3植物組織培養(yǎng)技術(shù)[1]ppt課件

1、專題3植物組織培育技術(shù)思索1、原理:2、必要條件：植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞離體一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件外植體：從活植物體上切下進(jìn)展培育的那部分細(xì)胞、組織或器官植物組織培育技術(shù)3、細(xì)胞的全能性定義： 生物體的細(xì)胞具有使后代細(xì)胞構(gòu)成完好個(gè)體的潛能的特性原理： 生物體的每一個(gè)細(xì)胞都包含有該物種所特有的全套遺傳物質(zhì)，都有發(fā)育成為完好個(gè)體所必需的全部基因已分化的植物細(xì)胞，仍具有全能性實(shí)例受精卵生殖細(xì)胞體細(xì)胞全能性的比較:1、培育無(wú)病毒植株2、 培育紫草愈傷組織,提取紫草素治療燙傷和割傷的藥物以及染料和化裝品的原料4)、基因工程中亦需到植物組織培育的方法4、植物組織培育的運(yùn)用： 3、誘導(dǎo)離體的植物組

2、織構(gòu)成具有生根發(fā)芽才干的胚狀構(gòu)造，包裹上人造種皮，制成人工種子，可以處理有些作物種類繁衍才干差，結(jié)子困難或發(fā)芽率低等問(wèn)題課標(biāo)題的闡明植物組織培育的根本原理，學(xué)習(xí)植物組織培育的根本技術(shù)，進(jìn)展菊花或其他植物的組織培育。課題重點(diǎn)與難點(diǎn)課題重點(diǎn)：植物組織培育過(guò)程中運(yùn)用的無(wú)菌技術(shù)。課題難點(diǎn)：植物組織培育過(guò)程中運(yùn)用的無(wú)菌技術(shù)。課題1：菊花的組織培育一、根底知識(shí)1、植物的組織培育1細(xì)胞的分化概念：在個(gè)體發(fā)育中，一樣細(xì)胞的后代在形狀、構(gòu)造、生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差別的過(guò)程 過(guò)程：如：受精卵增殖、生長(zhǎng)、分化構(gòu)成組織、器官、系統(tǒng)特點(diǎn)：2穩(wěn)定性：細(xì)胞分化是穩(wěn)定的，普通是不可逆轉(zhuǎn)的3全能性：已分化的細(xì)胞，仍具有發(fā)育的潛

3、能1耐久性：是一種耐久性的變化，它發(fā)生在生物體的整個(gè)生命過(guò)程中,在胚胎期到達(dá)最大限制緣由：基因在特定的時(shí)間和空間條件下的選擇性表達(dá)的結(jié)果結(jié)果：構(gòu)成不同的細(xì)胞和組織2、植物組織培育過(guò)程:離體組織或細(xì)胞植物體脫分化細(xì)胞分裂素生長(zhǎng)素愈傷組織芽根細(xì)胞分裂素生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素有利于根的分化生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素：有利于芽的分化，抑制根的分化生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素：促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素同時(shí)運(yùn)用，用量的比例對(duì)植物細(xì)胞發(fā)育方向的影響4pH、溫度、光照pH控制在5.8左右，溫度控制在1822。C,每日用日光燈照射12h生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素：討論：他能說(shuō)出各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專題2中微生物培育基的配方相比，MS培

4、育基的配方有哪些明顯的不同？答：微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無(wú)機(jī)鹽；蔗糖提供碳源，同時(shí)可以維持細(xì)胞的浸透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑遭到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營(yíng)養(yǎng)需求。 微生物培育基以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主。與微生物的培育不同，MS培育基那么需提供大量無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，無(wú)機(jī)鹽混合物包括植物生長(zhǎng)必需的大量元素和微量元素兩大類。植物組織培育過(guò)程離體的植物器官、組織、細(xì)胞脫分化愈傷組織再分化芽根植物體組織培育實(shí)驗(yàn)過(guò)程簡(jiǎn)圖移栽制備MS固體培育基外植體消毒 接種 培 養(yǎng)栽 培二、實(shí)驗(yàn)操作 移 栽MS培育基的配制操作步驟1MS培育基母液的配制: MS培育基含有十幾種化合物，

5、配制不方便也難稱量準(zhǔn)確，可將培育基中的各種成分?jǐn)U展一定倍數(shù)分別稱量，配成濃縮液，這種濃縮液叫做培育基母液。(母液配制見下表) 2MS1000mL培育基的配制: 按比例分別取適量各種成分的母液，參與燒杯，稱取蔗糖30g，瓊脂7g，加水并加熱使瓊脂溶解，按照需求的濃度分別參與激素，用1mol/L NaOH和1mol/L HCl溶液調(diào)理pH至5.86.0。將配好的培育基迅速分裝至組培瓶中，擰上蓋子，放入滅菌鍋121，滅菌20min。培育基的分裝 注：由于菊花的莖段的組織培育比較容易，因此不用添加植物激素3、滅菌分裝好的培育基連同其他器械一同進(jìn)展高壓蒸汽滅菌植物組培詳細(xì)操作步驟1取材： 取菊花生長(zhǎng)旺盛

