分光光度測定方法

1、關(guān)于分光光度測定方法現(xiàn)在學習的是第一頁，共12頁一、普通分光光度法一、普通分光光度法1.1.單組分的測定單組分的測定 通常采用通常采用 A-C 標準曲線法定量測定。標準曲線法定量測定。2.2.多組分的同時測定多組分的同時測定 若各組分的吸收曲線互不重疊，則可在若各組分的吸收曲線互不重疊，則可在各自最大吸收波長處分別進行測定。這本質(zhì)各自最大吸收波長處分別進行測定。這本質(zhì)上與單組分測定沒有區(qū)別。上與單組分測定沒有區(qū)別。 若各組分的吸收曲線互有重疊，則可若各組分的吸收曲線互有重疊，則可根據(jù)吸光度的加合性求解聯(lián)立方程組得出根據(jù)吸光度的加合性求解聯(lián)立方程組得出各組分的含量。各組分的含量。 A1= a1b

2、ca b1bcb A2= a2bca b2bcb 現(xiàn)在學習的是第二頁，共12頁二、示差分光光度法（示差法）二、示差分光光度法（示差法） 普通分光光度法一般只適于測定微量組分，當待測組分含量較普通分光光度法一般只適于測定微量組分，當待測組分含量較高時，將產(chǎn)生較大的誤差。需采用示差法。即提高入射光強度，并高時，將產(chǎn)生較大的誤差。需采用示差法。即提高入射光強度，并采用濃度稍低于待測溶液濃度的標準溶液作參比溶液。采用濃度稍低于待測溶液濃度的標準溶液作參比溶液。 設(shè)：待測溶液濃度為設(shè)：待測溶液濃度為c cx x，標準溶液濃度為，標準溶液濃度為c cs s( (c cs s c cx x) )。則。則：

3、Ax= b cx As = b cs x s =b(cx cs ）=bc 測得的吸光度相當于普通法中待測溶液與標準溶液的吸光度之差測得的吸光度相當于普通法中待測溶液與標準溶液的吸光度之差。 現(xiàn)在學習的是第三頁，共12頁示差分光光度法（示差法）示差分光光度法（示差法） AAx As =b(cx cs ）=bc 測得的吸光度相當于普通法中待測溶液與標準溶液的吸光測得的吸光度相當于普通法中待測溶液與標準溶液的吸光度之差度之差A 。 示差法測得的吸光度與示差法測得的吸光度與c呈直線關(guān)系。由標準曲線上查得呈直線關(guān)系。由標準曲線上查得相應的相應的c值，則待測溶液濃度值，則待測溶液濃度cx ： cx = c

4、s + c 現(xiàn)在學習的是第四頁，共12頁示差法標尺擴展原理：示差法標尺擴展原理： 普通法：普通法： cs的的T=10%；cx的的T=5% 示差法：示差法： cs 做參比，調(diào)做參比，調(diào)T=100% 則：則： cx的的T=50% ；標尺擴展；標尺擴展10倍倍現(xiàn)在學習的是第五頁，共12頁三、雙波長分光光度法三、雙波長分光光度法 不需空白溶液作參比；但需要兩個單色器獲得兩束單色光不需空白溶液作參比；但需要兩個單色器獲得兩束單色光( (1 1和和2 2) )；以參比波長；以參比波長1 1處的吸光度處的吸光度A A11作為參比，來消除干擾作為參比，來消除干擾。在分析渾濁或背景吸收較大的復雜試樣時顯示出很大

5、的優(yōu)。在分析渾濁或背景吸收較大的復雜試樣時顯示出很大的優(yōu)越性。靈敏度、選擇性、測量精密度等方面都比單波長法有越性。靈敏度、選擇性、測量精密度等方面都比單波長法有所提高。所提高。 A A A22 A A11 ( (22 11) )b cb c 兩波長處測得的吸光度差值兩波長處測得的吸光度差值A(chǔ)與待測組分濃度成正比。與待測組分濃度成正比。11和和22分別表示待測組分在分別表示待測組分在1 1和和2 2處的摩爾吸光系數(shù)。處的摩爾吸光系數(shù)。 現(xiàn)在學習的是第六頁，共12頁關(guān)鍵問題關(guān)鍵問題: : 測量波長測量波長2 2和參比波長和參比波長1 1的選擇與組合的選擇與組合 以兩組分以兩組分x x和和y y的雙

