樣 本 的 采 集

1、 一、樣本的來源和種類一、樣本的來源和種類 樣本是供檢出目的微生物或其相關物質(zhì)的材樣本是供檢出目的微生物或其相關物質(zhì)的材料。所謂相關物質(zhì)是指構成目的微生物的核酸料。所謂相關物質(zhì)是指構成目的微生物的核酸脂多糖，蛋白質(zhì)以及微生物的相應特異性抗體。脂多糖，蛋白質(zhì)以及微生物的相應特異性抗體。從預防醫(yī)學微生物的角度可將微生物分為衛(wèi)生從預防醫(yī)學微生物的角度可將微生物分為衛(wèi)生指標微生物和病原微生物二大類。指標微生物和病原微生物二大類。（一）檢出衛(wèi)生指標微生物的樣本來源和種（一）檢出衛(wèi)生指標微生物的樣本來源和種類類 衛(wèi)生指標微生物是指示外環(huán)境和食品以及衛(wèi)生指標微生物是指示外環(huán)境和食品以及日用品潔凈度的微生物可

2、以是單位容積或重日用品潔凈度的微生物可以是單位容積或重量中所含微生物的總數(shù)或是以某種代表微生量中所含微生物的總數(shù)或是以某種代表微生物，它是指示受病原微生物污染情況，如大物，它是指示受病原微生物污染情況，如大腸埃希氏菌，糞鏈球菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌等，腸埃希氏菌，糞鏈球菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌等，樣本的來源是空氣、水、食品、藥品、化妝樣本的來源是空氣、水、食品、藥品、化妝品及醫(yī)院環(huán)境等。品及醫(yī)院環(huán)境等。1. 水樣本的采集及處理水樣本的采集及處理 采樣的容器水樣瓶采集前必須進行滅菌采樣的容器水樣瓶采集前必須進行滅菌并保證在運送保存過程中不受污染。并保證在運送保存過程中不受污染。 在采集自來水樣時，先用酒精燈將水

3、龍在采集自來水樣時，先用酒精燈將水龍頭燒灼消毒、然后將龍頭打開，放水頭燒灼消毒、然后將龍頭打開，放水510分，分，再采集水樣。再采集水樣。 取外環(huán)境水樣時，應選擇有代表性的水取外環(huán)境水樣時，應選擇有代表性的水源，一般應距水面源，一般應距水面1015cm深處取樣。深處取樣。采集有余氯的水樣時，應按每采集有余氯的水樣時，應按每500ml水樣水樣加入加入1.5%硫代硫酸鈉硫代硫酸鈉2ml，中和水樣中的，中和水樣中的余氯。余氯。 采水量為瓶容量的采水量為瓶容量的80%，以便在檢驗，以便在檢驗時充分震搖水樣。時充分震搖水樣。 水樣作大腸菌群檢測時，取水量為水樣作大腸菌群檢測時，取水量為350ml。水中病

4、毒檢測樣本的采集（水中病毒檢測樣本的采集（1）水中病毒數(shù)）水中病毒數(shù)103/L可直接將水樣接種細胞無需濃縮，病可直接將水樣接種細胞無需濃縮，病毒數(shù)毒數(shù)102/L樣本量為樣本量為15L，=10/L，樣本，樣本量為量為1020L，1/100L樣本量是樣本量是5001000L，（，（2）每次采）每次采2份樣本，一份及份樣本，一份及時檢測，一份低溫保存?zhèn)溆?。（時檢測，一份低溫保存?zhèn)溆?。?）如為間斷）如為間斷污染，采水樣時同時還應考慮采集水體底泥及污染，采水樣時同時還應考慮采集水體底泥及水生生物，特別是貝類樣本，因底泥及貝類中水生生物，特別是貝類樣本，因底泥及貝類中病毒可長期存在，并且濃度較高。病毒可

5、長期存在，并且濃度較高。水中病毒檢驗樣本濃縮處理原則：水中病毒檢驗樣本濃縮處理原則： a. 有較高的和穩(wěn)定的病毒回收率有較高的和穩(wěn)定的病毒回收率 b. 不受水質(zhì)限制，特別是濁度的限制不受水質(zhì)限制，特別是濁度的限制 c. 不受容量限制，可以處理大樣本量不受容量限制，可以處理大樣本量 d. 操作過程盡可能快，以免損傷病毒操作過程盡可能快，以免損傷病毒 e. 濃集應有選擇性，盡可能不濃集病毒以濃集應有選擇性，盡可能不濃集病毒以外的物質(zhì)外的物質(zhì) f. 操作方法盡可能簡單、容易、并且價廉操作方法盡可能簡單、容易、并且價廉2. 食品中細菌檢測的樣本采集食品中細菌檢測的樣本采集 食品采集是指在食品原料或成品

