國(guó)自然基金標(biāo)書(shū)模板

1、同行評(píng)議組別生理、病理及病理生理學(xué)工程編號(hào)Y205695浙江省自然科學(xué)基金申請(qǐng)書(shū)申報(bào)類別：一般工程工程名稱：促紅細(xì)胞生成素受體在心肌缺血再灌注過(guò)程中的表達(dá)及功能申請(qǐng)者：葉挺梅電話：依托單位：麗水學(xué)院通信地址：麗水市麗水學(xué)院科研處郵政編碼：323000E-mail:申報(bào)日期：2005-5-30浙江省自然科學(xué)基金委員會(huì)二OO五年制根本信息申請(qǐng)者信息姓名葉挺梅性別女出生日期1954年04月01日最終學(xué)位其他獲學(xué)位年份職稱副教授主要研究領(lǐng)域心血管呼吸生理與藥理E-mail個(gè)人網(wǎng)頁(yè)依托單位麗水學(xué)院證件類型身份證證件號(hào)申請(qǐng)者是否近三年調(diào)入在浙單位工作否調(diào)入時(shí)間申請(qǐng)者曾主持的浙江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)U編號(hào)：

2、申請(qǐng)者正在主持的國(guó)家和省部資助經(jīng)費(fèi)在20萬(wàn)兀及以上的研究工程名稱、來(lái)源和研究期限:項(xiàng)目基本信息工程名稱促紅細(xì)胞生成素受體在心肌缺血再灌注過(guò)程中的表達(dá)及功能申報(bào)類別一般工程研究屬性前瞻性應(yīng)用根底研究同行評(píng)議組別醫(yī)藥科學(xué)/生理、病理及病理生理學(xué)依托基地名稱預(yù)計(jì)研究年限2006年01月2021年12月總經(jīng)費(fèi)預(yù)算8.0萬(wàn)元申請(qǐng)經(jīng)費(fèi)8.0萬(wàn)元工程研究目標(biāo)、內(nèi)容和意義簡(jiǎn)介限400字研究缺血性心臟病時(shí)EPO受體的表達(dá)和功能.探討心肌細(xì)胞表達(dá)EPO受體的調(diào)控機(jī)制,缺血再灌注損傷時(shí)心肌組織EPO受體表達(dá)分布和時(shí)間特征,以及外源性EPO的心臟保護(hù)作用與心肌EPO受體功能的關(guān)系.同時(shí),觀察外源性EPO治療對(duì)于心臟E

3、PO受體表達(dá)情況的影響等.通過(guò)研究以明確缺血性心臟病時(shí)是否存在EPO/EPO受體的內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制和外源性EPO治療的最正確時(shí)間窗,為臨床使用EPO治療急性心肌缺血性損傷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).關(guān)鍵詞不超過(guò)4個(gè)心肌：促紅細(xì)胞生成素：受體：缺血再灌注同行評(píng)議分組說(shuō)明疾病的生理、病理及病理生理學(xué)根底重點(diǎn)資助方向重要疾病機(jī)理及防治研究工程組主要成員編號(hào)姓名出生日期性別職稱學(xué)位單位名稱工程分工每年工作時(shí)間1葉挺梅1954年04月01日女副教授其他麗水學(xué)院負(fù)責(zé)人62任少華1953.08.15男主任醫(yī)師學(xué)士麗水市中央醫(yī)院臨床試驗(yàn)33秦麗君1953.06.01女主治醫(yī)師其他麗水市中央醫(yī)院分析試驗(yàn)34陳偉偉1958.03

