生物《月季的花藥培養(yǎng)》課件(新人教版選修)

1、月季的花藥培養(yǎng)月季的花藥培養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí)基礎(chǔ)知識(shí)： （一）、被子植物的花粉發(fā)育（一）、被子植物的花粉發(fā)育 （二）、產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑（二）、產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑 （三）、影響花藥培養(yǎng)的因素（三）、影響花藥培養(yǎng)的因素被子植物的花粉發(fā)育被子植物的花粉發(fā)育雄蕊雄蕊：花絲花絲花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉粒花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉?；ǚ凼切℃咦幽讣?xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的，因此，花花粉是小孢子母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細(xì)胞。粉是單倍體的生殖細(xì)胞?；ǚ鄣陌l(fā)育要經(jīng)歷：四分體時(shí)期、單核期、雙核期花粉的發(fā)育要經(jīng)歷：四分體時(shí)期、單核期、雙核期注意注意：二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含

2、花粉管細(xì)胞核和二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核。（精子在花粉管中形成）生殖細(xì)胞核。（精子在花粉管中形成）三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細(xì)胞三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細(xì)胞進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子，這樣的花粉在成熟進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子，這樣的花粉在成熟時(shí)，含有一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核和兩個(gè)精子。時(shí)，含有一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核和兩個(gè)精子。兩個(gè)精子和一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核的基因型相同。兩個(gè)精子和一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核的基因型相同。1花粉母細(xì)胞花粉母細(xì)胞4個(gè)小孢子個(gè)小孢子減分減分有分有分4個(gè)花粉管細(xì)胞核個(gè)花粉管細(xì)胞核4個(gè)生殖細(xì)胞核個(gè)生殖細(xì)胞核有分有分8個(gè)精子個(gè)精子產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑

3、產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑花粉花粉花粉花粉胚狀體胚狀體愈傷組織愈傷組織從芽從芽從芽從芽生根生根移栽移栽脫分化脫分化分化分化再分再分化化誘導(dǎo)誘導(dǎo)人工種子又稱人造種子、合成種子或無(wú)性種子，又稱人造種子、合成種子或無(wú)性種子，就是將組織培養(yǎng)所產(chǎn)生的就是將組織培養(yǎng)所產(chǎn)生的體細(xì)胞胚、體細(xì)胞胚、不定芽、頂芽、腋芽或小鱗莖等繁不定芽、頂芽、腋芽或小鱗莖等繁殖體殖體，包裹在能提供營(yíng)養(yǎng)的膠囊，包裹在能提供營(yíng)養(yǎng)的膠囊（人造胚乳人造胚乳）里，再在外面包上一）里，再在外面包上一層具有保護(hù)功能和防止機(jī)械損傷的層具有保護(hù)功能和防止機(jī)械損傷的外膜（外膜（人造種皮人造種皮），造成一種類似），造成一種類似種子的結(jié)構(gòu)，能在一定的條件下

4、萌種子的結(jié)構(gòu)，能在一定的條件下萌發(fā)生長(zhǎng)，形成完整植株。發(fā)生長(zhǎng)，形成完整植株。影響花藥培養(yǎng)的因素影響花藥培養(yǎng)的因素一、材料的選擇：一、材料的選擇： 花期早期時(shí)的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花花期早期時(shí)的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉植株。一般，月季的花藥培養(yǎng)時(shí)間選在五月初粉植株。一般，月季的花藥培養(yǎng)時(shí)間選在五月初到五月中旬，即月季的初花期。到五月中旬，即月季的初花期。 選擇合適的花粉發(fā)育時(shí)期也是提高誘導(dǎo)成選擇合適的花粉發(fā)育時(shí)期也是提高誘導(dǎo)成功率的重要因素。一般來(lái)說，在單核期，細(xì)胞核功率的重要因素。一般來(lái)說，在單核期，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期，花藥培養(yǎng)成功率最由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期，花藥培養(yǎng)成功率最

