抗腫瘤指導(dǎo)原則

1、抗腫瘤藥物藥效學(xué)指導(dǎo)原則一、基本原則1. 抗腫瘤藥物分類(1) 細(xì)胞毒類藥物 ( cytotoxic age nt) : 包括干擾核酸和蛋白質(zhì)合成、抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶及作用于微 管系統(tǒng)的藥物 等；(2) 生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑 ( biological response modifier) ；(3) 腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑 ( resista nee reversal age nt) ；(4) 腫瘤治療增敏劑 ( oncotherapy sensitizer) ；(5) 腫瘤血管生成抑制劑 (tumor angiogenesis inhibitor) ；(6) 分化誘導(dǎo)劑 (differe ntiati on i

2、n duci ng age nt)；(7) 生長(zhǎng)因子抑制劑 (growth factor inhibitor) ；(8) 反義寡核苷酸 (an tise nse oligo nucleotide)。2. 抗腫瘤藥物藥效學(xué)需研究?jī)?nèi)容2.1 包括體外抗腫瘤試驗(yàn)，體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)。2.2 評(píng)價(jià)藥物的抗癌活性時(shí)， 以體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果為主，同時(shí)參考體外試驗(yàn)結(jié)果以做出正確的結(jié)論。2.3 I 類抗腫瘤新藥應(yīng)進(jìn)行藥物作用機(jī)制初步研究。二、體外抗腫瘤活性試驗(yàn)1?試驗(yàn)?zāi)康?.1 對(duì)候選化合物進(jìn)行初步篩選；1.2 了解候選化合物的抗瘤譜；1.3 為隨后進(jìn)行的體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)提供參考，如劑量范圍、腫瘤類別等 。2?試驗(yàn)方法選

3、用 10-15 株人癌細(xì)胞株，根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康倪x擇相應(yīng)細(xì)胞系及適量的細(xì)胞接種濃度，按常規(guī)細(xì)胞 培養(yǎng)法進(jìn)行培養(yǎng)；推薦使用四氮唑鹽 MTT 還原法、 XTT 還原法、磺酰羅丹明 B 染色法、或 51Cr 釋放試驗(yàn)、集 落形成法等測(cè)定藥物的抗癌作用。藥物與細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)間一般為 48-72 小時(shí)，貼 壁細(xì)胞需先貼壁 24 小時(shí)后再給藥。試驗(yàn)應(yīng)設(shè)陽性及陰性對(duì)照組，陽性對(duì)照用一定濃度的標(biāo)準(zhǔn) 抗腫瘤藥，陰性對(duì)照為溶媒對(duì)照。3. 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)以同一樣品不同濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制率作圖可得到劑量效應(yīng)曲線，然后采用 Logit 法計(jì)算半數(shù) 有效 濃度（ IC50 值或 EC50 值）。體外試驗(yàn)至少重復(fù)一次。附注：評(píng)價(jià)藥物抗癌

4、活性的方法：1. MTT 還原法1.1 基本原理：四氮唑 MTT,3-（4,5-dimethylibiazol-2-yl）-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide 是一種能接受氫原子的染料。活細(xì)胞線粒體中與 NADP 相關(guān)的脫氫酶在細(xì)胞內(nèi)可將黃色的 MTT 轉(zhuǎn)化成不溶性的 藍(lán)紫色的甲月替（formazan），而死的細(xì)胞則無此功能。用二甲基亞諷（DMSO）溶解甲月替后，在一定波長(zhǎng)下用酶標(biāo)儀測(cè)定光密度值，即可定量測(cè)出細(xì)胞的存活率。1.2 操作步驟 ：1.2.1 選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的貼壁腫瘤細(xì)胞，用胰酶消化后，用含10 %小牛血清的 RPMI 1640 培養(yǎng)基配成5000個(gè)/

5、ml的細(xì)胞懸液，接種在96孔培養(yǎng)板中，每孔接種200 A1, 37 C, 5% CO2培養(yǎng)24 h。1.2.2 實(shí)驗(yàn)組換新的含不同濃度被測(cè)樣品的培養(yǎng)基，對(duì)照組則換含等體積溶劑的培養(yǎng)基，每組設(shè)3? 5平行孔， 37 C, 5 % CO2 培養(yǎng) 4? 5 d。棄去上清液，每孔加入200 新鮮配制的含0.2 mg /ml MTT的無血清培養(yǎng)基.37 C繼續(xù)培養(yǎng) 4 h 。小心棄上清，并加入 200 卩 l DMSO ，用微型超聲振蕩器混勻后，在酶標(biāo)儀上以試 驗(yàn)波長(zhǎng)為 570nm ，參比波長(zhǎng)為 450 nm 測(cè)定光密度值。1.3 結(jié)果評(píng)定：按下式計(jì)算藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率：腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率 =（

