細(xì)菌形態(tài)學(xué)技術(shù)課件

1、細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查技術(shù) 微生物室標(biāo)本涂片的制備標(biāo)本片的制備制片的玻片應(yīng)干凈。因?yàn)榛覊m和脂肪可能干擾標(biāo)本對(duì)載玻片的附著和染色的過程。制片的標(biāo)本最好是通過選擇出來最有可能揭示病原體的那部分。標(biāo)本涂片的制備對(duì)于特殊標(biāo)本（膿液、組織等）應(yīng)多制備幾張涂片，以備做其它染色用。為了充分鑒定標(biāo)本，涂片的標(biāo)本應(yīng)足夠量，但不能過厚。標(biāo)本涂片的制備 穿刺液和體液的涂片 依據(jù)標(biāo)本量和可使用的設(shè)備可選擇幾種不同的方法：1）標(biāo)本量少 直接取標(biāo)本涂片2）標(biāo)本足量 大于1毫升量的標(biāo)本進(jìn)行離心涂片。 革蘭染色離心（3000r/min,15mim) 抗酸染色離心（4000r/min,30mim）細(xì)菌的鏡下形態(tài)細(xì)菌的形態(tài)、排列球形：雙

2、球菌:在一個(gè)平面上分裂成雙排列。 鏈球菌：在一個(gè)平面上分裂，成鏈狀排列。 四聯(lián)球菌:在兩個(gè)相互垂直的平面上分裂，以四個(gè)球菌排呈方形。 八迭球菌:在三個(gè)互相垂直的平面上分裂，八個(gè)菌體重疊呈立方體狀。 葡萄球菌 :在幾個(gè)不規(guī)則的平面上分裂，則菌體多堆積在一起，而呈葡 萄狀排列。 桿狀：大的桿菌如炭疽桿菌。 小的如野兔熱桿菌 。螺旋狀：弧菌（Vibrio）菌體只有一個(gè)彎曲，呈弧狀或逗點(diǎn)狀。如霍亂弧菌。 螺菌（Spirillum）菌體有數(shù)個(gè)彎曲。如鼠咬熱螺菌。 細(xì)菌的鏡下形態(tài)細(xì)菌的染色性、大小、形態(tài)、排列與下列因素有關(guān) 分離物（標(biāo)本）的來源細(xì)菌的種類培養(yǎng)基成分：液體、固體培養(yǎng)物（菌落）的年齡 46h培

3、養(yǎng)物的革蘭氏染色性好,前后對(duì)比其形態(tài)相對(duì)大。24h后培養(yǎng)物的革蘭氏染色性差,形態(tài)相對(duì)變小,特別是有些菌體輪廓不清晰。無法使用革蘭染色區(qū)分陰陽性時(shí)，使用拉絲實(shí)驗(yàn)。革蘭氏染色革蘭氏染色原理 染色液 染色方法 注意事項(xiàng)及影響因素質(zhì)量控制鏡檢與報(bào)告方式革蘭氏染色原理：G+菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)：較致密，肽聚糖層厚，脂質(zhì)少，酒精不容易透入并可使細(xì)胞壁脫水形成一層屏障，阻止結(jié)晶紫-碘復(fù)合物從胞內(nèi)滲出。G+菌等電點(diǎn)（PI2-3）：比G+菌（PI4-5）低，在相同pH染色環(huán)境中，G+菌所帶負(fù)電荷比G-菌多，故與帶正電荷的結(jié)晶紫染料結(jié)合較牢固，不容易脫色。G+菌體內(nèi)有核糖核酸鎂鹽與多糖復(fù)合物，易和結(jié)晶紫-碘復(fù)合物結(jié)合而不

