生化檢驗 第五章 酶

1、第第 五五 章章 診斷酶學(xué)診斷酶學(xué) 第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 第二節(jié)第二節(jié) 酶測定技術(shù)酶測定技術(shù) 第三節(jié)第三節(jié) 常用酶及同工酶測定的臨床應(yīng)用常用酶及同工酶測定的臨床應(yīng)用 教學(xué)目的教學(xué)目的 掌握掌握臨床診斷中常用的血清酶及其同工酶臨床診斷中常用的血清酶及其同工酶 掌握掌握酶、工具酶、同工酶等定義；酶、工具酶、同工酶等定義； 酶活性測定方法及注意事項。酶活性測定方法及注意事項。熟悉熟悉血清酶基本知識血清酶基本知識 掌握掌握急性心肌梗塞、肝膽疾病的酶的種類、急性心肌梗塞、肝膽疾病的酶的種類、酶學(xué)診斷標準、及其評價酶學(xué)診斷標準、及其評價了解了解 酶的概念、特征等。酶的概念、特征等。一、酶的概念與特征一、

2、酶的概念與特征（一）酶的組成、結(jié)構(gòu)和功能（一）酶的組成、結(jié)構(gòu)和功能1.1.酶的本質(zhì)和特性酶的本質(zhì)和特性 酶是由活細胞產(chǎn)生的，具有催化功能的生物大分子物質(zhì)，其酶是由活細胞產(chǎn)生的，具有催化功能的生物大分子物質(zhì)，其化學(xué)本質(zhì)絕大部分為化學(xué)本質(zhì)絕大部分為蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)，少數(shù)為，少數(shù)為核酸（核酶、脫氧核酶）核酸（核酶、脫氧核酶） 酶的催化特性：酶的催化特性：極高的催化效率極高的催化效率; ;高度的特異性高度的特異性; ;催化作用催化作用的可調(diào)節(jié)性。的可調(diào)節(jié)性。 酶促反應(yīng)：酶催化的反應(yīng)；酶促反應(yīng)：酶催化的反應(yīng)； 酶活性酶活性(activity)(activity)： 酶催化反應(yīng)的能力；酶催化反應(yīng)的能力； 底物

3、底物(substrate(substrate，S)S)：酶所作用的物質(zhì)；：酶所作用的物質(zhì)； 產(chǎn)物產(chǎn)物(product(product，P)P)： 酶促反應(yīng)的生成物；酶促反應(yīng)的生成物； 酶的激活劑酶的激活劑(activator(activator）：加速酶促反應(yīng)的物質(zhì)；）：加速酶促反應(yīng)的物質(zhì)； 酶的抑制劑酶的抑制劑(inhibitor (inhibitor ）：減慢或終止酶促反應(yīng)的物質(zhì)）：減慢或終止酶促反應(yīng)的物質(zhì)本質(zhì)：絕大部分是本質(zhì)：絕大部分是蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)，少部分酶，少部分酶蛋白復(fù)合物與核酶蛋白復(fù)合物與核酶. . 決定反應(yīng)的性決定反應(yīng)的性質(zhì)和反應(yīng)類型質(zhì)和反應(yīng)類型決定反應(yīng)的特異性及其催化機制決定反

4、應(yīng)的特異性及其催化機制蛋白質(zhì)部分：酶蛋白蛋白質(zhì)部分：酶蛋白 ( (apoenzyme) 輔助因子輔助因子 (cofactor) 金屬離子金屬離子小分子有機化合物小分子有機化合物結(jié)合酶（全酶結(jié)合酶（全酶) )(holoenzyme) 2. 酶的結(jié)構(gòu)與功能酶的結(jié)構(gòu)與功能(simple enzyme) 輔助因子分類輔助因子分類（按其與酶蛋白結(jié)合的緊密程度與作用特點）（按其與酶蛋白結(jié)合的緊密程度與作用特點） 輔酶輔酶 (coenzyme):與酶蛋白結(jié)合與酶蛋白結(jié)合疏松，可用疏松，可用透析或超濾的透析或超濾的方法除去。方法除去。 （小分子有機化合物小分子有機化合物） 輔基輔基 (prosthetic g