6、1- OD實(shí)驗(yàn)/OD對(duì)照）X00 %以同一樣品的不同濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率作圖可得到劑量反應(yīng)曲線，從中求出樣品的半數(shù)殺傷濃度IC50。合成化合物或植物提取純品的IC50 V 10（/m1或植物粗提物的IC50 V 20進(jìn)/ m1 時(shí)，則判斷樣品在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷作用。2. 生長(zhǎng)曲線法的基本原理：在最適條件下，腫瘤細(xì)胞在培養(yǎng)液中呈指數(shù)生長(zhǎng)，如取細(xì)胞數(shù)的對(duì)數(shù)與培養(yǎng)時(shí)間作圖可得一條直線，故稱此時(shí)為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。隨著細(xì)胞密度不斷增高，由于代謝產(chǎn)物的積聚及營(yíng)養(yǎng)物的消耗， 細(xì)胞生長(zhǎng)逐漸減慢以致停止，此時(shí)稱高坪期或穩(wěn)定期。因此藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響可通過生長(zhǎng)曲線反映出來。3. 染料排斥試驗(yàn)的基本原理： 活

7、細(xì)胞有排斥某些染料如伊紅、臺(tái)盼藍(lán)、苯胺黑等的能力，而死細(xì)胞由于膜完整性的破壞，可被著色。因此培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞中加入這些染料， 一定時(shí)間后，對(duì)著色和未著色的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)， 即可算出被殺死的細(xì)胞比例。4. 集落形成法的基本原理： 克隆原細(xì)胞具有持續(xù)增殖能力，當(dāng)單個(gè)細(xì)胞分裂 6代或6代以上時(shí)，其后代所組成的群體 (集落)便含 50個(gè)以 上細(xì)胞。通過集落計(jì)數(shù)可對(duì)克隆原細(xì)胞作定量分析。 它反映了單個(gè)細(xì)胞的增殖潛力， 故能較靈敏地測(cè)定抗癌藥的活性，日前被認(rèn)為是一種較理想的檢測(cè)方法。常用的集落形成法可 分為貼壁法及半固 體培養(yǎng)法兩種。5. SRB 法的基本原理：SRB (sulforhodamine 是一種蛋

8、白質(zhì)結(jié)合染料，粉紅色，可溶于水。 SRB 可與生物大分子中的 堿性氨基酸結(jié)合。其在 515 nm 波長(zhǎng)的 0D 讀數(shù)與細(xì)胞數(shù)呈良好的線性關(guān)系。故可用作細(xì)胞數(shù) 的定量。 MTT 法的一個(gè)缺點(diǎn)是 0D 值可隨放置時(shí)間而變，而 SRB 法無此現(xiàn)象。因此更適用于 進(jìn)行大規(guī)模的試驗(yàn)。三、體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn) 體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)必須選用三種以上腫瘤模型，其中至少一種為人癌裸小鼠移植模型或其它人癌 小鼠模型。試驗(yàn)結(jié) 果三種模型均為有效，再重復(fù)一次也為有效，評(píng)定該化合物對(duì)這些實(shí)驗(yàn)性腫 瘤具有治療作用。鼓勵(lì)使用人類腫瘤裸鼠移植瘤模型和多種類的移植瘤模型、原位接種模型和中空纖維測(cè)定(hollow-fiber assay )

9、 等方法。1. 動(dòng)物 動(dòng)物要求健康，符合等級(jí)動(dòng)物要求，有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證。雌雄均可，但同一批實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物性別 必須相同。小鼠鼠 齡為 5-6 周，體重為 18-22 克。評(píng)價(jià)同一物質(zhì)的活性時(shí)，不同批次的實(shí)驗(yàn)必 須采用同一品系的小鼠。2. 腫瘤模型2.1 小鼠腫瘤模型 淋巴細(xì)胞白血病腹水瘤 L1210 和 P388 、白血病 L-615 、宮頸癌 U14 、肝癌 H22 、Lewis 肺癌、 黑色素瘤B16 、網(wǎng)織細(xì)胞瘤 M5076 、腸癌 26、腸腺癌 38、乳腺癌 CD8F1 、艾氏腹水瘤( EAC)、 肉瘤-180 等，以及 各種小鼠腫瘤的亞型和耐藥株等。2.2 人癌裸小鼠移植瘤模型應(yīng)選用體外