4、.06男主任醫(yī)師碩士麗水市中央醫(yī)院臨床試驗(yàn)45郭偉1973.04.06女講師碩士麗水學(xué)院根底實(shí)驗(yàn)86陳楠1975.04.06女助教學(xué)士麗水學(xué)院根底實(shí)驗(yàn)107總?cè)藬?shù)高級(jí)中級(jí)初級(jí)博士后博士生碩士生參加單位數(shù)63210001說(shuō)明：1.個(gè)人介紹局部申請(qǐng)者必須填寫,其他人員可以不填寫；2,高級(jí)、中級(jí)、初級(jí)、博士后、博士生、碩士生及參加單位數(shù)由申請(qǐng)者負(fù)責(zé)填報(bào),總?cè)藬?shù)自動(dòng)生成;3.第一人必須是申請(qǐng)者,信息從前面自動(dòng)讀入,但每年工作時(shí)間必須手工錄入°1文檔來(lái)源為:從網(wǎng)絡(luò)收集整理word版本可編輯.個(gè)人介紹：葉挺梅：大學(xué)本科,副教授,浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)院兼職碩導(dǎo),浙江省生理科學(xué)理事.主要從事醫(yī)學(xué)生理學(xué)、

5、生物學(xué)等生命科學(xué)研究.積累了豐富經(jīng)驗(yàn),己發(fā)表論文及教材共30余篇本,其主要發(fā)表學(xué)術(shù)論文有：1、葉挺梅、任少華、秦麗君,鈍性心肌挫傷臨床診斷的研究進(jìn)展,醫(yī)學(xué)綜述雜志,2005年5月第5期.2、葉挺梅,麗水市社區(qū)居民心腦血管病危險(xiǎn)因素調(diào)查,浙江預(yù)防醫(yī)學(xué),2004年第16卷第7期.3、葉挺梅、葉治國(guó)、高琴、夏強(qiáng),線粒體SLO1通道激活引起的心肌保護(hù)作用涉及線粒體滲透性轉(zhuǎn)換機(jī)制,浙江大學(xué)學(xué)報(bào)自然科學(xué)版2005年第6期.4、葉挺梅、朱滿蓮,消化系統(tǒng)惡性腫瘤病人及家屬心理健康狀況調(diào)查,中國(guó)健康心理學(xué)雜志,2005年第13卷第3期.5、葉挺梅,關(guān)于慢性阻塞性肺部疾病急性惡化的臨床研究進(jìn)展,醫(yī)學(xué)綜述雜志,20

6、00年第6卷第6期.6、葉挺梅,生理學(xué)多媒體仿真教學(xué)的改革與探討,麗水學(xué)院學(xué)報(bào),2004年第26卷第7期.7、葉挺梅,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者在騎車和水中奔跑時(shí)的心肺反響,國(guó)外醫(yī)學(xué),1994年第4期.8、葉挺梅,副主編,生理學(xué)綱要及試題,中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社出版,2002年1月.9、葉挺梅,主編,人體生理學(xué)目標(biāo)檢測(cè),人民中國(guó)出版社出版,1998年12月10、葉挺梅,主編,生理學(xué)學(xué)習(xí)輔導(dǎo),中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社出版,1994年12月.主要主持的工程：1、菊米對(duì)心血管作用的有效成份及其提取技術(shù)研究,工程編號(hào)：2004C33104,浙江省科技廳工程,資助15萬(wàn)元,研究起止年月：2004年1月至2005年12月.

7、2、混胺鈾類配合物的合成及其抗腫瘤作用的研究,工程編號(hào)：,浙江省教育廳工程.3、欠興旺地區(qū)中老年身心健康研究,工程編號(hào)：KY04003,麗水學(xué)院校級(jí)工程,立項(xiàng)時(shí)間：2004年3月.學(xué)術(shù)獎(jiǎng)勵(lì)：1、獲第十二屆2001-2002年浙江省自然科學(xué)優(yōu)秀論文二等獎(jiǎng)證書(shū)編號(hào)：02、獲麗水學(xué)院教師現(xiàn)代教學(xué)技能比賽三等獎(jiǎng),證書(shū)編號(hào)：2003145任少華：主任醫(yī)師,從事心血管、呼吸方面研究,現(xiàn)任麗水中央醫(yī)院呼吸科主任醫(yī)師、科教科副科長(zhǎng).是國(guó)家級(jí)刊物?國(guó)外醫(yī)學(xué)呼吸分冊(cè)?第三屆編委會(huì)和?國(guó)外醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)分冊(cè)?第二屆編委會(huì)特邀編輯.在心血管和呼吸專業(yè)領(lǐng)域具有較高的學(xué)術(shù)造詣.率先開(kāi)展了“纖維支氣管鏡替代胸腔鏡檢查和治療“纖

