口腔粘膜細胞基因組制備_第1頁
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文檔簡介

1、關(guān)于口腔粘膜細胞基因組制備關(guān)于口腔粘膜細胞基因組制備現(xiàn)在學習的是第一頁,共17頁目的:目的:現(xiàn)在學習的是第二頁,共17頁現(xiàn)在學習的是第三頁,共17頁現(xiàn)在學習的是第四頁,共17頁現(xiàn)在學習的是第五頁,共17頁v 現(xiàn)在學習的是第六頁,共17頁現(xiàn)在學習的是第七頁,共17頁實驗材料及試劑實驗材料及試劑現(xiàn)在學習的是第八頁,共17頁主要試劑的功能主要試劑的功能v抽提緩沖液抽提緩沖液:由:由SDS、EDTA、蛋白酶蛋白酶K組成組成 SDS的作用是裂解細胞的作用是裂解細胞 EDTA 的作用是絡(luò)合掉鎂等二價金屬離子,防止的作用是絡(luò)合掉鎂等二價金屬離子,防止DNA酶對酶對DNA分子的降解作用。分子的降解作用。 蛋白

2、酶蛋白酶K的作用是水解蛋白質(zhì)。的作用是水解蛋白質(zhì)。v酚和氯仿酚和氯仿/異戊醇異戊醇:抽提分離蛋白質(zhì):抽提分離蛋白質(zhì)v乙醇乙醇:沉淀:沉淀DNAvTE:溶解:溶解DNA現(xiàn)在學習的是第九頁,共17頁取材取材:用生理鹽水漱口后,口含生理鹽水用生理鹽水漱口后,口含生理鹽水1015ml約約23min,用,用15ml離心管(離心管(4000rpm 10min)收集細胞沉淀)收集細胞沉淀 (離心機的使用,平衡)(離心機的使用,平衡) 加入加入0.5ml抽提緩沖液,重懸沉淀抽提緩沖液,重懸沉淀 ,轉(zhuǎn)移至,轉(zhuǎn)移至1.5ml EP管管 (微量移液器的正確使用)(微量移液器的正確使用)混勻,混勻,65 溫育溫育30

3、min 加入等體積的飽和酚加入等體積的飽和酚(0.5ml),充分顛倒混勻,充分顛倒混勻(不要震蕩!)(不要震蕩?。嶒灢襟E及注意事項(一人一組):實驗步驟及注意事項(一人一組): 現(xiàn)在學習的是第十頁,共17頁12000rpm 5min,上層水相轉(zhuǎn)移至,上層水相轉(zhuǎn)移至新的新的EP管管 (高速離心機的使用與安全意識)(高速離心機的使用與安全意識) 加入等體積氯仿加入等體積氯仿/異戊醇,顛倒混勻異戊醇,顛倒混勻12000rpm 5min,上層水相轉(zhuǎn)移到,上層水相轉(zhuǎn)移到新的新的EP管管 加入加入2倍體積倍體積95%的乙醇,顛倒混勻的乙醇,顛倒混勻12000rpm 10min 現(xiàn)在學習的是第十一頁,共1

4、7頁現(xiàn)在學習的是第十二頁,共17頁棄上清,沉淀中加入棄上清,沉淀中加入75%乙醇乙醇 12000rpm 2min 輕輕棄去上清,打開輕輕棄去上清,打開EP蓋,室溫靜置蓋,室溫靜置510min 加入加入30 l0.1TE溶液,充分混勻后檢測結(jié)果溶液,充分混勻后檢測結(jié)果 現(xiàn)在學習的是第十三頁,共17頁分子醫(yī)學實驗注意事項分子醫(yī)學實驗注意事項v微量移液器的正確使用微量移液器的正確使用v離心機的正確使用離心機的正確使用v上課紀律上課紀律v撰寫實驗報告的規(guī)范撰寫實驗報告的規(guī)范現(xiàn)在學習的是第十四頁,共17頁 定性分析:定性分析:DNA瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳 PCR-SSCP 多態(tài)性分析多態(tài)性分析現(xiàn)在學習的是第十五頁,共17頁常見問題:常見問題: 1、提取的、提取的DNA不純:不純: 變性不充分;關(guān)鍵過程反應(yīng)時間過短;變性不充分;關(guān)鍵過程反應(yīng)時間過短; 離心時間或速度不夠。離心時間或速度不夠。 2、提取的、提取的DNA成涂布狀:成涂布狀: 操作過程中用力過猛,動作粗暴;操作過程中用力過猛,動作粗暴; 操作系統(tǒng)有污染。操作系統(tǒng)有污染。 3、與細胞器、與細胞器DNA分離不全;分離不全;

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