5、roup):與酶蛋白結(jié)合與酶蛋白結(jié)合緊密，不能用緊密，不能用透析或超透析或超濾的方法除去濾的方法除去。（。（金屬離子金屬離子） 概念：酶的活性中心是指酶分子結(jié)構(gòu)中，能與底概念：酶的活性中心是指酶分子結(jié)構(gòu)中，能與底物結(jié)合，并使底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的具有特定空間結(jié)物結(jié)合，并使底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的具有特定空間結(jié)構(gòu)的區(qū)域。構(gòu)的區(qū)域。 酶活性中心酶活性中心是酶分子中具有三維結(jié)構(gòu)的區(qū)域，或是酶分子中具有三維結(jié)構(gòu)的區(qū)域，或為裂縫，或為凹陷，深入到酶分子內(nèi)部，常為氨為裂縫，或為凹陷，深入到酶分子內(nèi)部，常為氨基酸殘基的疏水基團組成的?；釟埢氖杷鶊F組成的。（二）（二） 酶的催化作用機制酶的催化作用機制1.酶的活性中心

6、酶的活性中心:能能 量量 改改 變變活活 化化 過過 程程過渡態(tài)過渡態(tài)酶促反應(yīng)總結(jié)：1、為何具有高度催化效率降低反應(yīng)活化能2、如何降低活化能形成中間產(chǎn)物3、如何形成中間產(chǎn)物誘導(dǎo)契合作用1. 習(xí)慣命名法習(xí)慣命名法推薦名稱，推薦名稱，由發(fā)現(xiàn)者命名，常以底物由發(fā)現(xiàn)者命名，常以底物 名、反應(yīng)性質(zhì)以及酶的來源命名；名、反應(yīng)性質(zhì)以及酶的來源命名； 2. 系統(tǒng)命名法系統(tǒng)命名法系統(tǒng)名稱，系統(tǒng)名稱，（1961年國際酶學(xué)委員會年國際酶學(xué)委員會確確 定）每一個酶由下列三種表示：定）每一個酶由下列三種表示： 1）、系統(tǒng)名稱：底物名）、系統(tǒng)名稱：底物名+反應(yīng)性質(zhì)反應(yīng)性質(zhì) 2）、分類編號：）、分類編號：E.C.+四個數(shù)字

7、四個數(shù)字 3）、推薦名：選一個習(xí)慣名（實用、簡單）、推薦名：選一個習(xí)慣名（實用、簡單）（三）（三） 酶的命名酶的命名1、氧化還原酶（、氧化還原酶（1）AH2BABH22、轉(zhuǎn)移酶、轉(zhuǎn)移酶 （2）ABCABC3、水解酶、水解酶 （3）ABH2OAOHBH4、裂合酶（、裂合酶（4）ABAB 5、異構(gòu)酶、異構(gòu)酶 （5）AB 6、連接酶或合成酶（、連接酶或合成酶（6）ABATPABADPPi 或或 ABATPABAMPPPi六大類編號依次為六大類編號依次為 1. 2. 3. 4. 5. 6亞類編號依次為亞類編號依次為 1. 2. 3. 4. 5. 6.亞亞類編號依次為亞亞類編號依次為 1. 2. 3.

8、4. 5. 6.酶的分類酶的分類（四）（四） 酶的分類與編號酶的分類與編號 同工酶同工酶 是同一種屬中由不同基因或等位基因所編碼的多肽鏈是同一種屬中由不同基因或等位基因所編碼的多肽鏈單體、純聚體或雜化體，具有相同的催化功能，但其分子組成、單體、純聚體或雜化體，具有相同的催化功能，但其分子組成、空間構(gòu)象、理化性質(zhì)、生物學(xué)性質(zhì)以及器官分布和細胞內(nèi)定位不空間構(gòu)象、理化性質(zhì)、生物學(xué)性質(zhì)以及器官分布和細胞內(nèi)定位不同的一類酶。同的一類酶。 二、同工酶的概念與特征二、同工酶的概念與特征 心肌梗死和肝病病人心肌梗死和肝病病人 血清血清LDHLDH同工酶譜的變化同工酶譜的變化酶酶活活性性心肌梗死酶譜心肌梗死酶譜

