形態(tài)檢查在臨床標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗中的作用

1、形態(tài)檢查在臨床標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗中的作用【摘要】自動化和基因的檢測是臨床細(xì)菌學(xué)檢驗的開展趨勢，但形態(tài)學(xué)觀察在常規(guī)性工作仍是非常重要的。它可對自動化儀器檢測的結(jié)果進(jìn)展復(fù)核和修正。把傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)方法與先進(jìn)儀器檢測結(jié)合，將能為臨床提供更有效的信息。因此研究和開展病原生物學(xué)形態(tài)診斷技術(shù)對列舉醫(yī)學(xué)證據(jù)、完善醫(yī)學(xué)診斷具有重要意義?！娟P(guān)鍵詞】臨床標(biāo)本,細(xì)菌學(xué)檢驗自荷蘭人列文虎克antnvanleeuenhek1632-1725創(chuàng)制了第一臺可放大250倍的簡陋顯微鏡，發(fā)現(xiàn)許多肉眼不能發(fā)現(xiàn)的“活的小動物以來，人類對微生物有了初步認(rèn)識，特別近幾十年來，微生物學(xué)的研究迅速開展。涂片直接觀察是指將臨床送來作細(xì)菌學(xué)檢驗的各類

2、標(biāo)本,在進(jìn)展革蘭染色之前,將標(biāo)本涂成薄片在生物顯微鏡的高倍鏡下直接觀察,評價涂片出現(xiàn)的各種病理情況及各種形態(tài)學(xué)特征,可判斷病原微生物的感染情況,進(jìn)而結(jié)合化學(xué)染色技術(shù)對感染的性質(zhì)作出快速的初步判斷。本文就各種臨床標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗中涂片鏡檢的作用展開討論。1尿液標(biāo)本檢驗?zāi)蛞簶?biāo)本的濕片直接鏡檢結(jié)果往往可以作為進(jìn)一步檢驗的根據(jù),根據(jù)涂片鏡檢結(jié)果進(jìn)一步安排培養(yǎng)計數(shù)和細(xì)菌鑒定和藥敏試驗。一般可將未離心的新穎中段尿搖勻后滴片,用位相顯微鏡油鏡檢查。每份標(biāo)本檢查10個視野，每視野中有一個細(xì)菌,相當(dāng)于每毫升尿液中104105個細(xì)菌1。每油鏡視野中發(fā)現(xiàn)101000個細(xì)菌,?？赡苡心蚵犯腥?這時即可與臨床聯(lián)絡(luò)進(jìn)展初

3、報2。衛(wèi)生部2001年新頒發(fā)?醫(yī)院感染診斷標(biāo)準(zhǔn)?中也提到“新穎尿液經(jīng)離心,用相差顯微鏡檢查(400),在30個視野中有半數(shù)視野見到細(xì)菌者可協(xié)助診斷尿路感染。如假設(shè)每個油鏡視野均未見細(xì)菌,取10l尿液接種在血平板上以防漏檢。假設(shè)每油鏡視野中含菌09個,取10l尿液分別接種血液瓊脂平板和中國藍(lán)平板上培養(yǎng)后計數(shù)。假設(shè)每油鏡視野含菌10個或以上,取尿液1l涂平板計數(shù)，如尿液每油鏡視野中細(xì)菌達(dá)10個或以上,就可做直接藥敏試驗3。2痰液標(biāo)本檢驗痰標(biāo)本中存在有大量固有菌群,檢驗中假設(shè)不能將真正的致病菌檢出,必將對診斷和治療產(chǎn)生誤導(dǎo)。涂片鏡檢可先進(jìn)展標(biāo)本合格性斷定，一般每低倍視野扁平上皮細(xì)胞小于10個,白細(xì)胞

4、大于25個,細(xì)菌較純,種數(shù)為12種即為合格標(biāo)本。假設(shè)每視野中鱗狀上皮細(xì)胞10個,且發(fā)現(xiàn)種類繁多的各種細(xì)菌那么為口腔唾液，可判斷為標(biāo)本不合格,假設(shè)觀察到一些或很多不含鱗狀上皮細(xì)胞的視野,尤其是白細(xì)胞大量聚集的地方,換用油鏡檢查,注意細(xì)菌形態(tài)及染色性,為12種或優(yōu)勢菌很可能為病原菌。認(rèn)請其細(xì)菌形態(tài)特點和染色性,在以后的培養(yǎng)物中要注意這類細(xì)菌菌落的出現(xiàn),這時就可做出初報(向臨床報告標(biāo)本的情況,有無炎癥,主要的細(xì)菌,革蘭染色性等),必要時與臨床醫(yī)師聯(lián)絡(luò)理解病人情況。然后選用相應(yīng)培養(yǎng)基如血液瓊脂平板,巧克力色血平板,中國藍(lán)平板等,以四區(qū)劃線作半定量分析。另外痰培養(yǎng)的結(jié)果一定要和直接鏡檢的結(jié)果核對，培養(yǎng)出

