中藥制劑的含量分析

1、第四章 中藥制劑的含量分析反映其制劑中有效成分或者毒性成分的含量衡量其制劑工藝的穩(wěn)定性和中藥材的質(zhì)量?jī)?yōu)劣 1 樣品的處理樣品處理的主要作用樣品處理的主要作用釋放被測(cè)組分，制成穩(wěn)定試樣除去雜質(zhì)，純化濃縮試樣形式符合測(cè)定的要求樣品的粉碎樣品的粉碎n目的取樣均勻，提取完全n粉碎設(shè)備粉碎機(jī)、研缽、勻漿機(jī) 粒度大小合適 防止污染或損失1 樣品的處理樣品的提取樣品的提取 n關(guān)鍵關(guān)鍵提取完全提取完全n溶劑的選擇溶劑的選擇w水、酸水、堿水水、酸水、堿水w親水性的有機(jī)溶劑：乙醇（酒精）、甲醇（木精）、丙酮親水性的有機(jī)溶劑：乙醇（酒精）、甲醇（木精）、丙酮w親脂性的有機(jī)溶劑：石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、親脂

2、性的有機(jī)溶劑：石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、 二氯乙烷二氯乙烷n冷浸法冷浸法 部分測(cè)定法 全部測(cè)定法w優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，適于熱不穩(wěn)定的樣品，且提取雜質(zhì)少w缺點(diǎn)缺點(diǎn)：費(fèi)時(shí)（12-24 h）、費(fèi)溶劑（10-50倍） 靈寶護(hù)心丹（牛黃、麝香等）中膽酸的含量測(cè)定靈寶護(hù)心丹（牛黃、麝香等）中膽酸的含量測(cè)定 取本品適量，研細(xì)，取約取本品適量，研細(xì)，取約0.5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加石油醚，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加石油醚（60-90）4ml，浸泡，浸泡1小時(shí)，濾過(guò)，濾渣及濾紙揮去溶劑，放回錐形小時(shí)，濾過(guò)，濾渣及濾紙揮去溶劑，放回錐形瓶中，精密加入冰醋酸無(wú)水乙醇溶液（瓶中，精密加入冰醋酸無(wú)水

3、乙醇溶液（1 10）15ml，搖勻，密塞，搖勻，密塞，稱(chēng)定重量，浸泡稱(chēng)定重量，浸泡12小時(shí)，再稱(chēng)定重量，用冰醋酸無(wú)水乙醇溶液（小時(shí)，再稱(chēng)定重量，用冰醋酸無(wú)水乙醇溶液（1 10）補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。1 樣品的處理樣品的提取樣品的提取 n回流提取法回流提取法n連續(xù)回流提取法連續(xù)回流提取法萬(wàn)應(yīng)膠囊（黃連等）中鹽酸小檗堿測(cè)定萬(wàn)應(yīng)膠囊（黃連等）中鹽酸小檗堿測(cè)定+HCl-70%乙醇溶液，加熱回流1h保和丸（陳皮等）中橙皮甙測(cè)定保和丸（陳皮等）中橙皮甙測(cè)定+甲醇，加熱回流至提取液無(wú)色為止1 樣品的處理樣品的提取樣品的提取 n

4、超聲提取法超聲提取法w原理原理：超聲波的助溶作用w優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，提取速度快 需對(duì)超聲頻率、提取時(shí)間、提取溶媒等進(jìn)行考察 超聲波可能引起供試品成分的改變保濟(jì)丸（厚撲等）中厚撲酚測(cè)定保濟(jì)丸（厚撲等）中厚撲酚測(cè)定+石油醚（石油醚（30-60），超聲處理（功率，超聲處理（功率500W，頻率，頻率33kHz）2次，每次次，每次30min1 樣品的處理樣品的提取 n超臨界流體提取法（Supercritical-fluid extraction，SFE）w超臨界流體特殊的物質(zhì)狀態(tài)n密度 d 液體 溶解能力強(qiáng)溶解能力強(qiáng)n粘度 氣體 傳質(zhì)快，有利于待測(cè)組分的擴(kuò)散傳質(zhì)快，有利于待測(cè)組分的擴(kuò)散n表面張力幾乎為

5、 0 浸潤(rùn)性能好浸潤(rùn)性能好n密度受壓力、溫度的影響大 改變對(duì)溶質(zhì)的溶解能力改變對(duì)溶質(zhì)的溶解能力n加入甲醇、氯仿、苯等改變極性 提取不同極性的成分提取不同極性的成分w優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：速度快、萃取效率高、方法準(zhǔn)確度高、選擇性較高、 節(jié)省溶劑、易于自動(dòng)化，而且可避免使用易燃，有毒 的有機(jī)溶劑，能與色譜和光譜等分析儀器直接聯(lián)用 1 樣品的處理樣品的分離純化樣品的分離純化 n沉淀法沉淀法復(fù)方益母草口服液中水蘇堿的含量測(cè)定復(fù)方益母草口服液中水蘇堿的含量測(cè)定利用雷氏鹽（硫氰酸鉻銨）作沉淀劑，在酸性介質(zhì)中可與大部利用雷氏鹽（硫氰酸鉻銨）作沉淀劑，在酸性介質(zhì)中可與大部分有機(jī)堿生成難溶于水的配合物與其它雜質(zhì)分離。分有機(jī)