8、維支氣管鏡引導(dǎo)下經(jīng)鼻氣管插管,“經(jīng)纖維支氣管鏡選擇性支氣管造影,"根據(jù)支氣管肺泡灌洗液內(nèi)毒素水平快速診斷革蘭氏陰性菌肺炎和“限制性高碳酸血癥機(jī)械通氣治療和“胸管負(fù)壓吸引引流治療巨型肺大皰該技術(shù)被北平醫(yī)藥信息中央收編于?中國(guó)疑難病求醫(yī)問(wèn)藥信息庫(kù)?等診療新技術(shù).善于學(xué)習(xí)引用國(guó)際先進(jìn)醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù),應(yīng)用于臨床實(shí)踐,積極總結(jié)臨床經(jīng)驗(yàn)和引進(jìn)先進(jìn)醫(yī)學(xué)知識(shí),在?中華結(jié)核和呼吸雜志?、美國(guó)?Chest?和英國(guó)?Thorax?等大型權(quán)威雜志發(fā)表臨床論文15篇,其中多篇被?BiologicalAbstract?,CurrentScience?等國(guó)際索引文獻(xiàn)收錄.屢次獲省自然科學(xué)論文獎(jiǎng).在國(guó)家級(jí)刊物發(fā)表綜述

9、文章50余篇,文摘200余篇.公開(kāi)發(fā)表文字40余萬(wàn),連續(xù)三屆榮獲“世界科技譯報(bào)好譯者獎(jiǎng).麗水市第三批有突出奉獻(xiàn)中青年專業(yè)技術(shù)人才.申請(qǐng)經(jīng)費(fèi)預(yù)算8.0萬(wàn)元方案開(kāi)支工程名稱計(jì)算根據(jù)及理由金額萬(wàn)元1.信息費(fèi)資料費(fèi)文印費(fèi)上網(wǎng)信息費(fèi)論文版面費(fèi)0.52.專題學(xué)術(shù)活動(dòng)費(fèi)國(guó)際國(guó)內(nèi)學(xué)術(shù)會(huì)議差旅會(huì)務(wù)費(fèi)國(guó)內(nèi)外期刊論文版面費(fèi)0.53.儀器和設(shè)備購(gòu)置費(fèi)實(shí)驗(yàn)等相關(guān)儀器如顯微鏡電子天平0.54.能源材料費(fèi)公辦耗材費(fèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)藥品等5.55.方案治理費(fèi)按學(xué)校規(guī)定提取0.46.人員費(fèi)加班等補(bǔ)助費(fèi)0.6注：開(kāi)支范圍和標(biāo)準(zhǔn)參見(jiàn)?浙江省省級(jí)科技工程經(jīng)費(fèi)治理暫行方法?浙財(cái)教字200220號(hào).申請(qǐng)者承諾：我保證：(1)申請(qǐng)書(shū)內(nèi)容是真實(shí)