10、試驗(yàn)敏感細(xì)胞株進(jìn)行體內(nèi)抗人癌裸小鼠移植瘤試驗(yàn)。 模型建立和使用應(yīng)注意 :(1) 移植瘤一般由相應(yīng)的細(xì)胞株移植而建立，對(duì)細(xì)胞株和移植瘤的化療敏感性應(yīng)予了解。(2) 移植瘤復(fù)蘇后一般應(yīng)傳 2-3 代后再用于體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)。(3) 對(duì)模型生長(zhǎng)情況應(yīng)全面了解，尤其是生長(zhǎng)快的模型(4) 為了保持移植瘤的生物學(xué)特性和遺傳特性，復(fù)蘇后移植瘤體內(nèi)傳代應(yīng)少于 15-20 代 3?試驗(yàn)過程3.1 接種： 腫瘤接種方法主要有皮下接種、腹腔接種和原位接種。3.1.1 皮下腫瘤模型 選擇腫瘤生長(zhǎng)旺盛且無潰破的荷瘤小鼠，頸椎脫臼處死，在無菌條件下 ( 超凈臺(tái)或接種罩 )， 用碘酒、酒精或新潔爾滅消毒動(dòng)物皮膚，切開皮膚，剝

11、離腫瘤。將瘤組織剪成 1.5 mm3 左右， 用套管針接種于動(dòng)物一側(cè)或雙側(cè)腋窩皮下；或制成細(xì)胞懸液，然后按一定比例加入無菌生理鹽 水，一般每只小鼠接種腫瘤細(xì)胞數(shù)量為 ( 1-5 ) X106 。3.1.2 腹水瘤模型 無菌條件下，消毒動(dòng)物皮膚，吸取生長(zhǎng)良好的動(dòng)物腹水，以生理鹽水按一定比例稀釋后接種于 動(dòng)物腹腔，接種細(xì)胞數(shù)量一般為 (1-5 ) X106。3.1.3 原位接種模型 原位接種是指將來源于某臟器的腫瘤接種在動(dòng)物的某臟器，如將人肝癌接種在裸小鼠的肝臟。 原位接種不是常規(guī)的方法，但有其優(yōu)越性，是鼓勵(lì)使用的方法。主要有肺、肝、胃、腸、乳腺、 顱內(nèi)等原位接種方法。3.2 動(dòng)物分組3.2.1

12、試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組、治療組。X 實(shí)驗(yàn)組數(shù)3.2.2 治療組設(shè)高、中、低三個(gè)劑量組。小鼠腫瘤和腹水瘤接種后次日將動(dòng)物隨機(jī)分組，裸鼠 移植瘤用游標(biāo)卡尺測(cè)量移植瘤直徑，待腫瘤生長(zhǎng)至 100 300mm3 后將動(dòng)物隨機(jī)分組。3.2.3 動(dòng)物數(shù)普通小鼠每組 10 只，裸鼠 6 只。陰性對(duì)照組動(dòng)物數(shù)為治療組動(dòng)物數(shù)1/23.3 劑量設(shè)置3.3.1 治療組設(shè)高、中、低劑量治療組，一般按 4:2:1 設(shè)置，高劑量使用最大耐受量或 LD10 的 劑量。332 陰性對(duì)照組給予相應(yīng)的溶劑；333 陽性對(duì)照藥選用對(duì)該動(dòng)物敏感的、臨床應(yīng)用的抗腫瘤藥物，3.3.4 如受試物為一抗癌藥物的衍生物或類似物時(shí)，必須選用