5、高。高。 為了挑選到單核期的花藥，通常選擇完為了挑選到單核期的花藥，通常選擇完全未開放的花蕾。全未開放的花蕾。 培養(yǎng)基的組成培養(yǎng)基的組成小麥中為小麥中為N6，馬鈴薯、月季中為，馬鈴薯、月季中為MS，油菜，油菜中為中為B5培養(yǎng)基培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作一、材料的選取二、材料的消毒三、接種和培養(yǎng)（一）材料的選取（一）材料的選取 選擇花藥時(shí)，一般通過鏡檢來(lái)確定其選擇花藥時(shí)，一般通過鏡檢來(lái)確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。 最常用的方法有最常用的方法有醋酸洋紅法醋酸洋紅法。但是，。但是，某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色，需采用某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色，需采用焙花青焙花青-

6、鉻礬法鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成染成藍(lán)黑色藍(lán)黑色。（二）材料的消毒（二）材料的消毒1、花蕾用、花蕾用V/V為為70%的酒精的酒精浸泡浸泡30秒秒2、無(wú)菌水清洗、無(wú)菌水清洗3、無(wú)菌吸水紙吸干花蕾表面的水分、無(wú)菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4、放入、放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞的氯化汞溶液中溶液中24分鐘（也可分鐘（也可質(zhì)量分?jǐn)?shù)為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液鈣溶液或飽和漂白粉溶液）5、無(wú)菌水沖洗、無(wú)菌水沖洗35次次 用于培養(yǎng)花藥，實(shí)際上多數(shù)未熟，由用于培養(yǎng)花藥，實(shí)際上多數(shù)未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護(hù)，于它的外面有花萼、花瓣

7、或穎片保護(hù)，通常處于無(wú)菌狀態(tài)，所以只要將整個(gè)花通常處于無(wú)菌狀態(tài)，所以只要將整個(gè)花蕾或幼穗消毒即可。蕾或幼穗消毒即可。（三）接種和培養(yǎng)（三）接種和培養(yǎng) 滅菌后花蕾，要在無(wú)菌條件下除去萼片和滅菌后花蕾，要在無(wú)菌條件下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。在剝離花花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。在剝離花藥時(shí)，要盡量不損傷花藥（否則接種后，容易從藥時(shí)，要盡量不損傷花藥（否則接種后，容易從受傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織），同時(shí)還要徹受傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織），同時(shí)還要徹底去除花絲，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷底去除花絲，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。組織或胚狀體的形成。

8、通常每瓶接種花藥通常每瓶接種花藥7-10個(gè)，溫度控制在個(gè)，溫度控制在25左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。光照。 一般經(jīng)過一般經(jīng)過20-30天培養(yǎng)后，會(huì)發(fā)現(xiàn)花藥開天培養(yǎng)后，會(huì)發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體。將愈傷組織裂，長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體。將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株。生植株。 如果花藥開裂釋放出胚狀體，如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個(gè)花藥內(nèi)就會(huì)產(chǎn)生大量幼小植則一個(gè)花藥內(nèi)就會(huì)產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，

9、分別移植到新的培養(yǎng)基植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開。上，否則這些植株將很難分開。 在花藥培養(yǎng)中，特別是通過在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，常常會(huì)愈傷組織形成的花粉植株，常常會(huì)出現(xiàn)染色體倍性的變化。（主要原出現(xiàn)染色體倍性的變化。（主要原因是因是營(yíng)養(yǎng)核和生殖核融合營(yíng)養(yǎng)核和生殖核融合造成的。）造成的。）植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同點(diǎn)植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同點(diǎn)項(xiàng)目項(xiàng)目相同點(diǎn)相同點(diǎn)不同點(diǎn)不同點(diǎn)植物組織培養(yǎng)技植物組織培養(yǎng)技術(shù)術(shù)離體的植物組織離體的植物組織經(jīng)脫分化形成愈經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再分化傷組織，再分化成叢芽，誘導(dǎo)出成叢芽，誘導(dǎo)出根，然后進(jìn)行移根，然后進(jìn)行移栽。栽。外植體為體細(xì)胞，外植體為體細(xì)胞，染色體數(shù)無(wú)需加染