人類性染色質(zhì)小體的制備和觀察

1、實驗二人類性染色質(zhì)小體人類性染色質(zhì)小體（巴氏小體）（巴氏小體）的制備與觀察的制備與觀察一、目的一、目的l1，掌握人類，掌握人類x小體（巴氏小體）玻片標本小體（巴氏小體）玻片標本制作方法。制作方法。l2，觀察識別巴氏小體形態(tài)特征及所在部位，觀察識別巴氏小體形態(tài)特征及所在部位，鑒定個體的性別。鑒定個體的性別。二、原理二、原理l巴氏小體又稱巴氏小體又稱X小體：正常女性，位于間期細胞小體：正常女性，位于間期細胞核中，緊貼核膜內(nèi)緣，大小約核中，緊貼核膜內(nèi)緣，大小約11.5 um，呈現(xiàn)，呈現(xiàn)三角或橢圓形小體，數(shù)量為三角或橢圓形小體，數(shù)量為x染色體數(shù)減一。巴染色體數(shù)減一。巴氏小體是由于女性兩個氏小體是由于女

2、性兩個X染色體中的一個失活形染色體中的一個失活形成的。成的。l具有兩個（或以上）具有兩個（或以上）X染色體的細胞中，不活化染色體的細胞中，不活化的的X染色體所濃縮形成的緊密結(jié)構(gòu)。染色體所濃縮形成的緊密結(jié)構(gòu)。l它會依附在細胞核邊緣的核膜內(nèi)側(cè)，雖然此染色它會依附在細胞核邊緣的核膜內(nèi)側(cè)，雖然此染色體上的小部份區(qū)域能保持著活躍的狀態(tài)，但大多體上的小部份區(qū)域能保持著活躍的狀態(tài)，但大多數(shù)的基因都是不會表現(xiàn)的。只有位于性腺之細胞數(shù)的基因都是不會表現(xiàn)的。只有位于性腺之細胞內(nèi)的巴爾氏體在進行減數(shù)分裂時會再度活化。內(nèi)的巴爾氏體在進行減數(shù)分裂時會再度活化。lLyon的劑量補償學說認為：女性有兩個的劑量補償學說認為：

3、女性有兩個X染色體，染色體，但所表達的絕大部分遺傳物質(zhì)與只有但所表達的絕大部分遺傳物質(zhì)與只有1個個X染色體染色體的男性是一樣多的。的男性是一樣多的。l這是因為女性的這是因為女性的X染色體中只有染色體中只有1個保持活性，而個保持活性，而另一個是晚復制的，沒有活性。該失活的染色體另一個是晚復制的，沒有活性。該失活的染色體在形態(tài)學上呈異染色體，即在形態(tài)學上呈異染色體，即DNA螺旋壓的很緊，螺旋壓的很緊，染色深而致密，稱之為巴氏小體。染色深而致密，稱之為巴氏小體。三、實驗材料三、實驗材料l口腔粘膜細胞，毛根鞘細胞口腔粘膜細胞，毛根鞘細胞，顯微鏡，載顯微鏡，載玻片，蓋玻片，牙簽，吸管，固定液（玻片，蓋玻

4、片，牙簽，吸管，固定液（乙乙醇醇:冰醋酸冰醋酸3:1），），乙醇，二甲苯，乙醇，二甲苯，卡寶品卡寶品紅染液紅染液四、實驗步驟四、實驗步驟l1）取材）取材l口腔粘膜細胞：受檢者清水漱口數(shù)次，用口腔粘膜細胞：受檢者清水漱口數(shù)次，用潔凈牙簽從女性口腔兩側(cè)刮取粘膜，原位潔凈牙簽從女性口腔兩側(cè)刮取粘膜，原位刮刮23次，第次，第1次舍去，第次舍去，第2，3次分別涂于次分別涂于干凈載玻片上。干凈載玻片上。l發(fā)根細胞：拔取女性帶有毛囊的頭發(fā)（約發(fā)根細胞：拔取女性帶有毛囊的頭發(fā)（約2cm），置于載玻片上。），置于載玻片上。l2）固定）固定l口腔粘膜細胞加入新配置的固定液（口腔粘膜細胞加入新配置的固定液（95%乙

5、醇乙醇:冰醋酸冰醋酸3:1），固定），固定30min以上，空以上，空氣干燥。氣干燥。l2）固定）固定l毛囊細胞毛囊細胞-拔取一根毛根比較大的毛發(fā)，在一張干拔取一根毛根比較大的毛發(fā)，在一張干凈的載玻片中央滴一滴凈的載玻片中央滴一滴45%的醋酸，靜置約的醋酸，靜置約5分鐘，分鐘，待毛根稍軟后，待毛根稍軟后，用鑷子尖把外層毛囊的組織細胞用鑷子尖把外層毛囊的組織細胞輕輕刮下，棄去毛干。將細胞用解剖針在載玻片輕輕刮下，棄去毛干。將細胞用解剖針在載玻片上均勻攤平，并在空氣中晾干上均勻攤平，并在空氣中晾干。l實驗改進意見：實驗改進意見：拿起上述發(fā)根的梢部，將其上毛拿起上述發(fā)根的梢部，將其上毛囊細胞輕輕蹭于另