13、該抗癌藥物作為陽性對(duì)照藥。3.4 陽性對(duì)照藥選擇原則 療效確切；與被試物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)類似；與被試物質(zhì)有類似的作用機(jī)理。3.5 藥物配制溶于水的藥物，用生理鹽水或蒸餾水配制；如用酸、堿溶解者，可先用小量酸（ 0.1-0.5N HCI ）或堿（NaHC03、Na2CO3、NaOH ）溶解，調(diào)節(jié)pH在的范圍內(nèi)。用乙醇、丙二醇、吐 溫80、DMSO 助溶的藥物，或用吐溫 60、吐溫 80、 2-3% 淀粉、 0 . 5%羧甲基纖維素制成混懸 液的藥物，可腹腔注射或 口服，但必須設(shè)相同濃度的溶劑對(duì)照組。用注射用花生油配制的溶液 或乳劑可口服、皮下或肌肉注射。3.6 給藥方案和給藥途徑 分組當(dāng)日開始給藥，根

14、據(jù)不同藥物的代謝動(dòng)力學(xué)和毒性反應(yīng)等確定給藥方案。給藥途徑應(yīng)與推 薦臨床用藥的途徑 相同。給藥次數(shù)較多，或被試物質(zhì)溶解性較差，靜脈給藥有困難時(shí)，可考慮使用腹腔給藥，但在評(píng)價(jià)藥效時(shí)要注意這兩種給藥途徑是有差別的?？刹扇×鲋?、瘤內(nèi)、肌肉、皮下給藥途徑。腹水瘤試驗(yàn)時(shí)一般不能應(yīng)用腹腔給藥途徑。4 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)4.1 腹水瘤模型 接種給藥后，觀察和記錄動(dòng)物死亡時(shí)間，計(jì)算生存天數(shù)。如陰性對(duì)照組20% 動(dòng)物存活時(shí)間超過4 周，表明腹水瘤生長(zhǎng)不良，實(shí)驗(yàn)作廢。采用中位生存時(shí)間（即 median survival time,MST ）來評(píng)價(jià)每組的生存時(shí)間，其計(jì)算公式為：每組鼠數(shù)的中間數(shù) -中間生存天數(shù)前死亡的鼠數(shù)MST

15、= （中間生存天數(shù) -0.5）+中間生存天數(shù)死亡的鼠數(shù) 治療組與對(duì)照組的比較，采用T/C（ %）來表示，計(jì)算公式為：T MSTT/C % =X 100%C MSTT MST : 治療組 MST ； C MST : 陰性對(duì)照組 MST 。 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)以 125%為界，當(dāng) T/C%> 125% 時(shí)。視為有效，反之則無效。4.2 裸鼠移植瘤模型 推薦使用測(cè)量瘤徑的方法，動(dòng)態(tài)觀察受試物抗腫瘤的效應(yīng)。腫瘤直徑的測(cè)量次數(shù)根據(jù)移植瘤的 生長(zhǎng)情況而定，一般為每周2-3 次 ,每次測(cè)量同時(shí)還需稱鼠重。腫瘤體積 (tumor volume,TV) 的計(jì)算公式為：V = 1/2 :axb2 或 n /6 x a

16、x bXc其中 a 、b、 c 分別表示長(zhǎng)寬高。兩公式的相關(guān)性極好，可采用任一公式根據(jù)測(cè)量結(jié)果計(jì)算出相對(duì)腫瘤體積 (relative tumor volume , RTV ), RTV = Vt / VO 。其中 VO為分籠給藥時(shí)(即dO)測(cè)量所得腫瘤體積，Vt 為每一次測(cè)量時(shí)的腫瘤體積?？鼓[瘤活性評(píng)價(jià)指標(biāo)為相對(duì)腫瘤增殖率T/C ( %)TRTVT/C % = X 100%CRTVTRTV : 治療組 RTV ; CRTV : 陰性對(duì)照組 RTV。療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)： T/C % >40 % 為無效； T/C % < 40% ，并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 P<0.05 為有效。4.3 小鼠腫瘤

17、模型生長(zhǎng)較慢小鼠腫瘤采用與裸鼠移植瘤同樣的測(cè)量瘤徑的評(píng)價(jià)方法。 生長(zhǎng)較快小鼠腫瘤可采用稱瘤重的方法評(píng)價(jià)。試驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物，稱體重，解剖剝離瘤塊， 稱瘤重。陰性對(duì)照組腫瘤平均瘤重小于1 克，或 20% 腫瘤重量小于 400 毫克，表示腫瘤生長(zhǎng)不良，試驗(yàn)作廢。療效評(píng)價(jià)公式：給藥組平均瘤重 -陰性對(duì)照組平均瘤重腫瘤生長(zhǎng)抑制率 = X 100%陰性對(duì)照組平均瘤重評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：腫瘤生長(zhǎng)抑制率 <40% 為無效；腫瘤生長(zhǎng)抑制率 > 40% ,并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 P<0.05 為有效4.4 原位接種模型 不同原位接種模型可采用不同評(píng)價(jià)方法，主要有瘤重和生存時(shí)間評(píng)價(jià)法。如肝原位接種可用瘤 重評(píng)價(jià)，

