中成藥常規(guī)檢查課件

1、中成藥常規(guī)檢查及中蒙藥薄層色譜鑒別內(nèi)蒙古藥品檢驗(yàn)所 郝美玲前言中成藥常規(guī)檢查中蒙藥薄層色譜鑒別前 言中成藥檢驗(yàn)主要包括：性狀、鑒別、檢查、含量測(cè)定等。性狀從某種程度來講也是檢查的一個(gè)部分，可以作為直觀檢查。 一 . 中成藥常規(guī)檢查中國藥典2000年版一部附錄“制劑通則”項(xiàng)下共介紹了28個(gè)劑型，2005年版一部附錄“制劑通則”項(xiàng)下共介紹了30個(gè)劑型，新增了凝膠劑和涂膜劑。這里主要講幾個(gè)常見劑型的檢查項(xiàng)目及判定標(biāo)準(zhǔn)。有：丸劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸劑。 （一）丸劑的檢查 中國藥典2005年版一部附錄5頁 丸劑包括：蜜丸、水丸、水蜜丸、糊丸、濃縮丸、蠟丸。外觀應(yīng)圓整、均勻、色澤一致，蜜丸應(yīng)細(xì)膩?zhàn)?/p>

2、潤、軟硬適中。 （2）含揮發(fā)性成分的藥品采用第二法，也叫甲苯法。具體操作：取供試品適量（約相當(dāng)于含水量14ml），精密稱定，置A瓶中，加甲苯約200ml，必要時(shí)加入干燥、潔凈的沸石或玻璃珠數(shù)粒，將儀器各部分連接，自冷凝管頂端加入甲苯，至充滿B管的狹細(xì)部分。將A瓶置電熱套中，待甲苯開始沸騰時(shí)，調(diào)節(jié)溫度，使每秒鐘餾出2滴。待水分完全餾出，即測(cè)定管刻度部分的水量不再增加時(shí)，繼續(xù)蒸餾5分鐘，放冷至室溫，拆卸裝置，如有水黏附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的銅絲推下，放置，使水分與甲苯完全分離（可加亞甲藍(lán)粉末少量，使水染成藍(lán)色，以便分離觀察）。檢讀水量，并計(jì)算供試品中的含水量（%）。甲苯法儀器裝置A為500m

3、l的短頸圓底燒瓶。B為水分測(cè)定管。C為直形冷凝管。判 定 標(biāo) 準(zhǔn) 大小蜜丸、濃縮蜜丸水分不得過15.0%。水蜜丸、濃縮水蜜丸水分不得過12.0%。水丸、糊丸、濃縮丸水分不得過9.0%。蠟丸不檢查水分。2. 重 量 差 異 按丸服用的丸劑照第一法檢查 取供試品10份，分別稱定重量，再與標(biāo)示總量（每丸標(biāo)示重量稱取丸數(shù)）或標(biāo)示重量相比較（無標(biāo)示重量的丸劑，與平均重量比較）。判 定 標(biāo) 準(zhǔn) 9g6%（丸重范圍 9.548.46）6g7%（丸重范圍 6.425.58）3g8%（丸重范圍 3.242.76）超出重量差異限度的不得多于2份，并不得有1份超出限度一倍。判 定 標(biāo) 準(zhǔn) 超出重量差異限度的不得多于

4、2份，并不得有1份超出限度一倍。包糖衣的丸劑應(yīng)檢查丸芯的重量差異并符合規(guī)定，包糖衣后不再檢查重量差異。其他包衣丸劑應(yīng)在包衣后檢查重量差異并符合規(guī)定；凡進(jìn)行裝量差異檢查的單劑量包裝丸劑，不再進(jìn)行重量差異檢查。 3. 裝 量 差 異 單劑量分裝的丸劑 （袋或瓶）取10袋（瓶），分別稱定每袋（瓶）內(nèi)容物的重量，每袋（瓶）裝量與標(biāo)示裝量相比較。9g5%（丸重范圍 9.458.55）6g6%（丸重范圍 6.365.64）3g8%（丸重范圍 3.242.76）4. 裝 量裝量以重量標(biāo)示的多劑量包裝的丸劑，照最低裝量檢查法（2005年版一部附錄64頁），目前多劑量包裝的中成藥不多見，蒙成藥大多是多劑量包裝。