10、的；(2)恪守科學(xué)道德,倫理道德的根本原那么；(3)工程組成員知曉申請(qǐng)書(shū)內(nèi)容,并自愿參與研究工作；(4)已如實(shí)填報(bào)申請(qǐng)者正在主持的國(guó)家和省部資助經(jīng)費(fèi)在20萬(wàn)元及以上的研究工程名稱、來(lái)源和研究期限；(5)如果獲得資助,我將履行工程負(fù)責(zé)人責(zé)任,嚴(yán)格遵守浙江省自然科學(xué)基金委員會(huì)的有關(guān)規(guī)定,切實(shí)保證研究工作時(shí)間,認(rèn)真開(kāi)展工作,按時(shí)報(bào)送有關(guān)材料.假設(shè)填報(bào)失實(shí)或違反規(guī)定,本人將承當(dāng)全部責(zé)任.簽字：日期：工程依托單位承諾：已按規(guī)定對(duì)申請(qǐng)人的資格和申請(qǐng)書(shū)內(nèi)容進(jìn)行了審核.申請(qǐng)工程如獲資助,我單位保證對(duì)方案實(shí)施所需要的人力、物力和工作時(shí)間等條件給予保證,嚴(yán)格遵守浙江省自然科學(xué)基金委員會(huì)有關(guān)規(guī)定,催促工程組遵守科學(xué)

11、道德和倫理道德的根本原那么,催促工程負(fù)責(zé)人和本單位工程治理部門根據(jù)規(guī)定及時(shí)報(bào)送有關(guān)材料.依托單位公章日期促紅細(xì)胞生成素受體在心肌缺血再耀注過(guò)程中的表達(dá)及功能1、工程研究意義隨著溶栓和急診介入治療的廣泛開(kāi)展,心肌梗死患者短期和長(zhǎng)期的生存率得到顯著提升,但仍有相當(dāng)局部存活的患者隨后發(fā)生進(jìn)行性心力衰竭.缺血/再濯注導(dǎo)致的心肌損傷是目前心機(jī)梗死治療中有待解決的關(guān)鍵問(wèn)題,有文獻(xiàn)報(bào)道,心肌缺血/再灌注過(guò)程中凋亡的發(fā)生是導(dǎo)致心肌損傷的重要機(jī)制之一.凋亡是細(xì)胞程序性死亡,因此,可以通過(guò)早期干預(yù)減少凋亡的發(fā)生,從而降低心肌在缺血復(fù)濯過(guò)程中的損傷.在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)證實(shí),應(yīng)用抗凋亡藥物,細(xì)胞因子或采用基因治療可減輕

12、心肌缺H1/再港注損傷.但目前某些抗凋亡方法尚不能應(yīng)用于臨床,而已有抗心肌再灘注損傷的臨床試驗(yàn)未見(jiàn)顯著的心肌保護(hù)作用.因此,有必要探索一種既可用于臨床,又具有顯著心肌保護(hù)作用的治療方法,作為心肌梗死再灌注治療的輔助治療,以減輕心肌損傷.促紅細(xì)胞生成素(Erythropoietin,EPO)是第一個(gè)被克隆的造血生長(zhǎng)因子,以往主要用于促進(jìn)紅細(xì)胞生成以糾正貧血,在臨床上已被廣泛使用十余年.其造血活性的主要機(jī)制為抑制晚紅系祖細(xì)胞凋亡而非直接刺激細(xì)胞生成.隨著EPO受體在腦、肝臟、子宮等器官及實(shí)體腫瘤組織的發(fā)現(xiàn),EPO的髓外作用日益受到重視近十年的研究主要集中于EPO的腦保護(hù)作用,EPOEPO受體通過(guò)抗

13、凋亡、抗炎、抗氧化等機(jī)制,可預(yù)防或減輕神經(jīng)系統(tǒng)缺血/再灌注損傷.一項(xiàng)已完成的EPO對(duì)缺血性中風(fēng)病人平安性和療效的隨機(jī)雙盲臨床試驗(yàn),對(duì)于中風(fēng)8小時(shí)內(nèi)的患者,連續(xù)3天經(jīng)靜脈使用重組EPO(recombinantEPO、rEPO),觀察30天顯示rhEPO對(duì)于急性缺血性中風(fēng)患者能有效縮小堵塞面積和改善臨床表現(xiàn).同時(shí)在心肌細(xì)胞也發(fā)現(xiàn)EPO受體的存在.已有研究說(shuō)明EPO可在細(xì)胞水平顯著減少缺氧誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞凋亡,同時(shí)器官水平研究說(shuō)明EPO可減少缺血再港注心肌損傷和梗死心肌的范困,改善心功能久在缺血再灌注的不同時(shí)期,包括心肌缺血前、缺血時(shí)及再灌注時(shí)使用單一劑量rEPO均能產(chǎn)生顯著心肌保護(hù)作用.由于單一