18、顱內(nèi)接種可用生存時(shí)間評(píng)價(jià)。評(píng)價(jià)方法、標(biāo)準(zhǔn)和注意事項(xiàng)同腹水瘤模型和小鼠腫瘤模 型四、抗腫瘤藥物的特殊要求I 類抗腫瘤新藥應(yīng)進(jìn)行藥物作用機(jī)制的初步研究。非細(xì)胞毒類藥物除完成體內(nèi)外抗腫瘤試驗(yàn)，應(yīng)進(jìn)行特定抗腫瘤作用研究。1. 生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑 藥效學(xué)包括：體內(nèi)抗癌試驗(yàn)和免疫功能研究。1.1 體內(nèi)抗癌試驗(yàn)注意點(diǎn)：模型：裸鼠是免疫缺陷動(dòng)物，一般應(yīng)用正常免疫鼠腫瘤模型。 給藥時(shí)間：可按常規(guī)給藥，也可在接種前預(yù)先給藥，接種后繼續(xù)給藥或停藥。105 個(gè)瘤細(xì)胞 /小鼠。 腫瘤細(xì)胞接種量：可比細(xì)胞毒類藥物低一個(gè)數(shù)量級(jí)，一般為（1-5 ）給藥方法：可單獨(dú)給藥，也可與其它抗腫瘤藥物合并使用，觀察增效或減毒作用。1.2 免

19、疫功能試驗(yàn)方法具有抑瘤作用的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑， 還需作免疫功能測(cè)定 ，以明確其抑瘤作用是否與免疫功能調(diào)控 有關(guān)。免疫功能測(cè)定包括細(xì)胞免疫和體液免疫兩方面。免疫功能測(cè)定有：（1）巨噬細(xì)胞功能測(cè)定（2）天然殺傷細(xì)胞 （ natural kill cell ） 測(cè)定（3）淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（4）淋巴因子活化的殺傷細(xì)胞測(cè)定 （ lymphocyte- activated killer cell ）（5）各種細(xì)胞因子測(cè)定，如 IL-2、IL-6、IL-12、IFN- Y TNF- a 等。（6）遲發(fā)型超敏反應(yīng)檢測(cè)2. 腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑2.1 體外抗耐藥活性試驗(yàn)選擇 2-3 對(duì)腫瘤耐藥 /敏感細(xì)胞株，采用 MT

20、T 法或 SRB 法測(cè)定細(xì)胞毒性。一般在無毒劑量或相 當(dāng)于 IC10 的劑量 下設(shè)三個(gè)劑量，并設(shè)立相應(yīng)的陽性和陰性對(duì)照組。評(píng)價(jià)逆轉(zhuǎn)效果用逆轉(zhuǎn)倍數(shù)fold reversal, FR ) 表示： FR=IC50 (不加逆轉(zhuǎn)劑 )/IC50 (加逆轉(zhuǎn)劑 )注意的萬面： 耐藥株的耐藥性：耐藥株因傳代，尤其是撤藥后耐藥性可改變或消失；試驗(yàn)前必須對(duì)試驗(yàn)?zāi)退?株進(jìn)行耐藥倍數(shù)(FR)測(cè)定，確保試驗(yàn)的可*性。若非逆轉(zhuǎn)多藥耐藥(MDR)而是逆轉(zhuǎn)單藥耐藥，則實(shí)驗(yàn)的瘤株中需有針對(duì)該藥的耐藥細(xì)胞株。陽性對(duì)照藥建議采用維拉帕米 ( verapamil) 10 (iM 環(huán)孢菌素 A (cyclosporin A) 3 卩