5、具體操作：取供試品5個(gè)（50g以上者3個(gè)），采用減重法分別求出每個(gè)內(nèi)容物的裝量與平均裝量，應(yīng)符合下列規(guī)定。如有1個(gè)內(nèi)容物不符合規(guī)定，則另取5個(gè)同法進(jìn)行復(fù)驗(yàn)。 判 定 標(biāo) 準(zhǔn)標(biāo)示裝量20g以下規(guī)定：平均裝量不少于標(biāo)示裝量，每個(gè)內(nèi)容物裝量不少于標(biāo)示裝量的93%標(biāo)示裝量20g至50g規(guī)定：平均裝量不少于標(biāo)示裝量，每個(gè)內(nèi)容物裝量不少于標(biāo)示裝量的95%標(biāo)示裝量50g至500g規(guī)定：平均裝量不少于標(biāo)示裝量，每個(gè)內(nèi)容物裝量不少于標(biāo)示裝量的97% 4. 溶 散 時(shí) 限 根據(jù)丸劑直徑選擇不同孔徑的篩網(wǎng)（丸劑直徑在2.5mm以下的用孔徑約0.42mm的篩網(wǎng)，在2.53.5mm之間的用孔徑1.0mm的篩網(wǎng)，在3.5

6、mm以上的用孔徑約2.0mm的篩網(wǎng)）供試品黏附擋板妨礙檢查，去掉擋板再進(jìn)行檢查。 判 定 標(biāo) 準(zhǔn) 小蜜丸、水蜜丸和水丸應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)全部溶散。 濃縮丸和糊丸應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)全部溶散。蠟丸照腸溶衣片崩解時(shí)限檢查法檢查。大蜜丸不檢查溶散時(shí)限。 （二） 片劑的檢查 中國藥典2005年版一部附錄7頁 片劑包括：浸膏片、半浸膏片和原粉片片劑以口服普通片為主，另有含片、咀嚼片、泡騰片、陰道片、陰道泡騰片和腸溶片等。外觀應(yīng)完整光潔，色澤均勻，應(yīng)有適宜的硬度。 判 定 標(biāo) 準(zhǔn) 超出限度的不得多于2片，并不得有1片超出限度一倍。2. 崩 解 時(shí) 限 做此項(xiàng)檢查（附錄62頁）時(shí)應(yīng)注意： （1）1000ml的燒杯 （2）

7、T=371 （3）擋板以“V”字形放置 （4）升降的金屬支架上下移動(dòng)距離為55mm 2mm，往返頻率為每分鐘3035次。（5）調(diào)節(jié)吊藍(lán)位置使其下降時(shí)篩網(wǎng)距燒杯底部25mm，上升時(shí)篩網(wǎng)在水面下15mm處。 判 定 標(biāo) 準(zhǔn)泡騰片 （含NaHCO3和有機(jī)酸）250ml燒杯（200ml1525的水）當(dāng)氣體停止逸出時(shí)，片劑應(yīng)溶解或分散在水中，無凝聚的顆粒剩留。5分鐘內(nèi)崩解含有藥材浸膏、樹脂、油脂或大量糊化淀粉的片劑，如有小部分顆粒狀物未通過篩網(wǎng)，已軟化無硬芯，按符合論。判 定 標(biāo) 準(zhǔn)陰道片 照融變時(shí)限檢查法（附錄63頁）檢查供試品3片應(yīng)在30分鐘內(nèi)全部溶化或崩解溶散并通過開孔金屬圓盤，或僅殘留少量無硬芯

8、的軟性團(tuán)塊。含片、咀嚼片不檢查崩解時(shí)限 3. 發(fā) 泡 量陰道泡騰片25ml具塞刻度試管（內(nèi)徑1.5cm）10支，各精密加水2ml，置371 水浴中5分鐘，各管中投入供試品1片，密塞，20分鐘內(nèi)觀察最大發(fā)泡量的體積。 判 定 標(biāo) 準(zhǔn)平均發(fā)泡體積應(yīng)不少于6ml少于4ml的不得超過2片 （三）膠囊劑的檢查 中國藥典2005年版一部附錄10頁膠囊劑包括：硬膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊。 外觀應(yīng)整潔、不得有粘結(jié)、變形、滲漏或囊殼破裂現(xiàn)象，并應(yīng)無異臭。 1. 水 分 硬膠囊 將內(nèi)容物倒出來，按照水分測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定。常用方法為烘干法和甲苯法。判定標(biāo)準(zhǔn)：水分不得過9.0%。 硬膠囊內(nèi)容物為液體或半固體者不檢查水分。