5、的優(yōu)勢菌和鏡檢優(yōu)勢菌應(yīng)相符，假設(shè)二者不符,要首先考慮直接鏡檢所見4。3血培養(yǎng)標(biāo)本檢驗臨床對血液標(biāo)本一般不做直接涂片，但對血培養(yǎng)瓶中可疑有菌生長者或自動分析儀血培養(yǎng)管中生長指數(shù)超標(biāo)者,發(fā)現(xiàn)細(xì)菌生長信號,應(yīng)無菌抽取培養(yǎng)物涂片進(jìn)展革蘭染色,查找細(xì)菌,觀察細(xì)菌形態(tài)及染色性初報細(xì)菌的大致類別,同時用位相顯微鏡觀察有無細(xì)菌形態(tài)、動力等特點，根據(jù)顯微鏡檢查的特征,選擇適宜的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)種增菌。對革蘭染色未找到細(xì)菌的血培養(yǎng)瓶,應(yīng)補(bǔ)充吖啶橙染色檢查,發(fā)現(xiàn)陽性者進(jìn)展別離鑒定,未發(fā)現(xiàn)陽性那么應(yīng)轉(zhuǎn)種厭氧和需氧血平板,然后繼續(xù)培養(yǎng)監(jiān)測至最終報告的時間。顯微鏡檢查假如發(fā)現(xiàn)形態(tài)很均一的細(xì)菌,可根據(jù)革蘭染色結(jié)果選擇抗菌藥物進(jìn)展直

6、接藥敏試驗,同時轉(zhuǎn)種培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)菌落,立即做細(xì)菌鑒定和標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗。一般在早晨發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)陽性以后,馬上做藥敏試驗,到下午45點時一般可出初步結(jié)果,向臨床初報,為臨床提供快速的信息，以后按常規(guī)的檢驗程序進(jìn)展。4膿汁標(biāo)本檢驗?zāi)撝瓨?biāo)本的顯微鏡檢查必檢工程，每份膿汁標(biāo)本需進(jìn)展革蘭染色和美蘭染色,以顯微鏡油鏡觀察細(xì)菌的種類、染色性和膿細(xì)胞形態(tài)。假如多形核白細(xì)胞占8090%以上者可斷定為急性炎癥,淋巴細(xì)胞較多者(30%)為慢性炎癥。細(xì)菌的形態(tài)在原始標(biāo)本的涂片中常比在培養(yǎng)物中的更典型。在觀察細(xì)菌時要注意單一或混雜細(xì)菌,有無可疑厭氧菌等。如見著色淺而不均的革蘭陰性桿菌常為厭氧菌，提示需作厭氧菌培養(yǎng)。5腦脊液標(biāo)本檢

7、驗?zāi)X脊液涂片顯微鏡鏡檢是腦脊液檢驗的重要工程，對疾病臨床診斷及起始治療起重要作用。臨床微生物實驗室接到腦脊液標(biāo)本以后，應(yīng)該立即進(jìn)展顯微鏡鏡檢,所見結(jié)果必須立即向醫(yī)師報告。假設(shè)腦脊液呈膿性混濁的,可以不經(jīng)過離心，如為漿液性，需要離心沉淀以后取沉渣作涂片顯微鏡鏡檢，樣材作三張涂片顯微鏡鏡檢。一作革蘭染色,觀察細(xì)菌形態(tài)和染色性,一作美蘭染色,觀察膿細(xì)胞種類也觀察細(xì)菌,一張備用作抗酸性染色檢查結(jié)核桿菌5。初步報告結(jié)果以后按常規(guī)的檢驗程序進(jìn)展操作。6糞便涂片檢驗糞便標(biāo)本一般不做直接涂片顯微鏡鏡檢,但對疑心有霍亂弧菌、葡萄球菌、彎曲菌、難辨芽胞梭菌和真菌感染者,需進(jìn)展直接涂片1。另外糞便推片革蘭染色檢查觀

8、察正常菌群的種類、數(shù)量和比例等可輔助診斷腸道菌群失調(diào)癥。假設(shè)涂片顯微鏡鏡檢觀察到大片葡萄球菌聚集,說明有葡萄球菌結(jié)腸炎,培養(yǎng)時應(yīng)增用血液瓊脂平板,看到大量產(chǎn)芽胞革蘭陽性大桿菌可能為難辨梭菌，結(jié)合臨床表現(xiàn)可以診斷抗生素相關(guān)性腹瀉和假膜性腸炎,別離時可增用fa選擇性培基作厭氧培養(yǎng)。腹瀉糞便中常見膿細(xì)胞，用位相顯微鏡直接檢查有時可見動力很強(qiáng)的彎曲菌1?？傊?，現(xiàn)代臨床細(xì)菌學(xué)檢驗一方面要依靠高科技逐步建立檢驗自動化,另一方面要改進(jìn)工作形式進(jìn)展快速診斷,標(biāo)本直接涂片檢驗在細(xì)菌學(xué)鑒定中非常重要,其結(jié)果結(jié)合革蘭染色檢查,可對標(biāo)本的性質(zhì)可以作出快速的初步判斷。如涂片直接觀察還可快速檢出真菌(包括念珠菌、隱球菌及

9、其他酵母樣真菌),并增加真菌的培養(yǎng)檢查,有意識將培養(yǎng)時間延長,以防止漏檢。涂片鏡檢可明確革蘭染色性，是細(xì)菌鑒定的前提,假設(shè)革蘭染色有誤，細(xì)菌的其他鑒定肯定也有誤,即使自動化儀器也是如此。同時涂片鏡檢的結(jié)果可修正儀器報告出現(xiàn)的錯誤,防止誤報。涂片鏡檢能將標(biāo)本中到達(dá)一定數(shù)量的死活菌均可檢出,對培養(yǎng)有重要的補(bǔ)充作用。另外涂片鏡檢有時還會獲得意外信息。如發(fā)現(xiàn)非白細(xì)胞有核細(xì)胞提示存在癌細(xì)胞的可能,可提示臨床做腫瘤細(xì)胞的檢查。直接涂片觀察還有利于發(fā)現(xiàn)活動的原蟲和其他寄生蟲等。所以實驗室工作人員應(yīng)應(yīng)主動加強(qiáng)涂片鏡檢工作,以進(jìn)步檢驗質(zhì)量?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】2張卓然,倪語星.臨床微生物學(xué)和微生物檢驗學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社,2022