免疫組化技術(shù) (2)講稿

1、關(guān)于免疫組化技術(shù) (2)第一張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月組織化學(xué)染色技術(shù) Histochemistry Technique 觀察對象組織、細(xì)胞 使用工具普通顯微鏡 熒光顯微鏡形態(tài)與結(jié)構(gòu)第二張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月蘇木素曙紅第三張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月免疫組織化學(xué)染色技術(shù) Immunohistochemistry Technique指用標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對相應(yīng)抗原（目的蛋白）進(jìn)行定性、定位、定量測定的一項免疫檢測方法。第四張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月Immunohistochemis

2、try Technique特定蛋白（抗原）第五張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月（透膜）第六張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月授課提綱 基質(zhì)標(biāo)本的制作 熒光免疫組化技術(shù) 酶免疫組化技術(shù) 相關(guān)問題與解決方案第七張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月授課提綱 基質(zhì)標(biāo)本的制作 熒光免疫組化技術(shù) 酶免疫組化技術(shù) 相關(guān)問題與解決方案第八張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月標(biāo)本類型 組織標(biāo)本 冰凍切片 石蠟切片 細(xì)胞標(biāo)本 體外培養(yǎng)細(xì)胞（單層細(xì)胞、懸浮細(xì)胞） 體液細(xì)胞（涂片）第九張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月固定與保存 固定的目的防止細(xì)胞自溶，保持細(xì)胞形態(tài)與機構(gòu)；保存組

3、織細(xì)胞抗原性；防止標(biāo)本脫落；防止滋生微生物，預(yù)防組織腐敗 標(biāo)本固定以不損傷細(xì)胞形態(tài)、不損傷抗原特異性為基本原則第十張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月固定與保存 固定劑 蛋白類乙醇或甲醇 微生物類丙酮、三氯化碳 多糖類10%福爾馬林第十一張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月抗原修復(fù) 目的：充分暴露抗原表位，利于抗體識別。 方法： 酶（無花果蛋白酶，胰蛋白酶）消化法； 鹽酸水解 微波處理 煮沸法第十二張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月授課提綱 基質(zhì)標(biāo)本的制作 熒光免疫組化技術(shù) 酶免疫組化技術(shù) 相關(guān)問題與解決方案第十三張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月標(biāo)記物 熒光素 異

4、硫氰酸熒光素（FITC） 四乙基羅丹明（RB200） 藻紅蛋白（PE） 藻紅蛋白花青苷（PE-Cy5）第十四張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月技術(shù)類型 直接染色法熒光素直接標(biāo)記在特異性抗體（Ab1) 間接染色法熒光素標(biāo)記第二抗體（Ab2)第二抗體針對第一抗體種屬特異性的表 位（如羊抗鼠Ig或羊抗人Ig）第十五張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月直接法第十六張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月實例：細(xì)胞鑒定 免疫細(xì)胞及其亞群（流式細(xì)胞術(shù)） T細(xì)胞 CD3+ CD4+ CD8+ B細(xì)胞 NK細(xì)胞第十七張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月免疫細(xì)胞分類與計數(shù)18Suppres

5、sor T cellR1T cell / B cellHelper T cell第十八張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月間接法第十九張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月實例：檢測抗核抗體 檢測原理已知抗原肝細(xì)胞/HEp-2待檢抗體第二抗體熒光標(biāo)記兔抗人Ig第二十張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月實例：檢測病原體（病毒、細(xì)菌）檢測原理待檢病毒（抗原）已知抗體單抗或多抗第二抗體熒光標(biāo)記羊抗鼠（或兔）Ig第二十一張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月熒光顯微鏡（落射式）關(guān)鍵汞燈光源激發(fā)濾片暗場聚光鏡吸收濾片第二十二張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月熒光顯微鏡（落射式

6、）第二十三張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月熒光顯微鏡（落射式）第二十四張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月授課提綱 基質(zhì)標(biāo)本的制作 熒光免疫組化技術(shù) 酶免疫組化技術(shù) 相關(guān)問題與解決方案第二十五張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月主要類型 酶標(biāo)記抗體同熒光免疫組化 非酶標(biāo)記抗體酶-抗酶系統(tǒng)生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)第二十六張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月技術(shù)特點以酶作為抗原，制備抗酶抗體；酶（抗原）與抗酶（抗體）結(jié)合制備酶-抗酶復(fù)合物；通過橋聯(lián)抗體與識別系統(tǒng)（待檢抗原-特異性抗體）連接；第二十七張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月酶橋法第二十八張，PPT共四十七

7、頁，創(chuàng)作于2022年6月常用酶和相應(yīng)底物 過氧化物酶Peroxidase（P）二氨基聯(lián)苯胺（DAB） 堿性磷酸酶（AP）alkaline phosphatase（AP）溴氯羥吲哚磷酸鹽（BCIP） 第二十九張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月過氧化物酶-抗過氧化物酶（PAP）法PAPPAP復(fù)合物第三十張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月抗體選擇 第一抗體識別抗原 第二抗體（橋聯(lián)抗體）能同時與第一、第三抗體結(jié)合 第三抗體抗酶抗體與第一抗體同源第三十一張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月PPPAAA 圖 雙酶雙底物(復(fù)合物法)雙重酶標(biāo)染色原理兔PAPGAR IgG兔抗Ag鼠APA

8、APGAM. IgG鼠抗第三十二張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月實例：淋巴瘤輕鏈雙重染色法 一抗兔抗鼠抗 二抗羊抗兔羊抗鼠 顯色系統(tǒng) PAP APAAP第三十三張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合體（ABC） 生物素（Biotin） 親和素（Avidin） 生物素標(biāo)記抗體（B-Ab） 生物素標(biāo)記過氧化物酶（B-P）第三十四張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合體（ABC）第三十五張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月EnVision第三十六張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月授課提綱 基質(zhì)標(biāo)本的制作 熒光

9、免疫組化技術(shù) 酶免疫組化技術(shù) 相關(guān)問題與解決方案第三十七張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十八張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月識別抗體（第一）選擇 單克隆抗體（McAb）特異性強敏感性差 多克隆抗體（McAb）特異性差敏感性強第三十九張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月識別（第一）抗體選擇構(gòu)象 糖基化碳水化合物第四十張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月第二抗體選擇第四十一張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月選擇顯色系統(tǒng) 熒光免疫組化 酶免疫組化PAPAPAAPABCLAB？第四十二張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月封閉非特異性結(jié)合第四十三張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月特異性顯色 具備特定部位顯色特定組織、特定細(xì)胞、特定結(jié)構(gòu)不均一顯色 第四十四張，PPT共四十七頁，創(chuàng)作于2022年6月非特異性