9、 2. 裝 量 差 異 取10粒，分別精密稱定重量，傾出內(nèi)容物，再精密稱定囊殼重量，采用減重法，求出每粒內(nèi)容物的量，每粒裝量與標(biāo)示裝量相比較（無標(biāo)示裝量的膠囊劑，與平均裝量比較）。限度為：10% 0.5g/粒（0.550g0.450g） 判 定 標(biāo) 準(zhǔn) 超出限度的不得多于2粒，并不得有1粒超出限度一倍。3. 崩 解 時(shí) 限 操作同片劑必須加擋板 判 定 標(biāo) 準(zhǔn) 硬膠囊30分鐘 軟膠囊60分鐘（可在人工胃液中進(jìn)行） 腸溶膠囊同腸溶衣片部分顆粒狀物不能通過篩網(wǎng)，已軟化無硬芯可作符合論（四）顆粒劑的檢查 中國藥典2005年版一部附錄6頁顆粒劑包括：可溶性顆粒劑、混懸性顆粒劑和泡騰性顆粒劑。顆粒劑應(yīng)干

10、燥、顆粒均勻、色澤一致，無吸潮、結(jié)塊、潮解等現(xiàn)象。1. 粒 度 取顆粒劑30g，稱定重量，采用雙篩分法，置藥篩內(nèi)過篩，將藥篩保持水平狀態(tài)，左右往返輕輕篩動(dòng)3分鐘。 判定標(biāo)準(zhǔn) 不能通過一號(hào)篩和能通過四號(hào)篩的顆粒和粉末總和不得過15%。2. 水 分 按照水分測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定。常用方法為烘干法和甲苯法。判定標(biāo)準(zhǔn)：不得過6.0%。3. 溶 化 性 1袋或10g（多劑量包裝）+200ml熱水（7080），攪拌5分鐘，立即觀察。判定標(biāo)準(zhǔn)：可溶性顆粒劑應(yīng)全部溶化，允許有輕微渾濁；混懸性顆粒劑應(yīng)能混懸均勻。泡騰性顆粒劑 1袋+200ml水（1525），應(yīng)能迅速產(chǎn)生氣體而呈泡騰狀，5分鐘內(nèi)顆粒應(yīng)完全分散或溶解在水

11、中。均不得有焦屑等異物。 4. 裝 量 差 異 單劑量分裝的顆粒劑，取10袋(瓶)，分別稱定每袋(瓶)內(nèi)容物的重量，每袋(瓶)的重量與標(biāo)示裝量相比較 限度為：5% 10g/袋(10.50g9.50g)判 定 標(biāo) 準(zhǔn) 超出限度的不得多于2袋（瓶），并不得有1袋（瓶）超出限度一倍。多劑量分裝的顆粒劑照最低裝量檢查法 。（五）滴丸劑的檢查 中國藥典2005年版一部附錄10頁。外觀應(yīng)圓整均勻，色澤一致，無沾連現(xiàn)象，表面無冷凝液黏附。 1. 重 量 差 異取20丸，精密稱定總重量，求得平均丸重后，再分別精密稱定每丸的重量，每丸重量與平均丸重相比較。判定標(biāo)準(zhǔn)： 超出限度的不得多于2丸，并不得有1丸超出限度

12、一倍。包糖衣的滴丸不檢查重量差異，包薄膜衣的滴丸檢查重量差異。2. 溶 散 時(shí) 限 操作同片劑滴丸很小，篩網(wǎng)孔徑應(yīng)為0.42mm。判定標(biāo)準(zhǔn)：不包衣的滴丸應(yīng)在30分鐘內(nèi)全部溶散，包衣的滴丸應(yīng)在60分鐘內(nèi)全部溶散。以明膠為基質(zhì)的滴丸，可在人工胃液中進(jìn)行檢查。中蒙藥薄層色譜鑒別（TLC鑒別）薄層色譜法(Thin Layer Chromatography，TLC) 系將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁質(zhì)基片上，成一均勻薄層。待點(diǎn)樣、展開后，與適宜的對(duì)照物按同法所得的色譜圖作對(duì)比，用以進(jìn)行藥物的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定的方法。優(yōu)點(diǎn)：具有簡(jiǎn)便、快速、分離效率高、專屬性強(qiáng)及靈敏度高等特點(diǎn)。中國藥典2005