6、中抽取具食品采集是指在食品原料或成品中抽取具有代表性的樣品，并保證這些具有代表性的有代表性的樣品，并保證這些具有代表性的樣本在檢驗時能完全反映原來的樣本狀態(tài)樣本在檢驗時能完全反映原來的樣本狀態(tài)（在采集與運輸過程中排除外界各種干擾），（在采集與運輸過程中排除外界各種干擾），使最終檢測結果真實地反映食品本來的衛(wèi)生使最終檢測結果真實地反映食品本來的衛(wèi)生狀況，因此在作食品細菌學檢驗中，采樣必狀況，因此在作食品細菌學檢驗中，采樣必須注意以下問題：須注意以下問題：平均樣品：糧按三層（表、中、下）五點采平均樣品：糧按三層（表、中、下）五點采樣法，油抽取表層與底層油、混樣檢測。樣法，油抽取表層與底層油、混樣檢

7、測。 正常樣品與異常樣品，除采正常樣品外，正常樣品與異常樣品，除采正常樣品外，如發(fā)現(xiàn)有異常樣本時，也應采樣分別進行檢測。如發(fā)現(xiàn)有異常樣本時，也應采樣分別進行檢測。 采樣數(shù)量：一般采集中樣，即從食品的各部采樣數(shù)量：一般采集中樣，即從食品的各部分取得的混合樣品以分取得的混合樣品以200克為準。有些樣品可克為準。有些樣品可達達500克。如糧食可分三層五點，或分層隨機克。如糧食可分三層五點，或分層隨機采取不同點的樣品充分混合后取采取不同點的樣品充分混合后取500克送檢?？怂蜋z。檢樣也稱小樣以檢樣也稱小樣以25克為準?？藶闇?。 避免外源性污染，各種采樣器、樣品容器避免外源性污染，各種采樣器、樣品容器都需

8、嚴格滅菌，盡可能從未開啟的樣品中采樣。都需嚴格滅菌，盡可能從未開啟的樣品中采樣。盡量選樣清潔的空間地點，以無菌操作的方式，盡量選樣清潔的空間地點，以無菌操作的方式，開啟包裝，采集樣品裝入滅菌容器內(nèi)并將容器開啟包裝，采集樣品裝入滅菌容器內(nèi)并將容器密封。密封。 防止樣品中細菌的菌量及菌相的變化，為防止樣品中細菌的菌量及菌相的變化，為了防止樣本中細菌的變化，必須嚴格控制溫度，了防止樣本中細菌的變化，必須嚴格控制溫度，從采樣到檢驗室時間不得超過了從采樣到檢驗室時間不得超過了3小時，最適溫小時，最適溫度為度為04，如為冷凍樣品則仍需保持在冷，如為冷凍樣品則仍需保持在冷凍狀態(tài)。凍狀態(tài)。 要有明確的標簽：樣

9、品必須立即貼上標簽，要有明確的標簽：樣品必須立即貼上標簽，表明品名、來源、數(shù)量、采樣地點采樣人及采表明品名、來源、數(shù)量、采樣地點采樣人及采樣年月日地點，必要時注明采樣溫度、濕度及樣年月日地點，必要時注明采樣溫度、濕度及現(xiàn)場衛(wèi)生狀況，是否無菌操作?，F(xiàn)場衛(wèi)生狀況，是否無菌操作。國際食品微生物專門委員會（國際食品微生物專門委員會（ICMSF）提出食品采樣進行檢驗，應從統(tǒng)計學原理為提出食品采樣進行檢驗，應從統(tǒng)計學原理為基礎，來考慮對一批食品應檢測多少樣本，基礎，來考慮對一批食品應檢測多少樣本，才能具有代表性？目前一般使用的方法是每才能具有代表性？目前一般使用的方法是每批樣品中只采一個檢樣進行檢驗，該批

