家禽精液品質(zhì)的鑒定及保存教學(xué)課件

1、家禽精液品質(zhì)的鑒定及保存 專業(yè)：動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)內(nèi)容概要1.家禽精液與家畜精液的不同點 肉眼觀測2家禽精液的品質(zhì)鑒定 鏡檢觀測 生物化學(xué)檢查 細菌學(xué)檢查 精液稀釋液3家禽精液的稀釋和保存 常用的精液保存方法家禽精子與哺乳動物的精子的形態(tài)差異家禽精子的形態(tài)與哺乳動物不同，頭部如鐮刀形，立體形狀為長柱形，頸部短，局部長，外形纖細。雞精子全長約100107um,頭部長12.5um,頂部長約2.5um,核長約10um，直徑0.5um，尾部長90100um，精子的體積約9.2um3。家禽精液與家畜精液的差異 與家畜精液相比，家禽精液量小，但其精子密度高。 雞通常一次射精量為0.3-0.5ml,火雞為0

2、.2-0.3ml,鴨為0.1-0.2ml,鵝為0.2-1.5ml。精子密度雞17-35億/ml火雞80-90億/ml，鴨2-60億/ml,鵝3-25億/ml。家禽精液的成份 家禽的精液是由精子和精清組成。精 清是精細管、附睪和輸精管的分泌物，同時還混入透明液。透明液還含有提高精子活力、呼吸和葡萄糖消耗因子，其促使精子早衰，故采精時，應(yīng)盡量避免透明液混入精液。 家禽精液品質(zhì)鑒定肉眼觀測顏色：正常為乳白色。被糞便污染的為黃褐色；尿酸鹽污染為白色絮狀物；血液污染為粉紅色；透明液過多為水漬狀。氣味：稍帶有腥味采精量：正常在0.21.2ml。雞通常一次射精量為0.3-0.5ml,火雞為0.2-0.3ml

3、,鴨為0.1-0.2ml,鵝為0.2-1.5ml。濃稠度：濃稠度很大。精子密度雞17-35億/ml,火雞80-90億/ml，鴨2-60億/ml,鵝3-25億/ml。pH：呈弱堿性，其PH值，雞的為7.07.6，鵝稍低為6.97.4。鏡檢觀測主要包括精子活力、密度及精子形態(tài)等?；盍? 取精液，用平板法在37條件下用200400倍顯微鏡檢查，評定活力的等級，一般根據(jù)在顯微鏡下呈直線運動的精子數(shù)（有受精能力）所占比例，分為1、0.9、0.8、0.7、0.6級。轉(zhuǎn)圈運動或原地擺動的精子，都沒有受精能力。精液密度指每1ml精液中所含的精子數(shù)。在顯微鏡下根據(jù)精子稠密程度可分為：密精子中間幾乎沒有空隙。雞4

4、0億/ml,火雞80億以上/ml；中有空隙。雞2040億/ml?；痣u6080億/ml；稀稀疏。雞20億以下/ml，火雞50億以下/ml。 畸形率檢查：取一滴原精液在載玻片上，抹片自然陰干，干后用95%的酒精固定12min,水洗，再用0.5%龍膽紫（或紅、藍墨水）染色3min,水洗陰干，在400600倍鏡檢。 畸形精子有以下幾種：尾部盤繞、斷尾、無尾、盤繞頭、鉤狀頭、小頭、破裂頭、鈍頭、膨脹頭、氣球頭、絲狀中段等。濃度：用紅細胞計數(shù)法測定。取紅細胞計數(shù)吸管，吸取精液0.5處，在吸入3%的NaCl或2%伊紅溶液至101處為200倍稀釋，搖勻至23分鐘，去掉前面的3滴，在計數(shù)板蓋玻片上下各滴1/2滴

5、，滴入血細胞計數(shù)板靜置23min,進行計數(shù)。1ml精液的精子總數(shù)=5個中方格精子數(shù)/80（小方格）10（計數(shù)室格高度）400（計算小方格）200（稀釋倍數(shù)）1000（1ml等于1000mm3）。C=n/100(C為精子總數(shù)，以10億/ml表示；n為5個中方格的精子數(shù))。生物化學(xué)檢查精子呼吸強度測定 精子呼吸強度與精子密度和活力有關(guān)，通常采用美蘭褪色試驗測定。精子在美蘭溶液中，呼吸時氧化脫氫，美蘭獲得氫離子后便是藍色還原為無色。因此，根據(jù)美蘭褪色時間可測知精液中存活精子數(shù)量的多少，判定精子的活力和密度的高低。精液果糖分解的測定 精液果糖分解能力與精子活力密切相關(guān)，因此可作為精子活率評定的指標。精