13、年版一部共收載1146個(gè)品種（包括：中、蒙、藏藥材及成藥），采用TLC法用于鑒別的已達(dá)1523項(xiàng)，增加TLC鑒別并不是趕時(shí)髦，而是由于TLC鑒別的專屬性強(qiáng)?？墒牵@并不表明顯微鑒別、理化鑒別就沒用了、不重要了, 例如：含麝香的中蒙藥，顯微鑒別起著很重要的作用。 薄層色譜鑒別操作全過程示意如下 供試液的制備 展開劑配制 紫外光燈、顯色劑 薄層板制備 檢視 展開 點(diǎn)樣 定性結(jié)果中蒙成藥TLC鑒別的目的是鑒別而不是分離提取，因而在條件考察時(shí)，對(duì)吸附劑、展開劑的選擇，不是如何將檢品分離成單一組分，而是如何在某一規(guī)定的條件（如：硅膠G板、GF254板、H板等），將檢品制成清晰、圓整、比移值穩(wěn)定的層析圖譜

14、，以便與對(duì)照品（或?qū)φ账幉模┻M(jìn)行對(duì)照比較。 （一）供試液的制備一個(gè)理想的TLC鑒別，關(guān)鍵是所制備的供試液是否理想。供試液的制備離不開提取分離(前處理)的選擇，并不是所有的成分用甲醇、乙醇都可以提出，在薄層板上點(diǎn)樣、展開、顯色、檢視。例如：檢中藥或中成藥中的苷類成分(含人參、三七、黃芪、黃芩等藥材的中蒙成藥)，需要較為復(fù)雜的前處理。另外點(diǎn)樣液不能太濃，否則點(diǎn)樣后易造成嚴(yán)重拖尾。前 處 理 整個(gè)前處理包括：提取、萃取、柱層析等等一系列的處理過程，在這兒主要講一下萃取和柱層析時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)方面。萃?。?主要注意乳化現(xiàn)象 柱層析 ：層析柱下端用脫脂棉或玻璃纖維塞住，吸附劑均勻地、一次性加入，操作過程中

15、應(yīng)保持有充分的洗脫劑留在吸附層的上面。1. 萃 取 主要注意乳化現(xiàn)象苷類成分用水飽和的正丁醇萃取及有機(jī)生物堿類成分用乙醚或氯仿萃取時(shí)，往往易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象。振搖時(shí)注意避免強(qiáng)力振搖。 用乙醚或正己烷等萃取脂溶性有機(jī)酸或用醋酸乙酯萃取黃酮類成分時(shí)，一般不易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，可以強(qiáng)力振搖。 2. 柱 層 析 色譜柱下端用脫脂棉或玻璃纖維塞住。吸附劑應(yīng)均勻地、一次性加入色譜柱，振動(dòng)管壁使其均勻下沉。洗脫過程中應(yīng)保持有充分的洗脫劑留在吸附層的上面（二）薄層板的制備將固定相和水(或一定濃度的CMC-Na溶液或其他水溶液)按13的比例混勻研磨,涂布成均勻的、規(guī)定厚度的薄層，自然晾干后，在110烘烤30分鐘活化，放

16、在有干燥劑的儲(chǔ)板箱中備用。（三） 點(diǎn) 樣點(diǎn)樣的質(zhì)量對(duì)分離效果影響很大。點(diǎn)樣時(shí)最好在空氣濕度比較低的地方，因?yàn)槲絼┰诳諝庵幸孜諠駳舛档推浠钚?。整個(gè)點(diǎn)樣過程最好控制在10分鐘左右。 點(diǎn)樣基線距底邊1.01.5cm，點(diǎn)樣直徑一般為24mm，各原點(diǎn)必須在同一水平線上，點(diǎn)間距約為1.52.0cm。點(diǎn)樣時(shí)勿損傷薄層表面。點(diǎn)樣量大時(shí)，要分次點(diǎn)加，使原點(diǎn)集中， 為保證樣品不擴(kuò)散，可借助吹冷、熱風(fēng)或加熱方式進(jìn)行點(diǎn)樣。 （四） 展開劑和展開展開劑的選擇主要是根據(jù)吸附劑、分離物質(zhì)的性質(zhì)以及展開劑極性三者之間的關(guān)系來考慮。展開方式很多，有上行、下行、雙向、多次展開等。最常用的是上行展開法，所用展開缸的底部必須平