6、堿生成難溶于水的配合物與其它雜質(zhì)分離。 蛇膽糖漿口服液蛇膽糖漿口服液含有大量糖，可用無(wú)水乙醇回流樣品，冷后過(guò)含有大量糖，可用無(wú)水乙醇回流樣品，冷后過(guò)濾，除糖以消除其干擾。濾，除糖以消除其干擾。 1 樣品的處理樣品的分離純化樣品的分離純化 n蒸餾法蒸餾法w適用于具揮發(fā)性的待測(cè)組分，如揮發(fā)油、小分子的生物堿、丹皮酚等w最常用水蒸氣蒸餾法n共水蒸餾法n通水蒸氣蒸餾法n水上蒸餾法w利用鹽析作用，提高蒸餾效果1 樣品的處理樣品的分離純化樣品的分離純化 n液液-液萃取法液萃取法w直接萃取法直接萃取法n萃取劑的選擇萃取劑的選擇 親脂性有機(jī)溶劑，如苯、氯仿或乙醚親脂性有機(jī)溶劑，如苯、氯仿或乙醚 弱親脂性的溶劑

7、，如乙酸乙酯、弱親脂性的溶劑，如乙酸乙酯、正正丁醇等丁醇等n多次萃取（多次萃?。?-43-4次）次）n調(diào)整水相酸度，提取有機(jī)酸、有機(jī)堿調(diào)整水相酸度，提取有機(jī)酸、有機(jī)堿n利用鹽析作用，提高提取率利用鹽析作用，提高提取率1 樣品的處理樣品的分離純化樣品的分離純化 n液液-液萃取法液萃取法w離子對(duì)萃取法離子對(duì)萃取法BH+（水相）+ In-(水相) BH+In-（水相） BH+In-（有機(jī)相） n適合于高度電離的有機(jī)酸、堿化合物的萃取適合于高度電離的有機(jī)酸、堿化合物的萃取 水相酸度的控制 離子對(duì)試劑的選擇1 樣品的處理樣品的分離純化樣品的分離純化 n色譜法（層析法）色譜法（層析法）w分離的原理：吸附色

8、譜、分配色譜、離子交換色譜、分離的原理：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、 凝膠色譜凝膠色譜w按操作方式：柱色譜、薄層色譜、紙色譜按操作方式：柱色譜、薄層色譜、紙色譜w裝柱方法：濕法裝柱、干法裝柱裝柱方法：濕法裝柱、干法裝柱w微柱色譜（固相萃?。┪⒅V（固相萃?。﹏柱的大?。褐拇笮。洪L(zhǎng)長(zhǎng)5 515cm15cm，內(nèi)徑，內(nèi)徑0.50.51cm1cm n柱填料：柱填料：硅膠、氧化鋁、氧化鎂、活性炭、聚酰胺、大孔樹(shù)脂、硅膠、氧化鋁、氧化鎂、活性炭、聚酰胺、大孔樹(shù)脂、 硅藻土、硅藻土、離子交換樹(shù)脂、鍵合相硅膠離子交換樹(shù)脂、鍵合相硅膠C C8 8、C C1818等等 1 樣品的處理樣品的分離純化樣品的

9、分離純化 n色譜法（層析法）色譜法（層析法）w硅膠：硅膠：酸性吸附劑，適用于中性或酸性成分的層析，強(qiáng)烈保 留堿性化合物n洗脫洗脫順序：順序：極性小極性小大大w氧化鋁：氧化鋁：帶有堿性，分離一些堿性中草藥成分，不宜用于醛、酮、醋、內(nèi)酯等類(lèi)型的化合物分離 中性氧化鋁、酸性氧化鋁中性氧化鋁、酸性氧化鋁：適用于酸性成分的分離w鍵合相硅膠鍵合相硅膠（C C1818或或ODSODS）：分開(kāi)脂溶性和水溶性成分n操作程序操作程序：柱的活化；上樣；清洗；洗脫。n洗脫洗脫順序：順序：極性極性大大小小1 樣品的處理樣品的分離純化樣品的分離純化 n色譜法（層析法）色譜法（層析法）w大孔樹(shù)脂大孔樹(shù)脂n分為極性（分為極性

10、（丙烯酰胺聚合物丙烯酰胺聚合物 ）和非極性（）和非極性（苯乙烯和二乙烯苯的苯乙烯和二乙烯苯的共聚物共聚物）型）型n非極性型（非極性型（XAD-2XAD-2等）：等）：分開(kāi)脂溶性和水溶性成分 使用前需要用有機(jī)溶劑除去雜質(zhì)，有時(shí)還需用酸、堿清洗 w聚酰胺聚酰胺：與溶質(zhì)形成氫鍵而產(chǎn)生吸附作用，常用于含酚、酸、醌 類(lèi)藥物樣品液的凈化分離w硅藻土、纖維素硅藻土、纖維素：以水基質(zhì)液作為固定相，與水不混溶的有機(jī)溶劑為流動(dòng)相的分配色譜n洗脫洗脫順序：順序：極性極性小小大大1 樣品的處理樣品的分離純化樣品的分離純化 n色譜法（層析法）色譜法（層析法）w離子交換樹(shù)脂：離子交換樹(shù)脂：用于除去樣品中的離子及萃取可離解