14、劑量EPO治療后35天才可見(jiàn)外周循環(huán)中紅細(xì)胞增加,因此EPO的心臟保護(hù)作用與增加紅細(xì)胞濃度無(wú)關(guān),直接保護(hù)機(jī)制可能包括：(1)減少心肌細(xì)胞凋亡；(2)穩(wěn)定內(nèi)皮細(xì)胞和促進(jìn)血管生成：(3)發(fā)動(dòng)卅贛內(nèi)皮祖細(xì)胞口.】：(4)減輕缺血和再港注引起的炎癥反響等.體內(nèi)EPO主要由腎臟分泌入循環(huán),EPO和細(xì)胞膜的EPO受體結(jié)合發(fā)揮生物活性,激活多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑發(fā)揮抗凋亡作用"4多種神經(jīng)細(xì)胞可分泌EPO和表達(dá)EPO受體,EPOEPO受體系統(tǒng)被認(rèn)為是腦缺血損傷的內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制,在腦缺血/再濯注或持續(xù)局部腦缺血時(shí),神經(jīng)細(xì)胞上調(diào)EPO受體和分泌EPO增強(qiáng),并且上調(diào)EPO受體要早于增加EPO分泌口3,網(wǎng).EPO

15、受體在成年大鼠心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和纖維母細(xì)胞均有表達(dá)口習(xí),細(xì)胞EPO受體表達(dá)可能與缺氧,胰島素樣生長(zhǎng)因子(nisulmlikegrowthfactor,IGF),腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor,TNF),白介素-1(mterleiikiii.IL-1)和白介素-6(mterleukm6、IL-6)等有關(guān).目前尚無(wú)心肌組織分泌EPO的證據(jù),調(diào)控心肌細(xì)胞EPO受體表達(dá)的因素尚不明確,對(duì)于心肌梗死時(shí)是否也存在EPO受體上調(diào)尚不清楚.EPO受體的表達(dá)分布和時(shí)間,對(duì)于外源性EPO的治療效果起決定作用.在大鼠離體心臟Langendor任灌注模型中,40mm缺血和2h再灌注,EPO受體

16、的表達(dá)量和在心肌細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞和纖維母細(xì)胞的表達(dá)分布未見(jiàn)顯著改變,并且發(fā)現(xiàn)外源性EPO治療使心肌組織EPO受體下調(diào).習(xí).是否持續(xù)缺血或更長(zhǎng)的再灌注時(shí)間能使EPO受體的表達(dá)量和分布產(chǎn)生影響,以及EPO治療是否會(huì)導(dǎo)致EPO受體持久下調(diào)等情況,需進(jìn)一步研究.本工程研究缺血性心臟病時(shí)EPO受體的表達(dá)和功能.重點(diǎn)探討心肌細(xì)胞表達(dá)EPO受體的調(diào)控機(jī)制,缺血和再濯注損傷時(shí)心肌組織EPO受體表達(dá)分布和時(shí)間特征,以及外源性EPO的心臟保護(hù)作用與心肌EPO受體功能的關(guān)系.同時(shí),觀察外源性EPO治療對(duì)于心臟EPO受體表現(xiàn)情況影響等.通過(guò)研究以明確缺血性心臟是否存在EPOEPO受體的內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制和外源性EPO治療的最