21、M2.2 體內(nèi)抗腫瘤耐藥活性試驗(yàn) 小鼠敏感和對(duì)應(yīng)的耐藥腫瘤和人癌裸鼠敏感和對(duì)應(yīng)的耐藥移植瘤。2.3 耐藥基因及其表達(dá)產(chǎn)物測(cè)定可測(cè)定腫瘤細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度變化和耐藥基因及其表達(dá)產(chǎn)物，初步明確其逆轉(zhuǎn)耐藥機(jī)制。包括 多藥耐藥基因及其編碼蛋白 ( multidrug resista nee gen e/p-glycoprotei n, Mdr1/Pgp)、多藥耐藥相關(guān)蛋白 (multidrug resista nce-related prote in, MRP)、肺耐藥相關(guān)蛋白 (lu ng resista nee-relatedprotein, LRP) 、其它與耐藥相關(guān)的基因 /蛋白及酶等。3. 抗

22、腫瘤轉(zhuǎn)移藥物 腫瘤是否轉(zhuǎn)移不僅依賴于腫瘤細(xì)胞本身具有的內(nèi)在轉(zhuǎn)移潛能，而且也取決于機(jī)體抗轉(zhuǎn)移因素的 消長(zhǎng)。所以，抗轉(zhuǎn)移藥物只有在動(dòng)物體內(nèi)模型上才能得出符合實(shí)際的結(jié)果。3.1 體外試驗(yàn) 測(cè)定候選化合物作用下腫瘤細(xì)胞對(duì)基底膜的侵襲、粘附和腫瘤細(xì)胞趨化性運(yùn)動(dòng)的能力。3.2 體內(nèi)試驗(yàn)3.2.1 模型：小鼠 B16 黑色素瘤、小鼠 Lewis 肺癌等和人癌裸鼠移植高轉(zhuǎn)移瘤模型。3.2.2 接種方法： 常用靜脈注射方法，也可用皮下接種等方法。3.2.3 評(píng)價(jià)指標(biāo) 接種給藥后，觀察記錄動(dòng)物死亡時(shí)間，計(jì)算生存天數(shù)。試驗(yàn)結(jié)束后，稱動(dòng)物體重、肺重、移植瘤重，解剖顯微鏡下計(jì)數(shù)肺轉(zhuǎn)移瘤灶、測(cè)瘤徑( 計(jì)算肺轉(zhuǎn)移瘤體積 )

23、 和病理組織學(xué)切片觀察等；計(jì)算轉(zhuǎn)移率 轉(zhuǎn)移抑制率 =1 -(治療組轉(zhuǎn)移率 /對(duì)照組轉(zhuǎn)移率 ) XI00% 。4. 腫瘤血管生成抑制劑4.1 體外試驗(yàn) 體外試驗(yàn)?zāi)Ｐ陀?：(1 ) 人血管內(nèi)皮細(xì)胞模型： 人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞和人微血管 (肺、皮膚等 )內(nèi)皮細(xì)胞。( 2)血管形成促進(jìn)因子等刺激細(xì)胞DNA 合成、增殖、遷移、血管形成 (tube formation) 來觀察藥物的抗血管形成作用。如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (vascular e ndothelial growth factor,VEGF) 或堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 (basic fibroblast growth factor,bFGF)(3

24、 ) 腫瘤細(xì)胞模型： 主要應(yīng)用國內(nèi)已建立的人實(shí)體癌細(xì)胞系，確定 VEGF 、FGF 等高分泌的細(xì)胞株。 檢測(cè)細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移能力及血管形成因子的基因表達(dá)狀況來評(píng)價(jià)藥物。4.2 體內(nèi)試驗(yàn)4.2.1 血管抑制試驗(yàn) 經(jīng)典的血管形成評(píng)價(jià)方法有：雞絨毛膜尿囊和卵黃膜囊 (CAM ) 、嚙齒動(dòng)物虹膜和角膜等。也可用如皮下移植塑料或多孔的 polytetrafluoroethylene 管、皮下移植無菌的海綿；一些自然的或 化學(xué)修飾的物質(zhì)如 Matrigel 和纖維凝膠等用于體內(nèi)模型。4.2.2 抗腫瘤試驗(yàn) 通過觀察新生血管生成抑制劑的體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)檢測(cè)移植瘤的血管密度、血管生成因子和抑制 因子的分泌和表達(dá)，以及腫瘤的轉(zhuǎn)移情況等綜合評(píng)價(jià)腫瘤血管生成抑制劑的作用和作用機(jī)制。5. 分化誘導(dǎo)劑 分化誘導(dǎo)劑的藥效學(xué)研究包括體外和體內(nèi)研究模型；目前的藥物主要能對(duì)急性白血病進(jìn)行有效 的分化治療。陽性對(duì)照藥