11、化合物 (弱酸、弱堿藥物)w活性炭活性炭：非極性吸附劑n使用前需要先用稀鹽酸洗滌，其次用乙醇洗，再以水洗凈，于80干燥n分開(kāi)水溶性芳香族物質(zhì)與脂肪族物質(zhì)，單糖與多糖，氨基酸與多肽1 樣品的處理樣品的分離純化樣品的分離純化 n消化法消化法測(cè)定中藥制劑中的無(wú)機(jī)元素測(cè)定中藥制劑中的無(wú)機(jī)元素w濕法消化濕法消化n硝酸硝酸高氯酸法：高氯酸法：適用于血，尿、組織等生物樣品和含動(dòng)植物藥制劑的破壞 對(duì)含氮雜環(huán)類(lèi)有機(jī)物破壞不夠完全。 n硝酸硝酸硫酸法硫酸法 與硫酸形成不溶性硫酸鹽的金屬離子的測(cè)定，不宜采有此法。 n硫酸硫酸硫酸鹽法：硫酸鹽法：常用于含砷或銻的有機(jī)樣品的破壞，破壞后得到三價(jià)砷或銻。 1 樣品的處理樣

12、品的分離純化樣品的分離純化 n消化法消化法測(cè)定中藥制劑中的無(wú)機(jī)元素測(cè)定中藥制劑中的無(wú)機(jī)元素w干干法消化法消化 供試品供試品 灰分灰分 控制溫度在420以下不適用于含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷等，）有機(jī)樣品的破壞。 灼燒灰化(+NaCO3/MgO)2 中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理 劑型繁多，干擾大劑型繁多，干擾大具體具體 “劑型劑型”具體分析具體分析 應(yīng)根據(jù)應(yīng)根據(jù)制備工藝與劑型的不同制備工藝與劑型的不同、賦形劑的特點(diǎn)賦形劑的特點(diǎn)、被測(cè)、被測(cè) 成分的成分的理化性質(zhì)理化性質(zhì)和和存在狀態(tài)存在狀態(tài)以及各類(lèi)成分之間以及各類(lèi)成分之間相互干相互干 擾擾的程度等進(jìn)行綜合考慮。的程度等進(jìn)行綜合

13、考慮。 固體中藥制劑包括丸劑、片劑、散劑、顆粒劑、固體中藥制劑包括丸劑、片劑、散劑、顆粒劑、栓劑、滴丸劑等栓劑、滴丸劑等 半固體中藥制劑包括流浸膏劑、浸膏劑、糖漿半固體中藥制劑包括流浸膏劑、浸膏劑、糖漿劑和煎膏劑劑和煎膏劑液體中藥制劑包括合劑、口服液、酒劑、酊劑、液體中藥制劑包括合劑、口服液、酒劑、酊劑、注射劑等注射劑等 2 中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理固體中藥制劑的預(yù)處理n丸劑預(yù)處理w蜜丸的處理 逍遙丸（大蜜丸）中炙甘草的測(cè)定逍遙丸（大蜜丸）中炙甘草的測(cè)定 取本品取本品18g，加硅藻土，加硅藻土10g，研勻，加乙醇，研勻，加乙醇60ml，超聲處理，超聲處理30min，

14、濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用乙醚振使溶解，用乙醚振搖提取搖提取2次，每次次，每次10ml，棄去乙醚液，用水飽和的正丁醇振搖，棄去乙醚液，用水飽和的正丁醇振搖提取提取3次，每次次，每次30ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌3次，每次次，每次20ml，棄去水洗液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?，棄去水洗液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。使溶解，作為供試品溶液。 2 中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理固體中藥制劑的預(yù)處理n片劑預(yù)處理w賦形劑（淀粉、糊精、糖粉、硫酸鈣等）的影響 結(jié)果以

15、每片中含被測(cè)成分的重量來(lái)表示。復(fù)方丹參片中丹參酮復(fù)方丹參片中丹參酮IIAIIA的的TLCTLC測(cè)定測(cè)定 取本品取本品20片，精密稱(chēng)定重量，研細(xì)，精密稱(chēng)出細(xì)粉適量（約相片，精密稱(chēng)定重量，研細(xì)，精密稱(chēng)出細(xì)粉適量（約相當(dāng)當(dāng)10片的重量），置片的重量），置100ml索氏提取器中，加乙醚索氏提取器中，加乙醚100ml，置，置50C水浴中回流提取水浴中回流提取3h，提取液在水浴上蒸干，殘?jiān)靡掖?，提取液在水浴上蒸干，殘?jiān)靡掖既芙獠⒁浦寥芙獠⒁浦?ml容量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試容量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試液。液。2 中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理固體中藥

16、制劑的預(yù)處理n顆粒劑預(yù)處理w糖、糊精等輔料的影響板藍(lán)根沖劑中靛玉紅的板藍(lán)根沖劑中靛玉紅的TLCTLC測(cè)定測(cè)定 取研勻的沖劑樣品取研勻的沖劑樣品35g，精密稱(chēng)定，置燒瓶?jī)?nèi)，加氯仿置水浴中，精密稱(chēng)定，置燒瓶?jī)?nèi)，加氯仿置水浴中回流提取回流提取3次（次（50，25，25ml），合并濾液于蒸發(fā)皿中，蒸干，），合并濾液于蒸發(fā)皿中，蒸干，殘留物用氯仿定容至殘留物用氯仿定容至2ml，備用。，備用。2 中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理固體中藥制劑的預(yù)處理n散劑預(yù)處理w藥材粉末入藥，而且分布也不均勻 注意取樣的代表性九分散中士的寧的含量測(cè)定九分散中士的寧的含量測(cè)定 取本品取本品10包，混合均勻