4、易脫色 。注意事項(xiàng)及影響因素操作因素： 涂片的厚薄 每一步驟時(shí)間的長短染液因素： 盧戈碘液放置時(shí)間過長 95乙醇揮發(fā) 流水細(xì)菌因素： 細(xì)菌種類 細(xì)菌菌齡 生長環(huán)境 革蘭染色質(zhì)量控制 用標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922 大腸埃希菌（革蘭氏陰性菌）、ATCC25923 金黃色葡萄球菌（革蘭氏陽性菌）進(jìn)行革蘭染色質(zhì)控，質(zhì)控頻率為新開瓶和每日一次。我們可以從涂片中得到的信息鏡下見到典型形態(tài)菌體，可直接報(bào)告臨床，靶向用藥時(shí)間提前。如：新隱、肺鏈、芽孢桿菌等，為挽救病人生命爭(zhēng)取時(shí)間。重視直接涂片為判斷污染菌或致病菌提供依據(jù)：如細(xì)胞內(nèi)吞噬等。重視直接涂片有時(shí)比培養(yǎng)更具價(jià)值：如判斷大便菌群比例失調(diào)。重視直接涂片為病

5、人提供申請(qǐng)外的信息，拓展醫(yī)生思路：如粘液銅綠、分枝桿菌等。顯微鏡檢報(bào)告方式細(xì)菌顯微鏡檢報(bào)告方式客觀描述細(xì)菌在鏡下的染色性、形態(tài)、大小、數(shù)量。 報(bào)告時(shí)不要拘于報(bào)告格式限制,祥實(shí)描述。細(xì)菌數(shù)量的描述油鏡計(jì)數(shù)細(xì)菌30個(gè)細(xì)菌/油鏡為大量,用4+表示 摘自2009北京衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心微生物培訓(xùn)會(huì)議痰標(biāo)本的涂片報(bào)告報(bào)告白細(xì)胞和上皮細(xì)胞在低倍鏡下的數(shù)目/平均視野?？陀^描述油鏡下細(xì)菌的染色性、形態(tài)、大小、數(shù)量。金黃色葡萄球菌傷口感染的直接涂片金黃色葡萄球菌在液體培養(yǎng)基中的形態(tài)星座鏈球菌革蘭陽性球菌，成雙或短鏈排列淋球菌淋球菌形態(tài)與腦膜炎球菌相似。革蘭染色陰性，圓形或卵圓形，直徑約為0.8m。常呈雙排列，菌體

6、相接觸面略凹陷，形似一對(duì)咖啡豆。急性淋病患者標(biāo)本涂片鏡下觀察時(shí)，淋球菌多存在于中性粒細(xì)胞內(nèi)，慢性淋病時(shí)則多在細(xì)胞外。淋球菌無鞭毛，但有菌毛，不形成芽胞，分離初期有莢膜。X1000吞噬現(xiàn)象 包括中性粒細(xì)胞的非特異性吞噬和巨噬細(xì)胞的特異性吞噬，注意要區(qū)別于黏附。伴行現(xiàn)象 未被炎性細(xì)胞包裹的病原菌分布在炎性細(xì)胞周圍者，需要區(qū)別于污染菌，很考驗(yàn)水平。包裹現(xiàn)象 有些病原微生物自身具有抗吞噬能力（如莢膜等），炎性細(xì)胞不能將其吞噬，而是將其包裹起來，形成膿球。腹腔引流液（厭氧菌？）化膿鏈隱球菌涂片鏡檢的質(zhì)量控制顯微鏡檢報(bào)告方式真菌顯微鏡檢報(bào)告方式 描述報(bào)告真菌鏡下的形態(tài)（孢子、菌絲），數(shù)量。 以我院臨床涂片報(bào)告為例學(xué)習(xí)微生物的鏡檢報(bào)告方式涂片檢驗(yàn)的質(zhì)量控制應(yīng)建立涂片檢查的室內(nèi)和室間質(zhì)控制度。痰液中常見物質(zhì)涂片痰液質(zhì)量控制痰液質(zhì)控原因直接涂片鏡下觀察：1.白細(xì)胞內(nèi)吞噬細(xì)菌與感染相關(guān)度高。2