17、正確時(shí)間窗,為臨床使用EPO治療急性心肌缺血性損傷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).2、工程研究目標(biāo)及與申請(qǐng)者研究工作長(zhǎng)期目標(biāo)的關(guān)系研究目標(biāo)：探索心肌細(xì)胞表達(dá)EPO受體的影響因素,明確心肌缺血損傷時(shí)是否存在EPO/EPO受體的內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制.探索外源性EPO對(duì)于心肌保護(hù)作用及與EPO受體表達(dá)的關(guān)系,明確EPO治療的時(shí)間要求.EPO治療缺血性心臟病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).與申請(qǐng)者研究工作長(zhǎng)期目標(biāo)的關(guān)系：本課題組成員長(zhǎng)期從事心血管疾病治療和細(xì)胞移植治療的研究,在心血管生理學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)分子生物學(xué)、分子遺傳學(xué)和病理學(xué)等方面做了大量的工作,積累了豐富的理論和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn).3、工程研究?jī)?nèi)容,研究方案和進(jìn)度安排研究?jī)?nèi)容：第一局部：體外實(shí)驗(yàn)

18、：大鼠心肌細(xì)胞EPO受體表達(dá)及影響因素1、低氧及IL-6等細(xì)胞因子對(duì)體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞EPO受體表達(dá)的影響：觀察體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞EPO受體表達(dá)情況,以及在低氧和/或與心肌梗死相關(guān)的IL-6等細(xì)胞因子對(duì)于心肌細(xì)胞EPO受體表達(dá)的影響.2、外源性EPO對(duì)缺氧心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及EPO受體的表達(dá)變化：觀察外源性EPO對(duì)于心肌細(xì)胞的保護(hù)作用,以及EPO處理對(duì)于心肌細(xì)胞表達(dá)EPO受體的變化.第二局部：在體實(shí)驗(yàn)：缺血損傷對(duì)于心肌細(xì)胞表達(dá)EPO受體的影響1、缺血性損傷時(shí)心肌表達(dá)EPO受體改變及分布：觀察缺血再灌注及心肌梗死模型中缺血區(qū)域心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)EPO受體情況及隨時(shí)間的改變.2、

19、缺血性心肌損傷時(shí)循環(huán)中EPO濃度改變及時(shí)間特征：觀察缺血再灌注及心肌梗死時(shí)循環(huán)中EPO濃度改變,隨時(shí)間的濃度曲線,以及與EPO表達(dá)相關(guān)的細(xì)胞因子水平的改變.3、外源性EPO對(duì)缺血心肌的保護(hù)作用及對(duì)EPO受體影響：觀察外源性EPO對(duì)于缺血再灌注及心肌梗死的保護(hù)作用和EPO治療開(kāi)始時(shí)間及維持治療對(duì)于保護(hù)作用的影響.觀察外源性EPO對(duì)于缺血心肌表達(dá)EPO受體的影響.研究方案：第一局部體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞EPO受體表達(dá)及影響因素1、新生大鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng),光鏡及免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定：2、低氧、低糖、TNF、IL-6、EPO等單一或復(fù)合條件下培養(yǎng)心肌細(xì)胞,使用半定量RT-PCR,WesternBlot和

20、免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)EPO受體表達(dá)情況.并與正常條件培養(yǎng)的心肌細(xì)胞對(duì)照.3、低氧條件下培養(yǎng)的心肌細(xì)胞中參加不同濃度的rEPO,TUXEL法檢測(cè)凋亡細(xì)胞,免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)凋亡細(xì)胞和存活細(xì)胞表達(dá)EPO受體表達(dá)情況.第二局部缺血損傷對(duì)于心肌細(xì)胞表達(dá)EPO受體的影響1、鉗夾3min或結(jié)扎大鼠前降支分別建立大鼠心肌缺血/再灌注和心肌梗死模型.2、再灌注或心肌梗死即刻、2h、6h、12h、24h、4d、7d等不同時(shí)間,使用半定量RT-PCR,WesternBlot和免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)EPO受體表達(dá)情況,同時(shí)以免疫組化確定細(xì)胞類型：心肌細(xì)胞(TnT、Cardiacmyosin)、內(nèi)皮細(xì)胞(VE-cad