10、食品批樣品中只采一個檢樣進行檢驗，該批食品是否合格全由一個樣品的結果來決定。是否合格全由一個樣品的結果來決定。目前世界糧農(nóng)組織已采用目前世界糧農(nóng)組織已采用ICMSF提出的建議提出的建議作為規(guī)定，其中食品中大腸菌群數(shù)的檢驗為作為規(guī)定，其中食品中大腸菌群數(shù)的檢驗為一批食品中應采一批食品中應采5個樣進行檢驗，而沙門菌個樣進行檢驗，而沙門菌則要采則要采10個樣來綜合判斷其衛(wèi)生狀況，現(xiàn)已個樣來綜合判斷其衛(wèi)生狀況，現(xiàn)已有加拿大、以色列等國采用此法，作為該國有加拿大、以色列等國采用此法，作為該國的國家標準。的國家標準。世界糧農(nóng)組織規(guī)定的各種食品微生物的限量標準世界糧農(nóng)組織規(guī)定的各種食品微生物的限量標準（二）

11、病原微生物樣本的采集（二）病原微生物樣本的采集 1. 血液樣本的采集血液樣本的采集 （1）血液樣本中可能有的細菌）血液樣本中可能有的細菌金色葡萄球菌、鏈球菌、產(chǎn)單核李斯特菌、金色葡萄球菌、鏈球菌、產(chǎn)單核李斯特菌、炭疽桿菌，腦膜炎奈瑟菌、傷塞及副傷塞沙炭疽桿菌，腦膜炎奈瑟菌、傷塞及副傷塞沙門菌，綠膿桿菌，氣單胞菌，鼠疫耶爾森菌、門菌，綠膿桿菌，氣單胞菌，鼠疫耶爾森菌、布魯菌、鉤端螺旋體等。布魯菌、鉤端螺旋體等。（2）樣本采集及應注意事項）樣本采集及應注意事項 采血時期及次數(shù)，對血液標本的細菌培采血時期及次數(shù)，對血液標本的細菌培養(yǎng)是否能檢出病原菌的影響較大。一般情況下，養(yǎng)是否能檢出病原菌的影響較大

12、。一般情況下，多在病人發(fā)熱初期或發(fā)熱高峰時采集。原則上多在病人發(fā)熱初期或發(fā)熱高峰時采集。原則上應選擇在抗菌藥物應用之前，對已用藥而不能應選擇在抗菌藥物應用之前，對已用藥而不能中止的病人，也應在下次用藥之前采集。于用中止的病人，也應在下次用藥之前采集。于用藥前藥前24小時內(nèi)，如采集小時內(nèi)，如采集34次血液標本，其次血液標本，其檢出率可達檢出率可達90%以上。以上。 為了獲得正確而檢出率高的效果，最為了獲得正確而檢出率高的效果，最好同時采集動脈血和靜脈血，或由左右兩好同時采集動脈血和靜脈血，或由左右兩側肘靜脈同時采集。因為采集部位不同，側肘靜脈同時采集。因為采集部位不同，其血液中的菌數(shù)常可不同；同

13、時雙部位的其血液中的菌數(shù)?？刹煌?；同時雙部位的標本培養(yǎng)對于檢出菌是病原菌，或為污染標本培養(yǎng)對于檢出菌是病原菌，或為污染菌的判定有所幫助。此外，在感染病灶局菌的判定有所幫助。此外，在感染病灶局部附近的血管采集標本，也能提高檢出率。部附近的血管采集標本，也能提高檢出率。 采血部位，一般多由肘靜脈采集。采血量采血部位，一般多由肘靜脈采集。采血量一般以培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基量的一般以培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基量的1/10為宜，如此為宜，如此可使存在于血液中的補體、抗體、調(diào)理素及可使存在于血液中的補體、抗體、調(diào)理素及溶菌酶等增殖抑制因子被稀釋，使之減弱或溶菌酶等增殖抑制因子被稀釋，使之減弱或失去抑制作用。對于應用抗菌藥物中