6、的嫩枝(外植體不能太小，否那么會(huì)影響愈傷組織的構(gòu)成)。2消毒與修剪外植體： 流水沖洗后,加少許洗衣粉刷洗,流水沖20分鐘; 放入70酒精中搖動(dòng)23次,繼續(xù)67秒,無(wú)菌水沖洗23次，用無(wú)菌吸水紙吸干; 放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%氯化汞溶液中浸泡12分鐘,無(wú)菌水沖洗23次，無(wú)菌吸水紙吸干。3接種常用滅菌劑運(yùn)用濃度及效果比較表 植物組織培育消毒與接種表示圖 接種本卷須知每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分?jǐn)?shù)為75的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精燈火焰上燒一遍，冷卻后再接種外植體在培育基中要分布均勻，放置外植體數(shù)量根據(jù)錐形瓶的大小確定，普通胡蘿卜34塊，菊的莖或葉68塊，也不要太少，以充分利用培育基中的營(yíng)

7、養(yǎng)成分和光照條件插入時(shí)應(yīng)留意方向，不要倒插。莖段、莖尖基部插入培育基利于吸收水分和營(yíng)養(yǎng)思索：他計(jì)劃做幾組反復(fù)？他計(jì)劃設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎？答：每種資料或配方至少要做一組以上的反復(fù)。設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過(guò)滅菌的裝有培育基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培育，用以闡明培育基制造合格，沒有被雜菌污染。 4培育1、愈傷組織的培育 從接種外植體到出現(xiàn)愈傷組織需經(jīng)過(guò)2周時(shí)間。2周之內(nèi)可以看到外植體上逐漸長(zhǎng)出乳白色或黃白色的瘤狀愈傷組織。初次培育愈傷組織時(shí)，見不見光因不同植物而異，菊花在見光條件下愈傷組織長(zhǎng)的更快。胡蘿卜無(wú)光才長(zhǎng)得好。 2周后，培育基成分接近耗盡，必需改換培育基，進(jìn)展繼代培育，約20d2、

8、試管苗的培育當(dāng)愈傷組織長(zhǎng)到一定大小后，可以改換培育基，進(jìn)展試管苗培育五移栽1、翻開封口膜2、清洗轉(zhuǎn)移六栽培3、移栽 資料的移栽及溫室培育： 煉苗：先在外界環(huán)境閉瓶鍛煉3天，再開瓶鍛煉3天以培育基上開場(chǎng)長(zhǎng)出菌為宜。 移栽：去凈培育基，可先在滅過(guò)菌的珍珠巖或蛭石上培育使根系興隆再轉(zhuǎn)移到土壤中。菊花煉苗菊花移栽苗1、外植體帶菌2、培育基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時(shí)帶入4、環(huán)境不清潔 植物組培污染途徑污染的預(yù)防措施一防止外植體帶菌二保證培育基及接種器具徹底滅菌三操作人員嚴(yán)厲遵守?zé)o菌操作規(guī)程四保證接種與培育環(huán)境清潔1、培育基的滅菌高壓蒸汽滅菌2、外植體的消毒酒精、氯化汞3、接種的無(wú)菌操作酒精、酒精

9、燈灼燒4、無(wú)菌箱中的培育；5、移栽到消過(guò)毒的環(huán)境中生存一段時(shí)間。思索：在整個(gè)操作過(guò)程中，是如何來(lái)實(shí)現(xiàn)無(wú)菌環(huán)境的？組織培育原理過(guò)程意義利用植物細(xì)胞的全能性快速繁衍，培育無(wú)毒植株，培育作物新種類根芽植物體離體植物器官、組織或細(xì)胞 (脫分化)愈傷組織 (再分化)植物組織培育小結(jié):操作條件含有全部營(yíng)養(yǎng)成分的培育基、一定的溫度、空氣、無(wú)菌環(huán)境、適宜的PH、適光陰照等練習(xí)1.答：植物組織培育所利用的植物資料體積小、抗性差，對(duì)培育條件的要求較高。用于植物組織培育的培育基同樣適宜于某些微生物的生長(zhǎng)，如一些細(xì)菌、真菌等的生長(zhǎng)。而培育物一旦遭到微生物的污染，就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)前功盡棄，因此要進(jìn)展嚴(yán)厲的無(wú)菌操作。2.答：

10、外植體的生理形狀是勝利進(jìn)展組織培育的重要條件之一。生長(zhǎng)旺盛的嫩枝生理情況好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。影響植物組織培育的影響要素及本卷須知影響植物組織培育的幾個(gè)要素植物的資料 培育基植物激素pH值外界要素溫度，光照，通氣情況，資料處置等【本卷須知】1、實(shí)驗(yàn)所運(yùn)用的器材必需求嚴(yán)厲滅菌，留意無(wú)菌操作，防止因染菌導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗；2、配制儲(chǔ)存母液時(shí)，要算好各種成分逐次參與，等第一種成分完全溶解后再參與第二種成分，切忌“一鍋煮。有機(jī)物質(zhì)和鐵鹽溶液配好以后要裝入棕色瓶放入電冰箱內(nèi)保管，其它兩種種母液可在常溫下保管但最多不能超越一個(gè)月；3、pH值對(duì)培育基的硬度有影響，pH過(guò)高培育基變硬，pH過(guò)低培育基不能凝固，所以要調(diào)整好培育基的pH值；4、資料脫毒時(shí)不要在酒精中停留過(guò)長(zhǎng)時(shí)間，以免資料被殺死。5、一切制備好的溶液和試劑瓶上都要有標(biāo)簽，注上稱號(hào)、濃度、消毒與否和制備日期。組織培育實(shí)驗(yàn)室設(shè)置及設(shè)備引見1實(shí)驗(yàn)室設(shè)置組織培育實(shí)驗(yàn)室設(shè)置簡(jiǎn)圖2 組培相關(guān)設(shè)備儀器引見 電