小鼠免疫球蛋白G1IgG1試劑盒使用方法

1、小鼠免疫球蛋白 G1(lgG1)試劑盒使用方法檢測(cè)范圍：1.5 jjg/ml -40/ml使用目的：本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中免疫球蛋白G1(IgG1)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠免疫球蛋白G1(IgG1)水平。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被抗原的微孔中依次加入免疫球蛋白G1(IgG1)，再與 HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色， 并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。 顏色的深淺和樣品中 的免疫球蛋白 G1(IgG1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450

2、nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值)，通過(guò)標(biāo) 準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠免疫球蛋白G1(IgG1)濃度。試劑盒組成130 倍濃縮洗滌液20mlX1 瓶7終止液6mlX1 瓶2酶標(biāo)試劑6mlX1 瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(80dg/ml)0.5mlX1 瓶3酶標(biāo)包被板12 孔X8 條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5mlX1 瓶4樣品稀釋液6mlX1 瓶10說(shuō)明書(shū)1 份5顯色劑 A 液6mlX1 瓶11圭寸板膜p 張6顯色劑 B 液6mlX1/瓶12密封袋1 個(gè)標(biāo)本要求1 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能 馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于 -20C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測(cè)含 NaN3 的

3、樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋： 本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。40dg/ml5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150d的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150d標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液20dg/ml4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150d的 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150d標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液10dg/ml3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150d的 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150d標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液5dg/ml2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150d的 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150d標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.5dg/ml1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150d的 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150d標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、

4、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50 山,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40 山,然后再加待測(cè)樣品 10d(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。96T3.溫育：用封板膜封板后置 37C溫育 30 分鐘。4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 504，空白孔除外。7.溫育：操作同 3。8.洗滌：操作同 5。9.顯色：每孔先加入顯色劑 A504，再加入顯色劑 B504，輕輕震蕩混勻，3

5、7C避光顯色 10 分鐘.10.終止：每孔加終止液 504,1終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（ OD 值）。測(cè)定應(yīng)在加終止 液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié)：準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式， 將樣品的 OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)， 即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本0D 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 0D 值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（ n 倍）后再測(cè)定，計(jì) 算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（XnX5）。5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，