14、的病人失去抑制作用。對于應用抗菌藥物中的病人血液，以培養(yǎng)基量的血液，以培養(yǎng)基量的1/20為宜。成人一次采為宜。成人一次采血為血為510ml，嬰幼兒為，嬰幼兒為12ml。采血部位的局部皮膚應徹底消毒，通常先采血部位的局部皮膚應徹底消毒，通常先用碘酒棉涂布消毒，干后消毒酒精（用碘酒棉涂布消毒，干后消毒酒精（70%）揩拭。操作時，應以穿刺部位為中心逐漸揩拭。操作時，應以穿刺部位為中心逐漸向外延伸消毒。向外延伸消毒。血液標本的細菌學檢驗，一般不用抗凝劑，血液標本的細菌學檢驗，一般不用抗凝劑，因為氟化鈉、因為氟化鈉、EDTA，枸櫞酸鈉可對細菌不利。，枸櫞酸鈉可對細菌不利。近年來，認為在培養(yǎng)基中加入近年來

15、，認為在培養(yǎng)基中加入0.030.05%聚茴香腦碘酸鈉（聚茴香腦碘酸鈉（sodium polyanethol sulfonate，SPS）效果較好，具有抑制血清）效果較好，具有抑制血清中殺菌物質(zhì)的作用，并且對氨基糖苷類及多肽中殺菌物質(zhì)的作用，并且對氨基糖苷類及多肽類抗生素有滅活效果，有利于細菌的檢出。肝類抗生素有滅活效果，有利于細菌的檢出。肝素抗凝尚未見對細菌有所影響。素抗凝尚未見對細菌有所影響。通常無菌采集血液后立即注入裝有液體培養(yǎng)瓶。通常無菌采集血液后立即注入裝有液體培養(yǎng)瓶。所用的培養(yǎng)基隨檢驗目的和習慣不同。目前主張，所用的培養(yǎng)基隨檢驗目的和習慣不同。目前主張，對病人已用過抗生素或碘胺類藥物

16、時，培養(yǎng)基每對病人已用過抗生素或碘胺類藥物時，培養(yǎng)基每100ml中加對氨基苯甲酸中加對氨基苯甲酸5mg以對抗磺胺類藥的以對抗磺胺類藥的作用，加入青霉素酶作用，加入青霉素酶200單位以對抗青霉素的作單位以對抗青霉素的作用。若病人已用其他抗生素治療，常用加入硫酸用。若病人已用其他抗生素治療，常用加入硫酸鎂的培養(yǎng)基，以中和鏈霉素、四環(huán)素、土霉素、鎂的培養(yǎng)基，以中和鏈霉素、四環(huán)素、土霉素、金霉素、新霉素及多粘菌素等抗菌藥物。金霉素、新霉素及多粘菌素等抗菌藥物。2. 糞便樣本的采集 （1）糞便中可能發(fā)現(xiàn)的細菌 葡萄球菌、糞鏈球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、結核分技桿菌、傷寒、副傷寒及其他沙門菌、志賀菌、變形桿菌、綠

17、膿桿菌、霍亂弧菌、副溶血性弧菌、假絲酵母菌等。 （2）樣本的采集 【操作】【操作】 選取有膿血、粘液部分的糞便選取有膿血、粘液部分的糞便23g，液體糞便則取絮狀物，盛于滅菌的廣口瓶或液體糞便則取絮狀物，盛于滅菌的廣口瓶或蠟紙盒中，及時送檢和接種蠟紙盒中，及時送檢和接種 在無法獲得糞便的情況下，可用經(jīng)無菌生在無法獲得糞便的情況下，可用經(jīng)無菌生理鹽水（或保存液）或增菌用濕潤的直腸拭理鹽水（或保存液）或增菌用濕潤的直腸拭子插入肛門子插入肛門45cm深處（小兒深處（小兒23cm），），輕輕轉動一圈，擦取直腸表面的粘液后取出，輕輕轉動一圈，擦取直腸表面的粘液后取出，盛入無菌試管或保存液中送檢。盛入無菌試

18、管或保存液中送檢。糞便標本的采集應注意下述問題：糞便標本的采集應注意下述問題： 糞便標本應盡量在病程早期和治療前糞便標本應盡量在病程早期和治療前采集。疾病急性期致病菌往往占優(yōu)勢，以采集。疾病急性期致病菌往往占優(yōu)勢，以后數(shù)日即迅速減少；一般認為，服用抗菌后數(shù)日即迅速減少；一般認為，服用抗菌藥物藥物3d，標本中病原菌即轉陰性。，標本中病原菌即轉陰性。 應采集新排出的新鮮糞便。若無法應采集新排出的新鮮糞便。若無法獲得時，可作采便管或直腸拭子采集。采獲得時，可作采便管或直腸拭子采集。采集時要注意先取有膿血、粘液、上皮碎片集時要注意先取有膿血、粘液、上皮碎片等病理成分。一般固體標本采等病理成分。一般固體