17、。取約包，混合均勻。取約2g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加氯仿精密加氯仿20ml與濃氨試液與濃氨試液1ml，輕輕搖勻，稱(chēng)重，于室溫放置，輕輕搖勻，稱(chēng)重，于室溫放置24小時(shí)，再稱(chēng)重，補(bǔ)足氯仿減失的重量，充分振搖，濾過(guò)。精密小時(shí)，再稱(chēng)重，補(bǔ)足氯仿減失的重量，充分振搖，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液量取續(xù)濾液10ml，用硫酸溶液（，用硫酸溶液（3100）分次提取，至生物堿）分次提取，至生物堿提盡，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加濃氨試液使呈堿性，提盡，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加濃氨試液使呈堿性，用氯仿分次提取，合并氯仿液，蒸干，放冷，殘?jiān)芯芗勇确掠寐确路执翁崛?，合并氯?/p>

18、液，蒸干，放冷，殘?jiān)芯芗勇确?ml使溶解，作為供試品溶液。使溶解，作為供試品溶液。每包九分散按每包九分散按2.5g計(jì)，含士的寧應(yīng)為計(jì)，含士的寧應(yīng)為4.5-5.5mg。2 中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理固體中藥制劑的預(yù)處理n栓劑預(yù)處理w基質(zhì)（油脂性基質(zhì)和親水性基質(zhì)）的干擾雙黃連栓（小兒消炎栓）中綠原酸、黃芩甙的測(cè)定雙黃連栓（小兒消炎栓）中綠原酸、黃芩甙的測(cè)定 取本品取本品1粒粒, 加水加水20ml, 置溫水浴中，用置溫水浴中，用10%的氫氧的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至值至7.07.5， 使熔化，置冷處使基使熔化，置冷處使基質(zhì)凝固，濾過(guò)，取濾液質(zhì)凝固，濾過(guò)，取濾

19、液10ml，加無(wú)水乙醇，加無(wú)水乙醇4ml，至，至水浴中振搖數(shù)分鐘，放置，取上清液作為供試品溶液。水浴中振搖數(shù)分鐘，放置，取上清液作為供試品溶液。 2 中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理固體中藥制劑的預(yù)處理n滴丸劑預(yù)處理w基質(zhì)（水溶性基質(zhì)和水不溶性基質(zhì)）存在引起的干擾復(fù)方丹參滴丸中三七的測(cè)定復(fù)方丹參滴丸中三七的測(cè)定 取本品取本品40丸，加甲醇丸，加甲醇10ml，振搖，振搖10分鐘，于分鐘，于4放放置置24小時(shí)，使聚乙二醇析出完全，濾過(guò)，取濾液作為小時(shí)，使聚乙二醇析出完全，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液供試品溶液 2 中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理半固體中藥制劑

20、的預(yù)處理n糖漿劑、煎膏劑預(yù)處理w萃取法、柱層析法、蒸餾法、加惰性材料（硅藻土、纖維素等）處理，再用溶劑提取 健兒糖漿中總黃酮的定量分析健兒糖漿中總黃酮的定量分析將糖漿用鹽酸調(diào)節(jié)將糖漿用鹽酸調(diào)節(jié)pH至至12，再用醋酸乙酯萃取后，再用醋酸乙酯萃取后測(cè)定。測(cè)定。止咳糖漿中鹽酸麻黃堿的含量測(cè)定止咳糖漿中鹽酸麻黃堿的含量測(cè)定取一定量糖漿，加氫氧化鈉堿化，進(jìn)行蒸餾，收集取一定量糖漿，加氫氧化鈉堿化，進(jìn)行蒸餾，收集餾出液作為供試品溶液。餾出液作為供試品溶液。 2 中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理液體中藥制劑的預(yù)處理?yè)u勻后再取樣n合劑與口服液（水性液體制劑）的預(yù)處理w合劑含雜質(zhì)量較大，直接

21、分析困難w口服液雜質(zhì)含量相對(duì)較少，可直接進(jìn)行分析或經(jīng)凈化分離后分析西洋參精口服液中人參總皂甙的含量測(cè)定（西洋參精口服液中人參總皂甙的含量測(cè)定（TLCTLC）精密移取待測(cè)樣品精密移取待測(cè)樣品10ml，加入到處理好的大孔樹(shù)脂柱上，加蒸餾，加入到處理好的大孔樹(shù)脂柱上，加蒸餾水水80ml洗柱，洗液棄去，再用洗柱，洗液棄去，再用70%乙醇乙醇100ml洗柱，收集洗脫洗柱，收集洗脫液，于液，于80C低溫水浴上蒸干，殘留物用甲醇定容于低溫水浴上蒸干，殘留物用甲醇定容于10ml容量瓶容量瓶中中。 2 中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理液體中藥制劑的預(yù)處理n酒劑與酊劑（醇性液體制劑）的預(yù)處理w

22、雜質(zhì)較少，前處理較簡(jiǎn)單 w常用的凈化方法：加熱蒸去乙醇，然后再用有機(jī)溶劑萃取或柱層析。 遠(yuǎn)志酊中遠(yuǎn)志皂甙元的含量測(cè)定（遠(yuǎn)志酊中遠(yuǎn)志皂甙元的含量測(cè)定（TLCTLC）精密吸取本品精密吸取本品25ml，置，置100ml標(biāo)準(zhǔn)磨口燒瓶中，減壓蒸去溶劑，標(biāo)準(zhǔn)磨口燒瓶中，減壓蒸去溶劑，放冷，加放冷，加50ml甲醇，密塞后超聲振蕩甲醇，密塞后超聲振蕩20min，放置過(guò)夜。精密，放置過(guò)夜。精密吸取上清液吸取上清液20ml，加入，加入5倍量乙醚，放置使其沉淀完全。傾去上倍量乙醚，放置使其沉淀完全。傾去上清液，于沉淀中加入清液，于沉淀中加入10%鹽酸鹽酸50ml，沸水浴中回流，沸水浴中回流2h，過(guò)濾得，過(guò)濾得沉淀。