17、整，將薄層板放入后能呈水平，磨口蓋要嚴(yán)密，必要時(shí)可涂少量凡士林密封，但須嚴(yán)防污染薄層板及展開劑。在展開缸中，薄層板對(duì)溶劑蒸氣的吸附對(duì)薄層分離的影響很大。由于對(duì)飽和度的要求不同，如有的需要用展開劑先將展開缸飽和，有的需將薄層板在展開缸中用展開劑飽和，有的則不需要飽和，故需按不同要求進(jìn)行操作。 薄層板浸入展開劑的深度一般為0.5cm(上行展開)或0.3cm(斜上行展開)，展開距離一般為815cm,高效薄層板展距58cm。展開劑宜臨用新配，不宜反復(fù)使用。（五） 顯 色物理方法有熒光法、熒光熄滅法等，化學(xué)方法一般是用化學(xué)試劑顯色的方法。顯色劑有通用顯色劑(如硫酸乙醇溶液、磷鉬酸乙醇溶液、碘蒸氣等)和專

18、屬顯色劑(如生物堿用稀碘化鉍鉀、氨基酸用茚三酮試液等)。（六）檢 視日光下目測(cè)檢視：斑點(diǎn)本身有顏色、顯色劑顯色后斑點(diǎn)呈色。紫外光燈下檢視：365nm、254nm 六味地黃丸中熊果酸的薄層色譜結(jié)果Documentation with digital camera Visual inspection of Astragalus and HedysarumTrack 1, 2, 3 = Astragalus 2, 5, 10 L Track 4, 5, 6 = Hedysarum 10, 5, 2 TrTrack 1, 2, 3 = Astragalus 2, 5, 10 L Track 4, 5,

19、 6 = Hedysarum 10, 5, 2 L、25, 2 L2, 3 = Astragalus 2, 5, 10 L Track 4, 5, 6 = Hedysarum 10, 5, 2 LLH2SO4 1 2 3 4 5 6UV 366 1 2 3 4 5 6 UV 254 1 2 3 4 5 6 Visual light Fluorescence Fluorescence quenchingImage capturingValerian (纈草) white lightImage capturing Valerian(纈草)UV-254nmImage capturingValeria

20、n (纈草) UV 366 400 nm Weak fluorescent zones:use Long Time Integration（七）檢出物的定性薄層分離的斑點(diǎn)檢出后需要定性，鑒別直接在薄層上進(jìn)行。在薄層上進(jìn)行定性鑒別，由于影響薄層分離的因素很多，僅僅靠測(cè)量Rf值的方法是不可靠的。一般采用對(duì)照品或?qū)φ账幉脑谕粭l件下展開后進(jìn)行對(duì)比的方法（也叫隨行對(duì)照法）。采用對(duì)照品作對(duì)照時(shí)，要求供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)。采用對(duì)照藥材作對(duì)照時(shí)，一般要求供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)至少23個(gè)。 從原點(diǎn)到斑點(diǎn)中心的距離R

21、f值= 從原點(diǎn)到溶劑前沿的距離Rf值：0.20.8（八）薄層層析中遇到的異?，F(xiàn)象及解決辦法在薄層層析分析中，我們希望獲得清晰、圓整、Rf值（比移值）穩(wěn)定且適中（0.20.8）的斑點(diǎn)。但是在實(shí)際檢驗(yàn)工作中，往往遇到異常現(xiàn)象，會(huì)妨礙和干擾薄層層析結(jié)果。因此，需要探討其產(chǎn)生的原因與克服的辦法。1. 邊 緣 效 應(yīng) 圖譜情況：在同一塊薄層板上，用同一種展開劑，在同一展開槽內(nèi)展開，薄層板中部的斑點(diǎn)較兩側(cè)斑點(diǎn)的Rf值?。ㄓ绕涫窍奶欤?。Rg1 ReRb1產(chǎn)生的原因：因?yàn)楫?dāng)展開劑在薄層板上運(yùn)行時(shí)，極性較弱的展開劑和揮發(fā)性較強(qiáng)的展開劑在薄層兩邊較易揮發(fā)。因此，它們?cè)诒觾蛇叺臐舛缺仍谥虚g的濃度小 ，對(duì)于同一組分來說，兩側(cè)的Rf值大于中間的，因此就產(chǎn)生了如圖