19、標本采23g，液，液體標本采體標本采13ml盛于小盒或試管中及時盛于小盒或試管中及時送檢。送檢。 標本采集后需立即送檢，拖延送檢可致標本采集后需立即送檢，拖延送檢可致病原菌數(shù)目迅速減少或雜菌過度生長，影響病病原菌數(shù)目迅速減少或雜菌過度生長，影響病菌的檢出率，不能及時送檢時，應將標本置于菌的檢出率，不能及時送檢時，應將標本置于保存液或運送培養(yǎng)基中送檢。保存液或運送培養(yǎng)基中送檢。（三）病毒樣本的采集（三）病毒樣本的采集 1. 流行性感冒病毒樣本流行性感冒病毒樣本 采集和處理采集和處理 采集時間應在病人發(fā)病后頭采集時間應在病人發(fā)病后頭3d，越早越好，雖然有的發(fā)病后越早越好，雖然有的發(fā)病后7d采集的標

20、本還采集的標本還能分離到病毒，但隨時間延長分離率大大地下能分離到病毒，但隨時間延長分離率大大地下降。較好的標本為鼻腔洗液，但病人不易接受，降。較好的標本為鼻腔洗液，但病人不易接受，尤其小孩不易協(xié)作，故常用咽喉和鼻拭子或咽尤其小孩不易協(xié)作，故常用咽喉和鼻拭子或咽喉漱液即用滅菌的棉拭子涂擦患者的咽部，喉漱液即用滅菌的棉拭子涂擦患者的咽部，有時用另一根棉拭子涂擦患者的鼻腔，然后將有時用另一根棉拭子涂擦患者的鼻腔，然后將棉拭子浸入棉拭子浸入5ml滅菌的滅菌的pH7.2的肉湯或的肉湯或Hank液液或生理鹽水中，有時可讓成人患者先咳嗽幾聲，或生理鹽水中，有時可讓成人患者先咳嗽幾聲，而后用而后用10ml漱液

21、反復含嗽咽部約漱液反復含嗽咽部約1min再吐入再吐入管中。從疑似流感死亡的病例中取樣時，應取管中。從疑似流感死亡的病例中取樣時，應取肺，氣管粘膜和血。采集的標本應馬上放冰壺肺，氣管粘膜和血。采集的標本應馬上放冰壺中，以冷的狀態(tài)送到實驗室越快越好，如中，以冷的狀態(tài)送到實驗室越快越好，如48h內(nèi)未能進行接種，標本應放低溫（最好內(nèi)未能進行接種，標本應放低溫（最好-70）以下進行保存。鼻腔或咽部洗液送到實驗室后，以下進行保存。鼻腔或咽部洗液送到實驗室后，用手將裝標本的管充分振蕩，將粘液打碎，置用手將裝標本的管充分振蕩，將粘液打碎，置4510min，待其自然沉淀，取上清液，待其自然沉淀，取上清液3ml按

22、每毫升青霉素按每毫升青霉素1000u，鏈霉素，鏈霉素1000g，混，混勻置勻置42h后就可接種。含棉拭子的標本，先后就可接種。含棉拭子的標本，先將棉拭子在管壁反復擠壓后取出，而后按上述將棉拭子在管壁反復擠壓后取出，而后按上述加以處理。器管組織標本，需先用滅菌的乳缽加以處理。器管組織標本，需先用滅菌的乳缽磨碎用生理鹽水配成磨碎用生理鹽水配成200g/L縣液，離心沉淀，縣液，離心沉淀，取取3ml上清液與上述一樣用青、鏈霉素處理之。上清液與上述一樣用青、鏈霉素處理之。2. 脊髓灰質(zhì)炎病毒樣本脊髓灰質(zhì)炎病毒樣本 （一）標本采集（一）標本采集 標本的采集應盡快進行，常在患者發(fā)病標本的采集應盡快進行，常在