23、將沉淀定量轉(zhuǎn)入沉淀。將沉淀定量轉(zhuǎn)入50ml容量瓶，用甲醇溶解并稀釋至刻度。容量瓶，用甲醇溶解并稀釋至刻度。2 中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理液體中藥制劑的預(yù)處理n注射劑（水性液體制劑）的預(yù)處理w液-液萃取法、或柱色譜法等 w注射用無(wú)菌粉末：可直接取樣，用合適的溶劑溶解，直接進(jìn)行測(cè)定。清開(kāi)靈注射液中總膽酸的含量測(cè)定（比色法）清開(kāi)靈注射液中總膽酸的含量測(cè)定（比色法）精密稱(chēng)取本品精密稱(chēng)取本品1ml，置離心管中，滴加，置離心管中，滴加6mol/l鹽酸鹽酸1滴，攪拌使滴，攪拌使膽酸沉淀完全，離心分離，棄去上清液，沉淀用膽酸沉淀完全，離心分離，棄去上清液，沉淀用0.2mol/l鹽酸鹽

24、酸10滴洗滴洗2次，離心，洗液棄去，沉淀用冰醋酸次，離心，洗液棄去，沉淀用冰醋酸15滴溶解，定量轉(zhuǎn)滴溶解，定量轉(zhuǎn)移于己于移于己于10ml容量瓶中，再用少量冰醋酸洗滌離心管理容量瓶中，再用少量冰醋酸洗滌離心管理3-4次，次，洗液移入量瓶中，再加冰醋酸至刻度，搖勻洗液移入量瓶中，再加冰醋酸至刻度，搖勻。2 中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理外用中藥制劑的預(yù)處理n軟膏劑的預(yù)處理w基質(zhì)材料、防腐劑、抗氧化劑等雜質(zhì)的干擾 w濾除基質(zhì)測(cè)定法：濾除基質(zhì)測(cè)定法：加入適當(dāng)溶劑，加熱使軟膏液化，再放冷，待基質(zhì)凝固后，與上清夜分開(kāi)w提取分離法：提取分離法：在適宜的酸性或堿性基質(zhì)中，用不混溶的有機(jī)溶

25、劑將基質(zhì)提取后除去?；蛴糜袡C(jī)溶劑將樣品溶解，再用酸或堿性水溶液進(jìn)行萃取分離后測(cè)定。w灼燒法：灼燒法：將樣品灼燒，使基質(zhì)分解除盡，然后對(duì)灼燒后的無(wú)機(jī)化合物進(jìn)行測(cè)定。w離心法：離心法：取樣品加適宜的溶劑，混勻，再進(jìn)行離心，分取上清液w乳劑型軟膏乳劑型軟膏：可采用加熱、加電解質(zhì)、加相反類(lèi)型乳化劑使乳劑破裂，再進(jìn)行提取2 中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理外用中藥制劑的預(yù)處理n膏藥的預(yù)處理w消除基質(zhì)（食用植物油 ）影響w橡膠膏劑組成復(fù)雜，主藥含量又少，要注意被測(cè)成分與基質(zhì)（橡膠、凡士林、羊毛脂、氧化鋅和松香等 ）的分離麝香活血化瘀膏中三七的測(cè)定麝香活血化瘀膏中三七的測(cè)定取麝香活血化瘀

26、膏取麝香活血化瘀膏4片，撕去蓋面，剪成小碎片，置片，撕去蓋面，剪成小碎片，置燒杯中加入燒杯中加入25ml氯仿浸泡氯仿浸泡5分鐘，傾去氯仿液，在攪分鐘，傾去氯仿液，在攪拌下慢慢加入乙醇拌下慢慢加入乙醇75ml，靜置傾去上層液，過(guò)濾。，靜置傾去上層液，過(guò)濾。濾液蒸干，殘?jiān)D(zhuǎn)溶于乙醇中，過(guò)濾。濾液蒸干用氯濾液蒸干，殘?jiān)D(zhuǎn)溶于乙醇中，過(guò)濾。濾液蒸干用氯仿仿1ml洗滌殘?jiān)礈鞖堅(jiān)?次，棄去氯仿，轉(zhuǎn)溶于蒸餾水中，次，棄去氯仿，轉(zhuǎn)溶于蒸餾水中，過(guò)濾，濾液蒸干，轉(zhuǎn)溶于過(guò)濾，濾液蒸干，轉(zhuǎn)溶于1ml乙醇中作為供試品溶液。乙醇中作為供試品溶液。 兵含麝香酮成分的橡皮膏劑含量測(cè)定含麝香酮成分的橡皮膏劑含量測(cè)定在橡皮膏