6、液中精子代謝時消耗精液中的游離果糖和磷酸果糖。精液耗氧量測定 精子呼吸時消耗氧氣多少與精子活力和密度有關(guān)，但精液耗氧量不僅取決于精子細胞內(nèi)氧化，而且也受精清耗氧量所致。將一定量精液放在37溫箱中孵化一時，用瓦（勃）氏呼吸器測定其耗氧量，計算出精子的耗氧量。精漿中其它化合物的測定 測定精漿中其它化合物如透明質(zhì)酸、谷草轉(zhuǎn)氨酶、酸性磷酸酶、檸檬酸、鎂、鋅、甘油磷酸膽堿、肉毒堿、精氨酸、精液素、類固醇激素和前列腺素等，有助于全面了解精液的品質(zhì)和動物的繁殖能力。細菌學(xué)檢查精液無菌是保障人工授精的基礎(chǔ) ，精液在采集、生產(chǎn)和貯存過程中，不可避免的要接觸一些細菌，因此，在精液生產(chǎn)中精液的細菌學(xué)檢驗和控制就十分

7、重要。 細菌檢查1、無菌條件下，取新鮮或解凍后的細管精液，一支細管精液接注一個滅菌平皿內(nèi)，并倒入50的培養(yǎng)基約15ml，轉(zhuǎn)動平皿使精液、培養(yǎng)基混合均勻，凝固后翻轉(zhuǎn)平皿并置于恒溫箱37培養(yǎng)，48小時后計算每個平皿內(nèi)菌落數(shù)，取兩個平皿的平均值。2、每樣品做兩個平皿，并設(shè)立一個空白對照平皿。精液的稀釋和保存精液稀釋的目的是擴大精液量，為精子提高營養(yǎng)物質(zhì)，緩沖不良環(huán)境的危害，阻止精子遭受冷打擊；抑制細菌的繁衍，延長精子的存活時間，便于精液的保存和運輸。常用稀釋液的基本成分稀釋劑：擴大精液容量，要求與精液 有相同或相近的滲透壓，如 生理鹽水、糖類及某些鹽溶液。營養(yǎng)劑：提供外源的能量，延長精子存活時間。如

8、果糖類（一般指單糖）、奶類及卵黃。保護劑：中和、緩沖對精子保存的不良影響，防止精子受“低溫打擊”，創(chuàng)造精子生存的抑菌環(huán)境等。其他添加劑：改善精子外在環(huán)境的理化特性，調(diào)節(jié)母禽生殖道的生理機能，提高受精率。常用的有酶類、激素類、維生素和pH調(diào)節(jié)物。1.緩沖液：pH6.87.4對精子無害，一般用檸檬酸鈉、磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉，近年來常用三羥甲基氨基甲烷（Tris）堿性緩沖液，對堿中毒和酶活力有重要作用。2.電解質(zhì)：為延長精子在體外的存活時間，在稀釋液中加入適量的非電解質(zhì)或弱電解質(zhì)，各種糖類和氨基酸。3.防凍物質(zhì)：防止精子冷凍休克 的作用，如卵磷脂、脂蛋白及含磷脂的復(fù)合物。4.抗凍保護物質(zhì)：有抗凍危

9、害的作用。常用甘油和二甲基亞砜（DMSO）。5.抗生素：為防止精液采精和處理過程中的污染，常用的有青霉素、鏈霉素。精液稀釋液的種類現(xiàn)用稀釋液：適用于采集的鮮精經(jīng)稀釋后立即輸精的情況。常用以具有等滲透壓的糖類和奶類為主，也可用生理鹽水。常溫保存稀釋液：適用于精液的室內(nèi)短期常溫保存，具有較低的pH較低的特點。低溫保存稀釋液：適用于精液的低溫保存，以卵黃或奶類為主要成分，具有抗冷休克的作用。冷凍保存稀釋液：適用于精液的超低溫保存，除含有糖類、卵黃外，需加入甘油和二甲亞砜等抗凍物質(zhì)。家禽精液的保存 精液保存是為了延長精子的存活時間及維持其受精能力，便于長期運輸，擴大精液適用范圍，增加受配母禽只數(shù)，提高