23、患者發(fā)病7d內(nèi)采集，采集后的標本低溫送檢（內(nèi)采集，采集后的標本低溫送檢（4），），低溫保存（低溫保存（-25）。糞便標本是最為常用）。糞便標本是最為常用的標本。可取患者糞便（即的標本?？扇』颊呒S便（即48g），置于），置于干燥、潔凈、不漏的容器內(nèi)，保存送檢。干燥、潔凈、不漏的容器內(nèi)，保存送檢。肛拭子與咽拭子標本可放入肛拭子與咽拭子標本可放入12ml無菌營無菌營養(yǎng)液或養(yǎng)液或Hank液中送檢，保存。液中送檢，保存。 腦脊液腦脊液23ml，直接放入滅菌管內(nèi)送檢，直接放入滅菌管內(nèi)送檢，保存。保存。 尸體解剖標本采集要考慮取中樞神經(jīng)系尸體解剖標本采集要考慮取中樞神經(jīng)系統(tǒng)（特別是頸和腰部的脊髓灰質(zhì)和橋腦）

24、統(tǒng)（特別是頸和腰部的脊髓灰質(zhì)和橋腦）和降結腸標本，置于滅菌容器內(nèi)，保存送和降結腸標本，置于滅菌容器內(nèi)，保存送檢。檢。（二）標本處理（二）標本處理 糞便標本糞便標本2g加加Hank液液10ml制成制成20%懸液。懸液。3000r/min離心離心30min，取上清，取上清45ml，加，加活性炭活性炭200250mg混勻，混勻，41h后，后，3000r/min離心離心30min，取上清加抗生素，取上清加抗生素（終濃度每毫升（終濃度每毫升1000u青霉素，青霉素，1000g鏈霉鏈霉素，下稱素，下稱“雙抗雙抗”）4作用作用4h，接種肉湯培，接種肉湯培養(yǎng)。如有細菌生長，重復處理一次。處理好的養(yǎng)。如有細菌生

25、長，重復處理一次。處理好的標本標本-20保存。保存。肛拭子標本同糞便標本處理相同。肛拭子標本同糞便標本處理相同。 咽拭子標本的處理只需加抗生素作無菌咽拭子標本的處理只需加抗生素作無菌試驗陰性，即可試驗陰性，即可-20保存。保存。 尸體解剖標本尸體解剖標本1g，加入，加入5ml Hank液，液，研磨成懸液，研磨成懸液，3000r/min，離心，離心30min，取上清加雙抗（終濃度每毫升取上清加雙抗（終濃度每毫升500u 青霉素青霉素和和500g鏈霉素），鏈霉素），4過夜，離心，取上過夜，離心，取上清清-20保存。保存。3. 流行性出血熱病毒的樣本流行性出血熱病毒的樣本 (一一)樣本的采集樣本的采

26、集 1鼠肺鼠肺 將捕到的新鮮死鼠或活鼠將捕到的新鮮死鼠或活鼠(頸動頸動脈放血致死脈放血致死)，置，置35來蘇兒浸泡來蘇兒浸泡510min，用碘酒消毒背部，用碘酒消毒背部(或前胸或前胸)皮毛，無皮毛，無菌解剖取出肺臟，分成大小兩份分別編號，菌解剖取出肺臟，分成大小兩份分別編號，小份制冰凍切片作間接免疫熒光染色；大份小份制冰凍切片作間接免疫熒光染色；大份置置4冰箱或一冰箱或一20以下低溫冰箱暫時保存。以下低溫冰箱暫時保存。選擇特異性免疫熒光強陽性標本，可制成選擇特異性免疫熒光強陽性標本，可制成10懸液供分離病毒用。其他動物臟器標本制懸液供分離病毒用。其他動物臟器標本制備方法與鼠肺的相同。備方法與鼠

27、肺的相同。2病人血液病人血液 采血應在病人發(fā)病后采血應在病人發(fā)病后5d內(nèi)，愈早愈好。無菌采靜脈血內(nèi)，愈早愈好。無菌采靜脈血5ml，放冰壺內(nèi)立即送實驗室，分離血清放冰壺內(nèi)立即送實驗室，分離血清(如如將血液將血液4保存，不應超過保存，不應超過24h，將血，將血清和血塊分別凍存于一清和血塊分別凍存于一40C以下或液以下或液氮中備用。氮中備用。選雙份血清抗體檢查確診病例的第選雙份血清抗體檢查確診病例的第1份血清份血清標本標本(最好是抗體反應陰性的血清或血塊最好是抗體反應陰性的血清或血塊)作病毒分離標本之用。血清可直接用于接作病毒分離標本之用。血清可直接用于接種細胞或動物，血塊經(jīng)研磨制成種細胞或動物，血

