乳及乳制品中抗生素殘留檢測研究進展

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牛奶營養(yǎng)豐富，能提高人體免疫力，加強體質(zhì)。它是對人類最有益和健康的食物之一。隨著乳及乳制品性業(yè)的快速發(fā)展，β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類等抗生素被廣泛應(yīng)用。畜牧業(yè)雖然取得了增產(chǎn)的效果，但不可避免地會造成抗生素殘留。因此，尋找一種簡單、快速、靈敏的抗生素檢測方法，以解決當前我國乳制品性業(yè)面臨的問題，已成為一項緊迫的任務(wù)。

乳及乳制品;抗生素殘留;檢測研究

引言

牛奶因其營養(yǎng)豐富，易于消化，便于食用，而成為人類理想的自然食品。常喝牛奶有助于身體的發(fā)育，補足鈣質(zhì)需求量，減少骨骼萎縮，降低骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生概率。然而，隨著乳及乳制品性業(yè)的快速發(fā)展，抗生素被大量應(yīng)用于畜牧業(yè)中，其根本目的是為了保障動物的健康以及畜牧業(yè)的經(jīng)濟效益，但也不可避免地造成了乳制品中抗生素的殘留。乳與乳制品中抗生素的種類主要包括：四環(huán)素類、β-內(nèi)酰胺類以及氨基糖苷類等，因其可以有效預(yù)防和治療人類和動物的傳染病，而在人類醫(yī)學(xué)和畜牧業(yè)中受到極大關(guān)注，被廣泛用作食品添加劑以及治療畜牧業(yè)中的細菌感染性疾病。牛奶中的抗生素殘留是全世界奶牛業(yè)普遍存在的問題，這是由于奶牛場均用抗生素類藥物治療奶牛疾病，如奶牛的乳腺炎、子宮內(nèi)膜炎或其他炎癥性疾病。據(jù)調(diào)查，在我國臨床型奶牛乳腺炎發(fā)病率占牛乳腺炎總發(fā)病率的21%～23%。

1乳制品中抗生素殘留現(xiàn)狀

自2022年10月起，中國農(nóng)業(yè)部發(fā)布了《無公害食品生鮮牛乳行業(yè)標準》，明確了生鮮乳中“不得檢出抗生素〞的衛(wèi)生指標。但該標準在國內(nèi)并未得到嚴格執(zhí)行，因此一直未能解決我國乳制品中抗生素殘留問題，引發(fā)人們對牛奶安全性的擔(dān)憂，成為人們?nèi)找骊P(guān)注的熱點。2022年，劉衛(wèi)華等[3]在寧夏共檢出原料奶363批次，檢出β-內(nèi)酰胺酶112批次，抗生素總殘留145批次，發(fā)現(xiàn)存在違規(guī)添加和違反停藥期抗生素超標的狀況。2022年對鎮(zhèn)江市奶牛場包裝好的純牛奶和鮮奶進行隨機抽樣檢測，發(fā)現(xiàn)存在一定量的抗生素殘留。從這個角度來看，我國乳制品性業(yè)將長期存在牛奶中的抗生素殘留。

2乳及乳制品中殘留的抗生素

幾十年來，抗生素藥物特別是四環(huán)素類、β-內(nèi)酰胺類和氨基糖苷類抗生素是乳與乳制品中抗生素殘留的主要類別。四環(huán)素類藥物屬于一個抗生素大家族，它的首批成員來自放線菌的鏈霉菌屬。1944年從金色鏈霉菌中分開出金霉素，幾年后，分別從龜裂鏈霉菌和金霉素鏈霉菌中分開出土霉素和地美環(huán)素，金霉素氫解后生成四環(huán)素。20世紀60年代初，人們開發(fā)出了多西環(huán)素，它是土霉素的半合成衍生物，2022年又合成出替加環(huán)素。這一類廣譜抗生素，能抑制蛋白質(zhì)合成，使藥物可逆地與敏感菌的核糖體30S亞基結(jié)合，阻礙氨基酰tRNA與mRNA-核糖體復(fù)合體上的受體結(jié)合，阻止氨基酸增加到肽鏈上，且對四環(huán)素類呈抑菌活性，但是對敏感菌具有殺滅作用。β-內(nèi)酰胺類抗生素包括青霉素族和頭孢菌素族，這類藥物都具有殺菌活性，主要通過干擾細菌繁殖過程中肽聚糖的合成來發(fā)揮效果。β-內(nèi)酰胺類抗生素主要通過共價鍵與細菌細胞壁上的青霉素結(jié)合成蛋白（PBP），PBP是一種胞壁粘肽合成酶，可以使肽聚糖分子的N-乙酰胞壁酸-N-乙酰葡糖胺骨干上肽鏈之間交錯連接。當抗生素與PBP結(jié)合后，細菌細胞壁合成因缺乏交錯連接，細胞壁形成受阻，從而導(dǎo)致生長細胞裂解。

3微生物檢測法

3.1紙片法

常用紙張方法：蘇云金芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌。這兩種方法的檢測過程基本一致，不同的菌株用于檢測奶牛奶中的青霉素（或β-內(nèi)酰胺類抗生素）。將菌株（蘇云金芽孢桿菌或蘇云金芽孢桿菌）接種到培養(yǎng)基上，放在一張裝滿經(jīng)檢驗?zāi)讨破返膱A濾紙上，然后放在一張操縱圓紙上，這是一張含有標準抗生素的陽性紙。奶牛奶中若無抗生素，微生物繁殖生長，濾紙不形成抗菌圈，則為陰性。另一方面，牛奶中有抗生素或抑制劑，紙張上形成了抗菌圈。為了確定陽性和陰性結(jié)果是否為青霉素（或β-內(nèi)酰胺類抗生素）、加熱奶制品和添加青霉素酶測定，奶制品中沒有說明青霉素（或β-內(nèi)酰胺類抗生素）存在的抗菌圈。假如抗菌圈仍舊存在，這意味著其他化合物對抗菌作用負有責(zé)任。但是，當抗菌戒指較小且沒有完全消失時，牛奶中存在不止一種抗菌化合物。此檢測方法的檢測限制為0.01IU/mL。

3.2理化檢驗法

理化學(xué)檢測方法是一種利用基于抗生素分子性質(zhì)的測試儀器進行分開和檢測的方法。分開試驗使用的試驗技術(shù)包括色譜和電泳、紫外線、熒光、質(zhì)譜等。由于檢測的敏感性和結(jié)果的確切穩(wěn)定性，物理化學(xué)檢測方法是確切檢測抗生素殘留的一種方法。采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對中國銷售的50種奶制品進行了檢測，檢測出樣品中的氯霉素含量為0.48微克/千克。這些樣品的檢測限制不能令人滿意，這違反了阻止我國食用食品組織檢測氯霉素的條例。結(jié)合超聲波輔助提取和固相柱提取，優(yōu)化了HPLC色譜分析條件，建立了HPLC色譜綜合分析方法，檢測牛奶中β-內(nèi)酰胺類抗生素殘留。這些方法的優(yōu)點是質(zhì)量和數(shù)量上更準確，但檢測儀器的成本更高，程序更繁雜，有機溶劑的使用量也更大，對人類和環(huán)境構(gòu)成了一定的風(fēng)險。

終止語

乳及乳制品中抗生素殘留問題是涉及人類健康的公共衛(wèi)生問題，目前我國為了解決這個問題已經(jīng)在不斷完善乳及乳制品中抗生素殘留的限定標準，科研工也一直在尋求簡便、快速、確切和靈敏度高的檢測方法，使得乳及乳制品中抗生素殘留檢