27、的乙醚提取液中緩緩加入無(wú)水乙醇，可使提取在橡皮膏的乙醚提取液中緩緩加入無(wú)水乙醇，可使提取液中的橡膠形成絮狀沉淀，分離后，測(cè)定。液中的橡膠形成絮狀沉淀，分離后，測(cè)定。2 中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理中藥制劑各劑型樣品的預(yù)處理外用中藥制劑的預(yù)處理n巴布膏劑的預(yù)處理w親水性基質(zhì)（聚丙烯酸鈉、羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇、聚乙烯醇、明膠、甘油等）的影響w用極性溶劑將基質(zhì)和藥物與蓋襯先分離 3 3 常用定量分析方法常用定量分析方法化學(xué)分析法n適用于含量較高的成分及無(wú)機(jī)成分的測(cè)定n包括：重量分析和滴定分析n重量分析w揮發(fā)法：如水分測(cè)定w萃取法：如冰片散中冰片的含量測(cè)定w沉淀法：如苦參片中苦參總堿的含量測(cè)定3 3

28、 常用定量分析方法常用定量分析方法化學(xué)分析法化學(xué)分析法n滴定分析滴定分析w酸堿滴定法酸堿滴定法：測(cè)定生物堿、有機(jī)酸、內(nèi)酯類(lèi) w沉淀滴定法沉淀滴定法n銀量法：生物堿的氫鹵酸鹽及有機(jī)鹵化物n四苯硼鈉法：+生物堿白色沉淀白色沉淀n亞鐵氰化鉀法w配位滴定法配位滴定法（EDTA法和硫氰酸銨法）：測(cè)定鞣質(zhì)、生物堿及含Ca2+、Mg2+、Fe3+、Hg2+等礦物類(lèi)制劑的含量w氧化還原滴定法氧化還原滴定法：酚類(lèi)、糖類(lèi)及礦物藥中Fe、As等萬(wàn)氏牛黃清心丸中朱砂的含量測(cè)定萬(wàn)氏牛黃清心丸中朱砂的含量測(cè)定硫氰酸銨法硫氰酸銨法本品剪碎，取本品剪碎，取5g，精密稱(chēng)定，置，精密稱(chēng)定，置250ml凱氏燒瓶中，加硫酸凱氏燒瓶中

29、，加硫酸30ml與硝酸鉀與硝酸鉀8g，加熱俟溶液至近無(wú)色，放冷，轉(zhuǎn)入，加熱俟溶液至近無(wú)色，放冷，轉(zhuǎn)入250ml錐形瓶中，用水錐形瓶中，用水50ml分次洗滌燒瓶，洗液并入溶液中，加分次洗滌燒瓶，洗液并入溶液中，加1%高錳酸鉀溶液至顯粉紅色，兩分種內(nèi)不消失，再滴加高錳酸鉀溶液至顯粉紅色，兩分種內(nèi)不消失，再滴加2%硫酸硫酸亞鐵溶液至紅色消失后，加硫酸鐵銨指示液亞鐵溶液至紅色消失后，加硫酸鐵銨指示液2ml，用硫氰酸銨，用硫氰酸銨滴定液（滴定液（0.1mol/L）滴定。）滴定。本品按干燥品計(jì)算，每丸含朱砂以硫化汞（本品按干燥品計(jì)算，每丸含朱砂以硫化汞（HgS）計(jì)，小丸應(yīng)為）計(jì)，小丸應(yīng)為6990mg；大丸

30、應(yīng)為；大丸應(yīng)為138180mg。3 3 常用定量分析方法常用定量分析方法紫外可見(jiàn)分光光度法紫外可見(jiàn)分光光度法n對(duì)照品比照法對(duì)照品比照法對(duì)照品溶液濃度應(yīng)與供試品濃度接近對(duì)照品溶液濃度應(yīng)與供試品濃度接近（10010）n吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法A=ECLn計(jì)算分光光度法計(jì)算分光光度法w等吸收點(diǎn)法，系數(shù)倍率法，三波長(zhǎng)法，導(dǎo)數(shù)等吸收點(diǎn)法，系數(shù)倍率法，三波長(zhǎng)法，導(dǎo)數(shù)光譜法光譜法cf. 標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法3 3 常用定量分析方法常用定量分析方法紫外可見(jiàn)分光光度法，標(biāo)準(zhǔn)曲線法紫外可見(jiàn)分光光度法，標(biāo)準(zhǔn)曲線法排石顆粒中總黃酮的含量測(cè)定排石顆粒中總黃酮的含量測(cè)定 含量測(cè)定含量測(cè)定 對(duì)照品溶液的制備對(duì)照品溶液的制備 取

31、120干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品20mg，精密稱(chēng)定，置100ml量瓶中，加50%甲醇適量，振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml含無(wú)水蘆丁0.2mg）。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分別置10ml量瓶中，各加50%甲醇至5ml，加5%亞硝酸鈉溶液0.3ml，搖勻，放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液0.3ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4ml，再加50%甲醇至刻度，搖勻。以相應(yīng)的溶液為空白。照紫外-可見(jiàn)分光光度法（附錄V A），在510nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 測(cè)定法測(cè)定法 取裝量差異

32、下的本品，研細(xì)，（甲醇超聲提?。?。精密量取2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，作為空白對(duì)照。另精密量取2ml，置10ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加50%甲醇至5ml”起，依法立即測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中無(wú)水蘆丁的量，計(jì)算，即得。 本品每袋含總黃酮以無(wú)水蘆?。–27H30H16）計(jì)，不得少于0.12g。3 3 常用定量分析方法常用定量分析方法紫外可見(jiàn)分光光度法，吸收系數(shù)法紫外可見(jiàn)分光光度法，吸收系數(shù)法戊己丸中總生物堿的含量測(cè)定戊己丸中總生物堿的含量測(cè)定 含量測(cè)定含量測(cè)定 取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）0.70.9g，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加鹽酸-甲醇（1