9、正常酶譜正常酶譜肝病酶譜肝病酶譜* *生理及臨床意義生理及臨床意義在代謝調(diào)節(jié)上起著在代謝調(diào)節(jié)上起著重要的作用；重要的作用；用于解釋發(fā)育過程用于解釋發(fā)育過程中階段特有的代謝中階段特有的代謝特征；特征；同工酶譜的改變有同工酶譜的改變有助于對疾病的診斷；助于對疾病的診斷；同工酶可以作為遺同工酶可以作為遺傳標志，用于遺傳傳標志，用于遺傳分析研究。分析研究。 肌酸激酶肌酸激酶 乳酸脫氫酶乳酸脫氫酶 堿性磷酸酶堿性磷酸酶 酸性磷酸酶酸性磷酸酶 -谷氨?；D(zhuǎn)移酶谷氨?；D(zhuǎn)移酶 -淀粉酶淀粉酶 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶糖原磷酸化酶糖原磷酸化酶谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶谷胱甘肽轉(zhuǎn)

10、移酶果糖二磷酸醛縮酶果糖二磷酸醛縮酶-N-乙酰乙酰(基基)-D氨基葡萄糖苷酶氨基葡萄糖苷酶概念：概念：在酶學(xué)分析中作為試劑用于測定化合物濃度或在酶學(xué)分析中作為試劑用于測定化合物濃度或酶活性的酶稱為工具酶。酶活性的酶稱為工具酶。三、工具酶三、工具酶 縮寫符號縮寫符號名稱名稱縮寫符縮寫符號號名稱名稱HDLHDL乳酸脫氫酶乳酸脫氫酶HKHK已糖激酶已糖激酶MDHMDH蘋果酸脫氫酶蘋果酸脫氫酶CKCK肌酸激酶肌酸激酶G-6-PDG-6-PD6-6-磷酸葡萄糖脫氫磷酸葡萄糖脫氫酶酶PKPK丙酮酸激酶丙酮酸激酶GLDHGLDH谷氨酸脫氫酶谷氨酸脫氫酶GKGK甘油激酶甘油激酶GODGOD葡萄糖氧化酶葡萄糖氧

11、化酶LPLLPL脂蛋白脂肪酶脂蛋白脂肪酶CODCOD膽固醇氧化酶膽固醇氧化酶CECE膽固醇酯酶膽固醇酯酶GPDGPD磷酸甘油氧化酶磷酸甘油氧化酶PODPOD過氧化物酶過氧化物酶 常用工具酶的名稱及其縮寫符號常用工具酶的名稱及其縮寫符號（一）工具酶參與的指示反應(yīng)（一）工具酶參與的指示反應(yīng)（共通反應(yīng)途徑）（共通反應(yīng)途徑）葡萄糖氧化酶法：葡萄糖氧化酶法： 準確度和精密度都能達到臨床要求，操作簡便，適準確度和精密度都能達到臨床要求，操作簡便，適用于常規(guī)檢驗。此反應(yīng)稱用于常規(guī)檢驗。此反應(yīng)稱TrinderTrinder反應(yīng)，本法為國內(nèi)推薦反應(yīng)，本法為國內(nèi)推薦方法。方法。葡萄糖葡萄糖+2H2O+O2葡糖酸內(nèi)

12、酯葡糖酸內(nèi)酯+2H2O24-AA+ 酚酚 + H2O2紅色醌類化合物紅色醌類化合物+ H2OPODGOD常見的脫氫酶指示反應(yīng)Lactate + NAD Pyr + NADHLDHL-glutamate + NAD 2-oxoglutarate + NADHGLDHD-glucose 6-phosphate + NADP D-glucono-1,5-lactone 6-phosphate + NADPHG6PD 由于酶作用的特異性，成分復(fù)雜的血清等體液由于酶作用的特異性，成分復(fù)雜的血清等體液樣品往往不需要進行預(yù)處理，通過溫和的酶促反樣品往往不需要進行預(yù)處理，通過溫和的酶促反應(yīng)條件，簡單的實驗程序

13、，即可對各種代謝物濃應(yīng)條件，簡單的實驗程序，即可對各種代謝物濃度進行定量分析。度進行定量分析。終點法終點法動力學(xué)法動力學(xué)法Km值大表值大表示親和程度小，酶的催化活性低示親和程度小，酶的催化活性低; Km值小表值小表示親和程度大示親和程度大,酶的催化活性高酶的催化活性高一、酶活性測定一、酶活性測定( (一一) )定時法定時法（fixed time assay） （兩點法）（兩點法） 測定酶與底物作用反測定酶與底物作用反應(yīng)一定時間后底物或應(yīng)一定時間后底物或產(chǎn)物變化的總量，計產(chǎn)物變化的總量，計算酶促反應(yīng)平均速度算酶促反應(yīng)平均速度。優(yōu)點：比較簡單，優(yōu)點：比較簡單，所用儀器無需恒所用儀器無需恒溫裝置，顯