6、波長法測定為例：的雙波長法測定為例：設(shè)：設(shè)：x x為待測組分，為待測組分，y y為干擾組分，二者的吸光度差分別為為干擾組分，二者的吸光度差分別為: : Ax和和Ay，則該體系的總吸光度差，則該體系的總吸光度差Ax+y為：為： Ax+y = A x + A y 如何選擇波長如何選擇波長1 、2有一定的要求。有一定的要求?，F(xiàn)在學習的是第七頁，共12頁選擇波長組合選擇波長組合1 1 、2 2的基本要求是：的基本要求是： 選定的波長選定的波長1 1和和2 2處干擾組分應具有相同吸光度，處干擾組分應具有相同吸光度，即：即： Ay = y = A y y22 A y y11 = 0 = 0故：故： Ax+

7、y = x+y = A x=(x=(x x22x x11) )bcbcx x此時：測得的吸光度差此時：測得的吸光度差A只與待測組分只與待測組分x x的濃度呈線性關(guān)系，的濃度呈線性關(guān)系，而與干擾組分而與干擾組分y y無關(guān)。若無關(guān)。若x x為干擾組分，則也可用同樣的方法測定為干擾組分，則也可用同樣的方法測定y y組分。組分。 可采用作圖法選擇符合上述可采用作圖法選擇符合上述兩個條件的波長組合。兩個條件的波長組合。 在選定的兩個波長在選定的兩個波長1 1和和2 2處待測組分的吸光度應具有足夠處待測組分的吸光度應具有足夠大的差值。大的差值?，F(xiàn)在學習的是第八頁，共12頁四、導數(shù)分光光度法四、導數(shù)分光光度

8、法 導數(shù)分光光度法在多組分同時測定、渾濁樣品分析、消除背景導數(shù)分光光度法在多組分同時測定、渾濁樣品分析、消除背景干擾、加強光譜的精細結(jié)構(gòu)以及復雜光譜的辨析等方面，顯示了干擾、加強光譜的精細結(jié)構(gòu)以及復雜光譜的辨析等方面，顯示了很大的優(yōu)越性。很大的優(yōu)越性。 利用吸光度利用吸光度( (或透光度或透光度) )對波長的導數(shù)曲線來進行分析：對波長的導數(shù)曲線來進行分析： 0 0 e e-bcbc假定入射光強度假定入射光強度0 0 在整個波長范圍內(nèi)保持恒定：在整個波長范圍內(nèi)保持恒定： d dI I 0 0 /d /d0 0則則：d dI I/d/d0 0 bcbc e e -bc-bc d d/d/d 0 0

9、 bcbc d d/d/d 現(xiàn)在學習的是第九頁，共12頁導數(shù)分光光度法導數(shù)分光光度法 d dI I/d/d 0 0 bcbc d d/d/d 一階導數(shù)信號與試樣濃度呈線一階導數(shù)信號與試樣濃度呈線性關(guān)系；性關(guān)系； 測定靈敏度依賴于摩爾吸光系數(shù)對測定靈敏度依賴于摩爾吸光系數(shù)對波長的變化率波長的變化率d d/d/d。吸收曲線的。吸收曲線的拐點處拐點處d d/d/d最大，故其靈敏度最最大，故其靈敏度最高高( (見圖）。見圖）。 同理可以導出其二階和三階導同理可以導出其二階和三階導數(shù)光譜（略）數(shù)光譜（略） 現(xiàn)在學習的是第十頁，共12頁請選擇內(nèi)容：請選擇內(nèi)容：第一節(jié)第一節(jié) 基本原理基本原理第二節(jié)第二節(jié) 紫外紫外-可見分光