28、塊經(jīng)研磨制成5懸液后懸液后應用。另外有采用應用。另外有采用“床邊接種床邊接種”，即采血，即采血后立即將全血接種到敏感動物或細胞，因后立即將全血接種到敏感動物或細胞，因標本新鮮，有可能提高分離率。標本新鮮，有可能提高分離率。 有人采用病人的白細胞分離病毒，獲得良有人采用病人的白細胞分離病毒，獲得良好結果。分離白細胞的方法是：用注射器先好結果。分離白細胞的方法是：用注射器先抽取肝素抽取肝素lml，用它可采病人靜脈血，用它可采病人靜脈血510ml，置試管內(nèi)混勻，再加入置試管內(nèi)混勻，再加入60gL葡聚糖葡聚糖1份于份于5份含肝素的全血中，于份含肝素的全血中，于30C靜置靜置30min后，后，將上清液離

29、心將上清液離心10min(1 500rmin)，用，用Hank液洗沉淀液洗沉淀2次，再用次，再用Eagle液稀釋白細胞到一液稀釋白細胞到一定濃度后，直接接種敏感動物或細胞培養(yǎng)。定濃度后，直接接種敏感動物或細胞培養(yǎng)。（二）樣本的處理（二）樣本的處理 1除菌除菌 鼠肺、病人血液鼠肺、病人血液(血清、血塊、血清、血塊、血細胞血細胞)要求嚴格無菌手術采取，制備懸液要求嚴格無菌手術采取，制備懸液時加含常規(guī)量抗生素防少量雜菌生長外，時加含常規(guī)量抗生素防少量雜菌生長外，一般不需其他處理。對從外環(huán)境采集的標一般不需其他處理。對從外環(huán)境采集的標本本(如螨類如螨類)或在操作中無菌條件不夠，污染或在操作中無菌條件不

30、夠，污染雜菌可能性大時，雜菌可能性大時，用含大劑量抗生素用含大劑量抗生素(100010000u或或/g/m1青霉素、鏈霉素和適量制霉菌素青霉素、鏈霉素和適量制霉菌素)的緩沖液的緩沖液處理過夜或將懸液標本經(jīng)處理過夜或將懸液標本經(jīng)10000r/min冷離冷離心心30min或經(jīng)孔徑或經(jīng)孔徑0.45/xm濾膜除菌過濾，濾膜除菌過濾，然后應用。然后應用。2研磨和制備懸液研磨和制備懸液 將選好的標本塊將選好的標本塊(如肺如肺)，稱重后轉移入乳缽，剪碎，加入玻璃砂或海稱重后轉移入乳缽，剪碎，加入玻璃砂或海砂，反復研磨，加砂，反復研磨，加9份含常規(guī)量抗生素，份含常規(guī)量抗生素，10小牛血清小牛血清(或脫脂奶或脫

31、脂奶)，pH7.4的的Eagle液，混勻液，混勻制成制成10懸液懸液(W/V)，20003000r/min離離心心1520min，取上清液供接種敏感動物或細，取上清液供接種敏感動物或細胞培養(yǎng)，如懸液不能及時應用，應分裝凍存胞培養(yǎng)，如懸液不能及時應用，應分裝凍存于一于一40以下冰箱或液氮中。以下冰箱或液氮中。損損 傷傷 菌菌 的的 恢恢 復復 國際上較公認的一些標準方法，使損傷菌國際上較公認的一些標準方法，使損傷菌得以恢復，這些方法如下：得以恢復，這些方法如下： (1)副溶血弧菌的檢測：用副溶血弧菌的檢測：用3NaCl蛋白胨蛋白胨水接種樣品，于水接種樣品，于35培養(yǎng)培養(yǎng)2h進行前增菌。進行前增菌。 (2)耶爾森氏菌屬的檢測：在耶爾森氏菌屬的檢測：在4培養(yǎng)以前，培養(yǎng)以前，先在先在25培養(yǎng)培養(yǎng)4h進行前增菌。進行前增菌。(3)彎曲桿菌的檢測：將樣品先培養(yǎng)于添彎曲桿菌的檢測：將樣品先培養(yǎng)于添加有琥珀酸鈉加有琥珀酸鈉(0.3)，胱氨酸，胱氨酸HCl(0.01)和抗生素和抗生素(如如CAMPYBAP和和CAMPY THl0培養(yǎng)基培