14、色劑溫裝置，顯色劑的選擇也可不考的選擇也可不考慮對酶活性的影慮對酶活性的影響。響。缺點：無法知道缺點：無法知道是否處于線性期。是否處于線性期。 (二二)連續(xù)監(jiān)測法連續(xù)監(jiān)測法continuous monitoring assay連續(xù)監(jiān)測法的時間連續(xù)監(jiān)測法的時間進程曲線進程曲線連續(xù)監(jiān)測法的種類連續(xù)監(jiān)測法的種類 直接法直接法 是指待測酶酶促反應(yīng)的底物或產(chǎn)物有特征性的理化是指待測酶酶促反應(yīng)的底物或產(chǎn)物有特征性的理化性質(zhì)，然后通過特殊的儀器直接檢測。性質(zhì)，然后通過特殊的儀器直接檢測。 間接法間接法 是指酶促反應(yīng)底物和產(chǎn)物之間沒有特征性的理化性是指酶促反應(yīng)底物和產(chǎn)物之間沒有特征性的理化性質(zhì)，需通過另一個化

15、學(xué)反應(yīng)或生化反應(yīng)，將底物或產(chǎn)物質(zhì)，需通過另一個化學(xué)反應(yīng)或生化反應(yīng)，將底物或產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為有明顯特征理化性質(zhì)的另一個化合物。轉(zhuǎn)化為有明顯特征理化性質(zhì)的另一個化合物。 L-乳酸乳酸 +NAD+ 丙酮酸丙酮酸+ NADH+H+LD 在反應(yīng)過程中，乳酸氧化生成丙酮酸，同時使在反應(yīng)過程中，乳酸氧化生成丙酮酸，同時使NAD+還還原為原為NADH，NADH 在在340nm 處有吸收峰，因此反應(yīng)會處有吸收峰，因此反應(yīng)會引起引起340nm吸光度的增高，并且吸光度增加的速率與樣本吸光度的增高，并且吸光度增加的速率與樣本中活性呈正比關(guān)系。中活性呈正比關(guān)系。直接法測定乳酸脫氫酶的活性直接法測定乳酸脫氫酶的活性 丁酰硫代膽

16、堿 + H20 硫代膽堿 + 丁酸硫代膽堿 + 5,5-巰代-2-硝基苯甲酸 5-巰基-2-硝基苯甲酸(405nm)ChE Ex Ex 為待測酶為待測酶，A A為底物，為底物，B B為中間產(chǎn)物。為中間產(chǎn)物。 A A、B B二物質(zhì)的變化無法直接監(jiān)測，此時可外加第二物質(zhì)的變化無法直接監(jiān)測，此時可外加第二個酶二個酶EiEi( (為指示酶為指示酶) )，其底物為，其底物為B B，反應(yīng)產(chǎn)物，反應(yīng)產(chǎn)物為為C C可直接測定。可直接測定。 酶偶聯(lián)反應(yīng)酶偶聯(lián)反應(yīng) 最簡單的模式為：最簡單的模式為：CBAEiEx 輔助反應(yīng)輔助反應(yīng) 如果一些酶促反應(yīng)找不到合適的指如果一些酶促反應(yīng)找不到合適的指示酶與其直接偶聯(lián)，此時還

17、可在始發(fā)反應(yīng)和指示示酶與其直接偶聯(lián)，此時還可在始發(fā)反應(yīng)和指示反應(yīng)之間加入另一種酶，將二者連在一起，此反反應(yīng)之間加入另一種酶，將二者連在一起，此反應(yīng)稱為輔助反應(yīng)。模式為：應(yīng)稱為輔助反應(yīng)。模式為： 其中，其中，B B、C C均為中間產(chǎn)物，均為中間產(chǎn)物，EaEa、EiEi都為都為工工具酶具酶。最后一個酶稱。最后一個酶稱指示酶指示酶EiEi，其他外加，其他外加的酶都為輔助酶（的酶都為輔助酶（EaEa）。）。DCBAEiEaEx酶偶聯(lián)反應(yīng)原理酶偶聯(lián)反應(yīng)原理對酶偶聯(lián)反應(yīng)的要求對酶偶聯(lián)反應(yīng)的要求 方法條件的選擇方法條件的選擇 盡可能采用連續(xù)監(jiān)測法；減盡可能采用連續(xù)監(jiān)測法；減少步驟少步驟, ,化學(xué)試劑有一定純