21、herin,factorVIU)、血管平滑肌細(xì)胞(anti-a-smoothmusclemyosin)及疤痕組織(1型和3型膠原抗體混合物)的特異性抗原.TUNEL法檢測(cè)凋亡細(xì)胞.檢測(cè)不同的時(shí)間點(diǎn)血漿EPO及IL-6等細(xì)胞因子濃度的變化.3、分別在建立模型前、再濯注或心肌梗心即刻、心肌梗死后3h、6h等不同時(shí)間點(diǎn)開(kāi)始皮下注射不同濃度的rEPO(1000-5000U/Kg,單交或l/d*7),以假手術(shù)組和生理鹽水治療組為對(duì)照.4、不同時(shí)間獲取大鼠心臟,觀察心功能主要參數(shù)改變,觀察堵塞區(qū)域病理變化,測(cè)定梗死面積,原位凋亡檢測(cè)和EPO受體抗體雙染色檢測(cè)相關(guān)區(qū)域凋亡細(xì)胞數(shù)量,以及EPO受體表達(dá)的關(guān)系.

22、關(guān)鍵技術(shù)：(1)具有心肌細(xì)胞細(xì)胞原代培養(yǎng)、細(xì)胞移植、基因治療及動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)等相關(guān)研究經(jīng)驗(yàn)和技術(shù).(2)本校動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、病理檢測(cè)、細(xì)胞分類鑒定、凋亡檢測(cè)及其他實(shí)驗(yàn)條件已具備,可配合實(shí)驗(yàn)的完成.(3)免疫組織化學(xué)雙抗體染色：可能出現(xiàn)兩種抗體染色過(guò)程相互干擾,擬根據(jù)不同的細(xì)胞特導(dǎo)性抗體和EPO抗體雙染色,摸索最正確的實(shí)驗(yàn)方案.研究進(jìn)度方案：整個(gè)研究需要3年完成(1) 2006.P2006.12心肌細(xì)胞原代培養(yǎng),低氧及細(xì)胞因子等條件下心肌細(xì)胞表達(dá)EPO受體的改變.(2) 2007.T2007.6EPO對(duì)于體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞的缺氧損傷保護(hù)作用及對(duì)于EPO受體表達(dá)的影響.(3) 2007.62021.12在大

23、鼠心肌缺血/再灌注和心肌梗死模型中觀察EPO受體表達(dá)情況,外源性EPO對(duì)心肌的保護(hù)作用及對(duì)受體表達(dá)的影響.總結(jié)實(shí)驗(yàn)資料、撰寫論文.技術(shù)路線：體外實(shí)驗(yàn)在體實(shí)驗(yàn)4、工程創(chuàng)新之處1EPO被認(rèn)為具有多種器官的保護(hù)作用.腦缺血損傷時(shí),EPO/EPO受體上調(diào)發(fā)揮內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制,目前對(duì)于心肌缺血時(shí)是否存在同樣的內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制尚不清楚.本工程探索心肌缺血/再灌注損傷時(shí)EPO受體表達(dá)的改變,以明確是否存在內(nèi)源性的EPO心肌保護(hù)機(jī)制.2已有的研究主要觀察EPO對(duì)心肌缺血時(shí)的保護(hù)作用及信號(hào)途徑,對(duì)于EPO受體在心肌組織中的表達(dá)分布及缺血時(shí)的表達(dá)改變情況尚未見(jiàn)系統(tǒng)研究.本研究重點(diǎn)觀察心肌缺血/再濯注損傷時(shí)相應(yīng)區(qū)域EP

