降到最低，到達20%以上。與實驗前相比，血小板降低顯著。同何學令等［3］的研究結(jié)果根本一致。各極性羊蹄根提取物組治療血小板減少癥的效果上看，給藥20d后，實驗組動物血小板數(shù)與第12天〔到達造模時〕相比顯著升高(P0.01)，其中乙醚組和醋酸乙酯組升高更明顯?？梢娭兴幯蛱愀_有升高血小板的作用，下一步可進展進一步的提取別離工作，以確定其有效成分，為將來開發(fā)治療血小板減少癥的藥物奠定基?！緟⒖嘉墨I】［1］李端.藥理學，第4版［］.北京：人民衛(wèi)生出版社，199