33、:100）適量，加熱回流至提取液無(wú)色，提取液濃縮后移至25ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，照柱色譜法（附錄VI C）試驗(yàn)，精密量取5ml，置氧化鋁柱（內(nèi)徑約0.9cm，中性氧化鋁5g，濕法裝柱，用乙醇30ml預(yù)洗）上，用乙醇洗脫，收集洗脫液，置50ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置50ml量瓶中，用0.05mol/L硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻。照紫外-可見(jiàn)分光光度法（附錄V A），在345nm的波長(zhǎng)測(cè)定吸光度，按鹽酸小檗堿（C20H18Cl16NO4）的吸收系數(shù)（E1%1cm）為728計(jì)算，即得。 本品按干燥品計(jì)算，每1g含總生物堿以鹽酸小檗堿（C20H18Cl16NO4

34、）計(jì)，不得少于30mg。3 3 常用定量分析方法常用定量分析方法熒光分析法熒光分析法n基本原理基本原理n適用于：胺類(lèi)、甾體、蛋白質(zhì)、適用于：胺類(lèi)、甾體、蛋白質(zhì)、氨基酸、酶氨基酸、酶n測(cè)定方法測(cè)定方法w直接熒光法、制備熒光法、化學(xué)直接熒光法、制備熒光法、化學(xué)引導(dǎo)熒光法、熒光淬滅法、膠束引導(dǎo)熒光法、熒光淬滅法、膠束增敏熒光法增敏熒光法n優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)缺點(diǎn)：靈敏度高（靈敏度高（10101012g/ml），選擇性好，干擾因），選擇性好，干擾因素多，應(yīng)用范圍有限。素多，應(yīng)用范圍有限。S1S0激發(fā)光熒光振動(dòng)弛豫3 3 常用定量分析方法常用定量分析方法薄層色譜掃描法薄層色譜掃描法n薄層吸收掃描法薄層吸收掃描法w

35、光源：氘燈光源：氘燈(190-340nm)和和W燈燈(340-900nmw 薄層板引起的散射現(xiàn)象（散射系數(shù)SX）標(biāo)準(zhǔn)曲線（Kubella-Munk曲線）彎曲校正（曲線校直法和計(jì)算機(jī)回歸法）n薄層熒光掃描法薄層熒光掃描法w光源：汞燈光源：汞燈(250-580nm)w直線式掃描，無(wú)需曲線校直直線式掃描，無(wú)需曲線校直3 3 常用定量分析方法常用定量分析方法薄層色譜掃描法薄層色譜掃描法n系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)w檢測(cè)靈敏度檢測(cè)靈敏度w分離度分離度 R=2(d1-d2)/(W1+W2) R1.0w重復(fù)性，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差重復(fù)性，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD3.0 顯色后測(cè)定，顯色后測(cè)定，RSD5.0 3 3 常用

36、定量分析方法常用定量分析方法健脾丸中熊果酸的含量測(cè)定健脾丸中熊果酸的含量測(cè)定含量測(cè)定含量測(cè)定 取小蜜丸或重量差異項(xiàng)下的大蜜丸，剪碎，混勻，取約4g，精密稱(chēng)定，加水30ml，放置使溶散，濾過(guò)，殘?jiān)盟?0ml洗滌，在室溫干燥至呈松軟粉末狀或低溫干燥后研細(xì)，連同濾紙一并置索氏提取器內(nèi)，加乙醚適量，加熱回流提取4小時(shí)，提取液回收乙醚至干，殘?jiān)檬兔眩?060）浸泡兩次，每次10ml（浸泡約2分鐘），傾去石油醚，殘?jiān)舆m量三氯甲烷-無(wú)水乙醇（2:3）混合液使溶解，轉(zhuǎn)移至2ml量瓶?jī)?nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取熊果酸對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照

37、品溶液。照薄層色譜法（附錄VI B）試驗(yàn)，精密吸取供試品溶液4ul與6ul，對(duì)照品溶液2ul與4ul，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)已烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸（20:5:8:0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周?chē)媚z布固定，進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)：S=540nm，R=700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。 本品含山楂以熊果酸（C30H48O3）計(jì)，小蜜丸每1g不得少于0.10mg；大蜜丸每丸不得少于0.90mg。3 3 常用定量分析方法常用定量分析方法氣相色譜法氣相色譜

38、法n適用于測(cè)定適用于測(cè)定揮發(fā)油及其它揮發(fā)性組分：冰片、桉葉素、樟腦、丁香酚、揮發(fā)油及其它揮發(fā)性組分：冰片、桉葉素、樟腦、丁香酚、 龍腦等龍腦等中藥制劑含水量、含醇量中藥制劑含水量、含醇量n系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)w理論塔板數(shù)理論塔板數(shù) n5.54(tR/W1/2)2最小理論塔板數(shù)，柱長(zhǎng)，柱填充、載體性能等有影響w分離度分離度 R=2(tR1-tR2)/(W1+W2) R1.5（兩峰完全分離）w重復(fù)性，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差重復(fù)性，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD2.0 (n=5)w拖尾因子拖尾因子T=W0.05h/2d1 (d1峰極大至峰前沿之間的距離峰極大至峰前沿之間的距離) 1.05T0.953 3 常用定量

