磷酸甘油氧化酶法測(cè)定血清甘油三酯-文檔資料

1、1實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)四 磷酸甘油氧化酶法測(cè)定血清磷酸甘油氧化酶法測(cè)定血清甘油三酯甘油三酯臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室2一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康膌掌握：掌握：磷酸甘油氧化酶法測(cè)定血清甘油三酯的基本原理。l熟悉：熟悉：磷酸甘油氧化酶法測(cè)定血清甘油三酯的基本操作。l了解：了解：血清甘油三酯測(cè)定對(duì)于家族性脂類(lèi)代謝紊亂等疾病診斷的臨床意義。3二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 血清中甘油三酯血清中甘油三酯(TG)(TG)經(jīng)經(jīng)脂蛋白酶脂蛋白酶(LPL)(LPL)作用，作用，可水解為甘油和游離脂肪酸，甘油在可水解為甘油和游離脂肪酸，甘油在ATPATP和和甘油激甘油激酶酶的作用下生成的作用下生成3-3-磷酸甘油，再經(jīng)磷

2、酸甘油氧化磷酸甘油，再經(jīng)磷酸甘油氧化酶作用生成磷酸二羥丙酮和酶作用生成磷酸二羥丙酮和H H2 2O O2 2，H H2 2O O2 2與與4-APP4-APP和和 ESPAS 在在過(guò)氧化物酶過(guò)氧化物酶作用下，生成作用下，生成紅色醌類(lèi)化合紅色醌類(lèi)化合物物，其顯色程度與，其顯色程度與TGTG的濃度成正比。的濃度成正比。4甘油三酯甘油三酯過(guò)氧化物酶過(guò)氧化物酶PODATPADP甘油激酶甘油激酶GKLPL甘油甘油+酯肪酸酯肪酸3-磷酸甘油磷酸甘油磷酸甘油氧化酶磷酸甘油氧化酶GPO磷酸二羥丙酮磷酸二羥丙酮+H2O24-氨基安替比林（氨基安替比林（4-AAP）對(duì)氯酚對(duì)氯酚/ESPAS醌亞胺染料醌亞胺染料5三

3、、試劑三、試劑l1. 酶試劑：酶試劑：GOODs緩沖液（緩沖液（pH7.2） 30mmol/L甘油激酶甘油激酶 1KU/L脂蛋白酯酶脂蛋白酯酶 3KU/L甘油磷酸氧化酶甘油磷酸氧化酶 2KU/L過(guò)氧化物酶過(guò)氧化物酶 2KU/LATP 0.5mmol/L4-AAP 0.3mmol/LESPAS 0.2mmol/L穩(wěn)定劑穩(wěn)定劑 適量適量l2. 標(biāo)準(zhǔn)液：標(biāo)準(zhǔn)液：甘油三酯甘油三酯 2.26 mmol/L6混勻，混勻， 37 37水浴水浴5min5min后，在波長(zhǎng)后，在波長(zhǎng)546nm546nm處用處用BB管調(diào)零，測(cè)定各管吸光度值。管調(diào)零，測(cè)定各管吸光度值。加入物加入物（L）空白管空白管（B）標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)管

4、測(cè)定管測(cè)定管SU1U2血清血清1515DDW15標(biāo)準(zhǔn)液標(biāo)準(zhǔn)液 15工作液工作液 1500150015001500四、實(shí)驗(yàn)操作四、實(shí)驗(yàn)操作7五、結(jié)果計(jì)算五、結(jié)果計(jì)算 TG(mmol/L) TG(mmol/L)U U/ /S SCsCs（2.26 mmol/L） l參考范圍：血清參考范圍：血清TG:0.565TG:0.5651.695 mmol1.695 mmol/L8六、注意事項(xiàng)l1. 本法使用的酶試劑在本法使用的酶試劑在4避光保存，至少可穩(wěn)定避光保存，至少可穩(wěn)定3-7天，出現(xiàn)紅色時(shí)不可再用，試劑空白的吸光度天，出現(xiàn)紅色時(shí)不可再用，試劑空白的吸光度應(yīng)應(yīng)0.05。l2. 血清要及時(shí)測(cè)定，血清要及時(shí)

5、測(cè)定， 4存放不超過(guò)存放不超過(guò)3天，避免天，避免TG水解釋放出甘油。水解釋放出甘油。l3. 本法線(xiàn)性上限為本法線(xiàn)性上限為11.3mmol/L，若所測(cè)，若所測(cè)TG超過(guò)了超過(guò)了11.0mmol/L, 則可用生理鹽水稀釋后再測(cè)。則可用生理鹽水稀釋后再測(cè)。9七、方法學(xué)評(píng)價(jià)1. 本法是一步終止法，簡(jiǎn)便、快速、微量且試劑較本法是一步終止法，簡(jiǎn)便、快速、微量且試劑較穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，適用于手工和自動(dòng)化測(cè)定。穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，適用于手工和自動(dòng)化測(cè)定。2.不足：所測(cè)不足：所測(cè)TG值包括了血清中游離的甘油。于值包括了血清中游離的甘油。于4h內(nèi)立即檢測(cè)，若放置過(guò)久會(huì)使結(jié)果偏高。內(nèi)立即檢測(cè)，若放置過(guò)久會(huì)使結(jié)果偏高。103.為了除

6、去游離甘油的干擾，常用下面兩種方法：為了除去游離甘油的干擾，常用下面兩種方法：1）外空白法）外空白法:使用不含LPL的酶試劑測(cè)定FG作空白值，但此法需要雙份測(cè)定，成本加倍。2）內(nèi)空白法：）內(nèi)空白法：將酶試劑分成2部分：LPL和4-AAP組成試劑II，其余試劑為試劑I。血清先加試劑I，37溫育后，因無(wú)LPL存在，TG不被水解，F(xiàn)G在GK和GPO的作用下反應(yīng)生成H2O2，但因不含4-AAP，不能完成顯色反應(yīng)，故可除去FG的干擾；再加試劑II，即可測(cè)出TG水解生成的甘油。該法增加了操作步驟，但不增加成本。11八、臨床意義lTG 增高增高 常見(jiàn)于動(dòng)脈粥樣硬化、原發(fā)性高脂血癥常見(jiàn)于動(dòng)脈粥樣硬化、原發(fā)性高脂血癥 ( 如家如家族性高膽固醇血癥、家族性族性高膽固醇血癥、家族性 ApoB 缺陷癥、多源缺陷癥、多源性高膽固醇血癥、混合性高脂蛋白血癥等性高膽固醇血癥、混合性高脂蛋白血癥等 ) 、糖、糖尿病、腎病綜合征、總膽管阻塞、甲狀腺功能減尿病、腎病綜合征、總膽管阻塞、甲狀腺功能減退、肥大性骨關(guān)節(jié)炎、老年性白內(nèi)障和牛皮癬。退、肥大性骨關(guān)節(jié)炎、老年性白內(nèi)障和牛皮癬。 lTG 降低降低 常見(jiàn)于低脂蛋白血癥、貧血、敗血癥、甲狀常見(jiàn)于低脂蛋白血癥、貧血、敗血癥、甲狀腺功能亢進(jìn)、肝