四種常見PCR儀的區(qū)別及運(yùn)用

1、四種常見PCR儀的區(qū)別及運(yùn)用PCR擴(kuò)增儀（俗稱PCR儀）PCR： PCR （聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是利用DNA在體外攝氏95高溫時變性會變成單 鏈，低溫（經(jīng)常是60C左右）時引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對的原則結(jié)合，再調(diào) 溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度（72C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳 糖（5-3）的方向合成互補(bǔ)鏈。PCR儀實(shí)際就是一個溫控設(shè)備，能在95口，55口，72口之間很好地進(jìn)行溫度控制。PCR擴(kuò)增儀又稱為PCR基因擴(kuò)增儀、PCR核酸擴(kuò)增儀、聚合酶鏈反應(yīng)核酸擴(kuò)增 儀，是利用PCR（Polymerase chain reaction，聚合酶鏈反應(yīng)）技術(shù)對特定DNA擴(kuò)增 的一種儀器設(shè)備，被廣泛運(yùn)

2、用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中，例如用于判斷檢體中是 否會表現(xiàn)某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復(fù)制以及親子鑒定等。根據(jù)DNA擴(kuò)增的目的和檢測的標(biāo)準(zhǔn)，可以將PCR儀分為普通PCR儀，梯度PCR 儀，原位PCR儀，實(shí)時熒光定量PCR儀四類。1）.普通PCR儀（2萬以下，賽默飛、伯樂、大龍，艾本德）一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個特定退火溫度的PCR儀稱作傳統(tǒng)PCR儀，也叫普 通PCR儀。如果要做不同的退火溫度需要多次運(yùn)行。主要是用于簡單的、對目 的基因退火溫度的擴(kuò)增。該儀器主要應(yīng)用于科學(xué)研究、教學(xué)、醫(yī)學(xué)臨床、檢驗(yàn)檢 疫等機(jī)構(gòu)。如:啟步 BSW-2P,BSW-3P,BSW-6P-I/II ,ABI 2720

3、 型2）.梯度PCR儀（2萬-8萬，賽默飛、伯樂、大龍，艾本德）一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件（溫度梯度，通常有12種I隆求甜枝Mil h h iikiii Tf-fhfSGI & TEC SERVICE LAB.溫度梯度）的PCR儀稱作梯度PCR儀。因?yàn)楸粩U(kuò)增的不同DNA片段，其最適退火溫度是不同的，通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增，從而一次性PCR 擴(kuò)增，就可以篩選出表達(dá)量高的最適退火溫度，進(jìn)行有效的擴(kuò)增。用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增，這樣節(jié)約成本的同時也節(jié)約了時間。梯度PCR儀在不設(shè)置梯度的情況下也可以做普通PCR擴(kuò)增。主要應(yīng)用于科研、教學(xué)機(jī)構(gòu)。梯度PCR儀主要

4、用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增，這樣既節(jié)約時間，也節(jié)約成本。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用。梯度PCR儀多應(yīng)用于科研、教學(xué)機(jī)構(gòu)，檢驗(yàn)、檢疫等。如:ABI 9700,ABI Veriti, Bio-Rad T100 PCR 儀3）.原位PCR儀（2-10萬，朗基，伯樂，塞斯恩，博日）用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細(xì)胞內(nèi)基因擴(kuò)增儀稱作原位PCR儀。如病源 基因在細(xì)胞的位置或目的基因在細(xì)胞內(nèi)的作用位置等。是保持細(xì)胞或組織的完整 性，使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細(xì)胞中，在細(xì)胞的靶DNA所在位置上進(jìn)行基 因擴(kuò)增。不但可以檢測到靶DNA，又能標(biāo)出靶序列在細(xì)胞內(nèi)的位置，對于在分 子和細(xì)胞水平

5、上研究疾病的發(fā)病機(jī)理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)變有重大的實(shí)用價 值。主要應(yīng)用于臨床、科研。原位PCR儀,主要應(yīng)用于：（1）檢測外源性基因片段，提高檢出率，集中在病 毒感染的檢查上，如HIV、HPV、HBV、CMV等；（2）觀察病原體在體內(nèi)分 布規(guī)律（3）內(nèi)源性基因片段，如人體的單基因病、重組基因、易位的染色體、Ig的mRNA片段、癌基因片段等。（4）檢測導(dǎo)入基因；（5）遺傳病基因檢測如B一地中海貧血。I隆求利枝Mu II i- likiiii Tf-fh-4）.實(shí)時熒光定量PCR儀（2-10萬，聚創(chuàng)環(huán)保，雅睿，伯樂）|忐祖B實(shí)驗(yàn)室r SCI &TEC SERVICE LAB.在普通PCR儀的基礎(chǔ)上增

6、加一個熒光信號采集系統(tǒng)和計算機(jī)分析處理系統(tǒng)的 PCR儀稱作熒光定量PCR儀。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR儀擴(kuò)增原理相同， 只是PCR擴(kuò)增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記，使用引物和熒 光探針同時與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實(shí)時采集 信號連接輸送到計算機(jī)分析處理系統(tǒng)得出量化的實(shí)時結(jié)果輸出。把這種PCR儀 叫做實(shí)時熒光定量PCR儀（qPCR儀）。熒光定量PCR儀有單通道、雙通道和多通道。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的 時候，選用單通道，有多熒光標(biāo)記的時候用多通道。單通道也可以檢測多熒光的 標(biāo)記的目的基因表達(dá)產(chǎn)物，因?yàn)橐淮沃荒軝z測一種目的基因的擴(kuò)增量，需多次擴(kuò) 增才能檢測完不同目的基因片段的量。主要用于醫(yī)學(xué)臨床檢測、生物醫(yī)藥研發(fā)、 食品行業(yè)、科研院校等機(jī)構(gòu)。熒光定量PCR儀主