24、O受體的表達(dá)情況及時(shí)間特征,并研究EPO的心肌保護(hù)作用與EPO受體的關(guān)系.3EPO長(zhǎng)期治療腎性貧血時(shí)出現(xiàn)療效下降的局部原由于EPO受體下調(diào),目前對(duì)于EPO治療后心肌組織EPO受體是否會(huì)出現(xiàn)下調(diào)而導(dǎo)致保護(hù)作用減弱尚不清楚.本研究觀察EPO治療對(duì)心臟EPO受體表達(dá)的影響.5、工作根底與工作條件工作根底：本實(shí)驗(yàn)室已掌握心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)、大鼠心肌梗死的模型的建立和細(xì)胞移植治療等方法,為本課題的完成奠定了良好的根底.工作條件：本實(shí)驗(yàn)室已具備血細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物模型制作、免疫細(xì)胞和組織化學(xué)染色、半定量RT-PCR及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心功能測(cè)定等根本技術(shù)和條件.實(shí)驗(yàn)室相關(guān)儀器有外科手術(shù)顯微鏡、電子天平O.OOlmg級(jí)、各

25、類CO：孵箱、多譜勒超聲儀、各類電泳儀、純水系統(tǒng)及各種冰箱等.本實(shí)驗(yàn)室與浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院生理教研室有長(zhǎng)期的科研合作,局部工作能在浙江大學(xué)完成.6、預(yù)期研究結(jié)果及其利用研究結(jié)果的方案和今后開(kāi)展的思路預(yù)期試驗(yàn)結(jié)果：1明確心臟是否存在內(nèi)源性的EPO/EPO受體保護(hù)系統(tǒng).2明確心肌缺血損傷時(shí)心肌組織表達(dá)EPO受體的分布和時(shí)間特征,以及EPO治療對(duì)于EPO受體表達(dá)的影響,為EPO治療尋找適宜的時(shí)間窗.3在國(guó)內(nèi)外專業(yè)雜志上發(fā)表46篇研究論著.今后開(kāi)展思路：在明確EPO/EPO受體對(duì)抗心肌缺血再灌注的保護(hù)作用根底上,進(jìn)一步深入探討EPO引起EPO受體表達(dá)改變的具體分子機(jī)制,探討其可能涉及的信號(hào)通路.7、參考文

26、獻(xiàn)lEeftingaF.RensiiigaB、WigmanJ,al.Roleofapoptosisinreperftisioninjury.CardiovascularResearch.2004:61(3):414-4262KitsisaRN,MamiDL.Apotosisanddieheart:adecdeofprogress.JournalofMolecularandCellularCardiology.200538(1):1-23FisherJW.Erythropoietin:physiologyandpharmacologyupdate.Erythropoietin.JAMA.2005

27、;293:90-954MaieseK,LiF,ChongZZ.NewAvenuesofExplorationforEr>tliropoietin.JAMA.2005;293-90-955MaieseK,LiF,ChongZZ.Erylhropoietinindiebrain:canthepromisetoprotectbefulfilled?TrendsinPharmacologicalSciences.2004;25(11):577-5836EhrenreichH、HasselblattM.DembowskiC,etal.ErythorpoietmTlierapyforAcuteStr

28、okeIsBotliSafeandBeneficial.MolecularMedicme.2002;8(8):495-5057BogoyevitchMA.Ailupdateonthecardiaceffectsoferythropoietincardioprotctionbyerythropoietinandthelessonslearntfromstudiesinneuroprotection.CardiovascularResearch.2004:63(2):208-2168LipsicE,MeerP.HeimmgRH.TuningofErlliroietmTreatmentforCardioprotctioninLscheniia'Rq)erfiision.JCardiovascPharinacol.2004;44(4):473-4799JaquetK.KrauseK,Tawakol-KliodaiM.etal.ErythropoietmandVEGFExhibitEqualAngiogenicPotential.MicrovascularRese