39、分析方法常用定量分析方法氣相色譜法氣相色譜法n實(shí)驗(yàn)條件的選擇實(shí)驗(yàn)條件的選擇w固定相的選擇固定相的選擇氣固色譜硅膠、石墨、化學(xué)鍵合相、高分子多孔微球等氣固色譜硅膠、石墨、化學(xué)鍵合相、高分子多孔微球等氣液色譜烴類(lèi)、硅氧烷類(lèi)、醇類(lèi)、酯類(lèi)，特殊固定液（高氣液色譜烴類(lèi)、硅氧烷類(lèi)、醇類(lèi)、酯類(lèi)，特殊固定液（高溫、手性）溫、手性）w柱溫的選擇柱溫的選擇樣品沸點(diǎn)范圍柱溫固定液用量（固定液:載體）300400 200250 15% 200300 150180 510% 100200 各組分的平均沸點(diǎn)2/3左右 1015% 氣體等低沸點(diǎn)樣品 室溫或50下 1525% 寬沸程樣品：寬沸程樣品：程序升溫法程序升溫法3

40、3 常用定量分析方法常用定量分析方法氣相色譜法氣相色譜法n實(shí)驗(yàn)條件的選擇實(shí)驗(yàn)條件的選擇w載氣的選擇載氣的選擇 H2，He：流速大，柱長(zhǎng)，熱導(dǎo)檢測(cè)器 N2：流速小，氫焰檢測(cè)器，電子捕獲檢測(cè)器 流速：2080ml/minw其它條件的選擇其它條件的選擇n進(jìn)樣方式：直接進(jìn)樣、頂空進(jìn)樣（兼有分離分析作用）進(jìn)樣方式：直接進(jìn)樣、頂空進(jìn)樣（兼有分離分析作用）n進(jìn)樣口（汽化室）溫度：進(jìn)樣口（汽化室）溫度：樣品的沸點(diǎn)或稍高于沸點(diǎn)，30/ 30/ 50+T柱T汽 50+T沸點(diǎn)n檢測(cè)室溫度：檢測(cè)室溫度：30+T柱T檢T汽3 3 常用定量分析方法常用定量分析方法氣相色譜法氣相色譜法n實(shí)驗(yàn)條件的選擇實(shí)驗(yàn)條件的選擇w其它條

41、件的選擇其它條件的選擇n進(jìn)樣時(shí)間：進(jìn)樣時(shí)間：1秒以內(nèi)n進(jìn)樣量進(jìn)樣量n理論允許最大進(jìn)樣量使下降的塔板數(shù)不超過(guò)10。n氣體0.11ml；液體0.1-1ln分流器分流進(jìn)樣，1/101/100w檢測(cè)器：檢測(cè)器：TCD, FID, NPD, ECD3 3 常用定量分析方法常用定量分析方法氣相色譜法氣相色譜法n毛細(xì)管柱毛細(xì)管柱柱長(zhǎng)柱長(zhǎng)內(nèi)徑內(nèi)徑其它毛細(xì)管柱5-60m0.25mm,0.32mm，0.53mm固定液厚度0.1-0.5um填充柱2-4m2-4mm粒徑為0.125-0.25mm3 3 常用定量分析方法常用定量分析方法氣相色譜法氣相色譜法n測(cè)定法測(cè)定法w內(nèi)標(biāo)法加校正因子內(nèi)標(biāo)法加校正因子 n求算校正因子

42、求算校正因子n待測(cè)組分含量測(cè)定待測(cè)組分含量測(cè)定w外標(biāo)法外標(biāo)法w面積歸一化法面積歸一化法w標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法%/%/RRSSSSRRsRCACAAWAWfff%SsXXCAAfCRXRXAACC%100%iiiAAC3 3 常用定量分析方法常用定量分析方法氣相色譜法氣相色譜法川貝枇杷糖漿中薄荷腦的含量測(cè)定川貝枇杷糖漿中薄荷腦的含量測(cè)定 含量測(cè)定含量測(cè)定 照氣相色譜（附錄VI E）測(cè)定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 改良聚乙二醇毛細(xì)管柱（柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.32mm，膜厚度0.25um），柱溫110；進(jìn)樣口溫度為250；檢測(cè)器溫度為250；分流比為25:1。理論板數(shù)

43、按萘峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。 校正因子測(cè)定校正因子測(cè)定 精密稱(chēng)取萘適量，加環(huán)已烷制成每1ml含15mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取薄荷腦對(duì)照品75mg，精密稱(chēng)定，置5ml量瓶中，加環(huán)已烷稀釋至刻度，搖勻。精密量取1ml，置20ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加環(huán)已烷至刻度，搖勻。吸取1ul，注入氣相色譜儀，計(jì)算校正因子。 測(cè)定法測(cè)定法 精密量取本品50ml，照揮發(fā)油測(cè)定法（附錄X D）試驗(yàn)，(加環(huán)已烷回流提取），合并環(huán)已烷液，置20ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加環(huán)已烷至刻度，搖勻。吸取1ul，注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得。 本品每1ml含薄荷腦（C10H20O）應(yīng)不得少于0.20mg。 3 3 常用定量分析方法常用定量分析方法高效液相色譜法高效液相色譜法分離效能高、分析速度快及應(yīng)用范圍廣分離效能高、分析速度快及應(yīng)用范圍廣 n適用于測(cè)定適用于測(cè)定揮