10、種公禽配種效能?，F(xiàn)行精液的保存方法，按保存溫度分為常溫保存（1525）、低溫保存（05 ）、冷凍保存（-79 或-196 )等三種。前兩種保存方法，精液都以液態(tài)形式存在，故統(tǒng)稱為液態(tài)精液保存。 常溫保存常溫保存的溫度在1820 保存無需特殊控溫和制冷設(shè)備，精液處理方法簡單，便于推廣普及。原理：常溫保存時稀釋液的弱酸性環(huán)境，抑制精子的運動和降低代謝水平，從而延長精子的存活時間。稀釋性的外源能源（營養(yǎng)液）給精子補充足夠營養(yǎng)物質(zhì)來源，稀釋液中添加適當劑量的抗菌物質(zhì)以抑制細菌微生物的孳生。方法：精液經(jīng)稀釋后，按照輸精劑量要求分裝，或者在燒杯中封口后，保存在1820 溫度下。 低溫保存原理：將稀釋后的精

11、液，置于05的低溫條件下保存。在低溫條件下，精子運動減弱甚至停止而處于一種休眠狀態(tài)，代謝降低到極低水平，相對延長精子的保存時間。方法：精液經(jīng)過稀釋后可以保存在冰箱的冷藏室內(nèi)。精液冷凍保存原理：將精液經(jīng)過適當處理后，保存在液氮（-196）、干冰（-79）或其他冷源中。理論上講，精液經(jīng)過特殊處理保存在超低溫下，使其細胞代謝（酶）活動停止，而溫度上升到適宜溫度時又能恢復(fù)受精能力，就能達到長期保存精液的目的。稀釋液：冷凍保存稀釋液。冷凍保存稀釋液含有低溫保護劑(如卵黃、牛奶)、防凍保護劑（甘油等）、維持滲透壓物質(zhì)（糖類、檸檬酸鈉等）、抗菌素以及其他添加劑。冷凍保存精液稀釋液都是在原有低溫保存稀釋液的基

12、礎(chǔ)上，添加防凍物質(zhì)。配制過程中采用分步稀釋液：基礎(chǔ)液將糖類、鹽類等可經(jīng)高溫消毒的藥品成分，成批量的配制成溶液，瓶裝密封保存。液根據(jù)每次采精量，計算所需的冷凍稀釋液量，在基礎(chǔ)液中按配方比例加入一定量的卵黃和抗苗素。液取需要量的液，按配方比例加入經(jīng)滅菌的甘油制成。家禽精液冷凍程序 精液稀釋-降溫和平衡分裝、冷凍解凍。1.精液稀釋 使用冷凍保存稀釋液2. 降溫：是指由30以上溫度降至05的過程。為避免低溫打擊，要緩慢降溫。 平衡 ：是指在05條件下精子的適應(yīng)過程。目的是重建離子平衡，同時使精子為冷凍做生理上準備。降溫平衡時間因不同種類家禽和用不同抗凍劑而異。3.分裝、冷凍 冷凍精液有三種分裝方法：塑料細管、顆粒和安瓿法。冷凍多用液氮薰蒸法。4.解凍 方法和速度影響精液品質(zhì)、目前多使用3540水浴解凍和25水浴解凍。實例：雞的精液冷凍程序 顆粒法稀釋液配方：配方I 5.7葡萄糖 85ml 甘油 5ml 印黃 15ml 配方 乙烯二酸 8ml 牛奶 8ml上面二液均按每ml青霉素1000單位，鏈霉素1000Ug 。精液采下后，一般按1：13稀釋。降溫和平衡 用棉花包住精液瓶在25條件下放置24小時。滴凍 在銅紗網(wǎng)上滴凍，滴凍溫度為-56-118，銅紗網(wǎng)約距離液氮面 2 .53. 5厘米，滴成顆粒后熏蒸12分鐘。顆粒大小可為0090.ll