血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)

1、1、掌握血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活力測定的基、掌握血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活力測定的基本原理。本原理。2、熟悉血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活力測定的主、熟悉血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活力測定的主要操作方法。要操作方法。3、了解血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活力測定的臨、了解血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活力測定的臨床意義。床意義。 血清中的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（血清中的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）在）在37，pH7.4的條件下，可催化底物中的丙氨酸和的條件下，可催化底物中的丙氨酸和-酮酮戊二酸反應(yīng)，生成戊二酸反應(yīng)，生成丙酮酸和谷氨酸丙酮酸和谷氨酸 ： 生成的丙酮酸可與生成的丙酮酸可與2,4-二硝基苯肼反應(yīng)，生成丙二硝基苯肼反應(yīng)，生成丙酮酸酮

2、酸-2,4二硝基苯腙。此化合物在堿性溶液中呈二硝基苯腙。此化合物在堿性溶液中呈現(xiàn)棕色，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與丙酮酸的現(xiàn)棕色，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與丙酮酸的生成量，即生成量，即ALT的活性高低呈正比關(guān)系。用比色的活性高低呈正比關(guān)系。用比色法測定其吸光度，查丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可計(jì)算法測定其吸光度，查丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可計(jì)算谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性。谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性。 改良的穆氏法改良的穆氏法(Mohun)規(guī)定每毫升血清在規(guī)定每毫升血清在37(pH7.4)的條件下的條件下,與底物作用與底物作用30分鐘后分鐘后,每生成每生成2.5g丙酮酸為一個(gè)轉(zhuǎn)氨酶活性單丙酮酸為一個(gè)轉(zhuǎn)氨酶活性單位位 。1、取干燥試管

3、兩支，編號，按下表操作： 將溶液混勻，靜置將溶液混勻，靜置10min。在。在520nm波波長下比色，用對照管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，讀取測定長下比色，用對照管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，讀取測定管的吸光度值。然后從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出其管的吸光度值。然后從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出其相應(yīng)的丙酮酸含量（相應(yīng)的丙酮酸含量（g）2、結(jié)果計(jì)算：按下列公式計(jì)算、結(jié)果計(jì)算：按下列公式計(jì)算。 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性（丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性（U/ml）= 標(biāo)準(zhǔn)曲標(biāo)準(zhǔn)曲線中查知的微克數(shù)線中查知的微克數(shù)/2.5 1/0.1 肝細(xì)胞肝細(xì)胞ALT含量最豐富，因此肝臟疾病致肝含量最豐富，因此肝臟疾病致肝細(xì)胞受損時(shí)，細(xì)胞受損時(shí)，ALT大量釋放入血，引起血中大量釋放入血，引起

4、血中ALT顯著升高。測定顯著升高。測定ALT活性是檢查肝功能活性是檢查肝功能的重要指標(biāo)之一。的重要指標(biāo)之一。 1、ALT超過超過200單位時(shí)單位時(shí),應(yīng)將血清稀釋后再進(jìn)行鑒定應(yīng)將血清稀釋后再進(jìn)行鑒定,結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)結(jié)果乘以稀釋倍數(shù).2、酶的活力測定與溫度、時(shí)間影響很大、酶的活力測定與溫度、時(shí)間影響很大,因此反應(yīng)因此反應(yīng)嚴(yán)重控制溫度和注意掌握時(shí)間嚴(yán)重控制溫度和注意掌握時(shí)間.3、血清標(biāo)本不應(yīng)溶血、血清標(biāo)本不應(yīng)溶血,且最好在采血之當(dāng)日進(jìn)行測且最好在采血之當(dāng)日進(jìn)行測定定,如不能當(dāng)日操作者如不能當(dāng)日操作者,可于可于4冰箱中儲存冰箱中儲存12 天。天。 4、吸光度與丙酮酸的標(biāo)準(zhǔn)線成拋物線、吸光度與丙酮酸的標(biāo)準(zhǔn)線成拋物線,是因是因?yàn)槌崤c為除丙酮酸與2.4二硝基苯肼在堿性溶液中二硝基苯肼在堿性溶液中能成