6、一干凈載片上即可達到轉(zhuǎn)移的囊細胞輕輕蹭于另一干凈載片上即可達到轉(zhuǎn)移的目的。目的。（若用刀片或鑷子將毛囊細胞刮下，可造（若用刀片或鑷子將毛囊細胞刮下，可造成細胞的堆積，同樣會出現(xiàn)多層細胞的現(xiàn)象。成細胞的堆積，同樣會出現(xiàn)多層細胞的現(xiàn)象。1根發(fā)根的毛囊細胞可以轉(zhuǎn)移到根發(fā)根的毛囊細胞可以轉(zhuǎn)移到3-4張載片上，以達張載片上，以達到充分利用實驗材料的目的。觀察時又可以看到到充分利用實驗材料的目的。觀察時又可以看到清晰的單層涂布細胞，便于觀察統(tǒng)計。）清晰的單層涂布細胞，便于觀察統(tǒng)計。）l3）染色、制片）染色、制片l滴加染液，室溫滴加染液，室溫10min（勿干）；（勿干）；l在在95%的酒精中分色的酒精中分色

7、1-3分鐘；分鐘；l在無水乙醇中繼續(xù)分色兩次，每次在無水乙醇中繼續(xù)分色兩次，每次1分鐘分鐘l用二甲苯透明兩次，每次約用二甲苯透明兩次，每次約3分鐘；分鐘；l加蓋玻片，壓片。加蓋玻片，壓片。l巴氏小體為女性細胞中所特有的染色體結(jié)構(gòu)，是巴氏小體為女性細胞中所特有的染色體結(jié)構(gòu)，是1條條X染染色體呈異固縮狀態(tài)所形成，各實驗室所統(tǒng)計的觀察率不盡色體呈異固縮狀態(tài)所形成，各實驗室所統(tǒng)計的觀察率不盡相同，從相同，從30一一50不等，有些實驗室中在男性的細胞不等，有些實驗室中在男性的細胞中發(fā)現(xiàn)中發(fā)現(xiàn)X小體有小體有2%的出現(xiàn)率，但小體結(jié)構(gòu)不規(guī)范、典型。的出現(xiàn)率，但小體結(jié)構(gòu)不規(guī)范、典型。l巴氏小體常位于核膜內(nèi)側(cè)。直

8、徑為巴氏小體常位于核膜內(nèi)側(cè)。直徑為1m左右，其形狀有微左右，其形狀有微凸形、三角形、卵形、短棒形和雙球形等。觀察時需注意凸形、三角形、卵形、短棒形和雙球形等。觀察時需注意巴氏小體與細胞的比例。巴氏小體與細胞的比例。 l正常女性細胞中僅可觀察到正常女性細胞中僅可觀察到1個巴氏小體，而正常男性細個巴氏小體，而正常男性細胞中無巴氏小體或僅在個別細胞中有不典型的巴氏小體存胞中無巴氏小體或僅在個別細胞中有不典型的巴氏小體存在。在。 箭頭所示為巴氏小體（女性細胞箭頭所示為巴氏小體（女性細胞左左中存在，男性細胞中存在，男性細胞右右中沒有）中沒有）六、注意事項六、注意事項l1在實驗中取材時應該注意安全；在實驗

9、中取材時應該注意安全；l2如果用毛囊細胞進行試驗，采樣前應清如果用毛囊細胞進行試驗，采樣前應清 洗頭發(fā)，因出油后拔取毛發(fā)時不易帶出毛洗頭發(fā)，因出油后拔取毛發(fā)時不易帶出毛囊細胞。囊細胞。 程序程序l取材取材：受檢者清水漱口數(shù)次，用潔凈牙簽受檢者清水漱口數(shù)次，用潔凈牙簽從女性口腔兩側(cè)刮取粘膜，原位刮從女性口腔兩側(cè)刮取粘膜，原位刮23次，次，第第1次舍去次舍去，第，第2，3次分別涂于干凈載玻片次分別涂于干凈載玻片上。上。l固定固定：口腔粘膜細胞加入新配置的固定液口腔粘膜細胞加入新配置的固定液（95%乙醇乙醇:冰醋酸冰醋酸3:1），），固定固定30min以以上，空氣干燥。上，空氣干燥。（固定液（固定液勿干勿干）l染色、