18、度化學(xué)試劑有一定純度, ,雙蒸水雙蒸水, ,使用雙試劑。使用雙試劑。 測定參數(shù)的設(shè)置測定參數(shù)的設(shè)置 方法類型、波長、樣品量與方法類型、波長、樣品量與試劑量、稀釋水量、試劑吸光度上下限、空白速率、試劑量、稀釋水量、試劑吸光度上下限、空白速率、反應(yīng)孵育時間、延遲反應(yīng)孵育時間、延遲, ,監(jiān)測時間、底物耗盡限額、監(jiān)測時間、底物耗盡限額、線性范圍及計算因子線性范圍及計算因子F F值。值。 標本的采集、運輸與保存標本的采集、運輸與保存 影響因素：溶血、抗凝劑、溫度等。影響因素：溶血、抗凝劑、溫度等。 干擾因素的控制干擾因素的控制 反應(yīng)干擾；污染；底物自行反應(yīng)干擾；污染；底物自行發(fā)生反應(yīng)。發(fā)生反應(yīng)。(四四)

19、血清酶活性濃度測定條件的選擇血清酶活性濃度測定條件的選擇 標本的采集、運輸與保存標本的采集、運輸與保存溶血：細胞內(nèi)酶而言，細胞內(nèi)外濃度差異大；所以溶血：細胞內(nèi)酶而言，細胞內(nèi)外濃度差異大；所以應(yīng)及時進行分離，應(yīng)及時進行分離，靜脈采血后應(yīng)在靜脈采血后應(yīng)在1 12h2h內(nèi)分離血清內(nèi)分離血清?？鼓齽豪貌菟猁}、枸櫞酸鹽、抗凝劑：利用草酸鹽、枸櫞酸鹽、EDTAEDTA抗凝的血漿抗凝的血漿一般不用作酶活性測定；肝素對一般不用作酶活性測定；肝素對ALTALT、ASTAST、CKCK、LDLD、ACPACP檢測均無影響，可用于急診；臨床多用檢測均無影響，可用于急診；臨床多用血清血清為首為首選測定標本。選測定

20、標本。溫度：大部分酶在低溫中比較穩(wěn)定，一般在血清分離溫度：大部分酶在低溫中比較穩(wěn)定，一般在血清分離當天測定，否則應(yīng)放冰箱冷藏；當天測定，否則應(yīng)放冰箱冷藏；通常在通常在0 04 4 C C下使下使用、處理及保存用、處理及保存，除了一些冷變性的酶；液氮可作為，除了一些冷變性的酶；液氮可作為酶學(xué)測定時血清標本及質(zhì)控長期保存的方法。酶學(xué)測定時血清標本及質(zhì)控長期保存的方法。 慣用單位慣用單位 慣用單位是酶活性測定方法的建立者所規(guī)慣用單位是酶活性測定方法的建立者所規(guī)定的單位。由于單位定義不同，參考范圍差別很大，定的單位。由于單位定義不同，參考范圍差別很大，難以進行比較。難以進行比較。國際單位（國際單位（I

21、UIU） 在特定的條件下，每分鐘轉(zhuǎn)化在特定的條件下，每分鐘轉(zhuǎn)化1 1 molmol底物的酶量為一個國際單位。底物的酶量為一個國際單位。 以以IUIU表示，表示，1IU=11IU=1 mol/minmol/min。 KatalKatal單位單位 在規(guī)定條件下，每秒鐘轉(zhuǎn)化在規(guī)定條件下，每秒鐘轉(zhuǎn)化1mol1mol底物的酶底物的酶量為量為1kat1kat， 1kat=1mol/s1kat=1mol/s。常用單位為。常用單位為 katalkatal或或 nkatalnkatal。 KatKat與與IUIU的換算關(guān)系為：的換算關(guān)系為： 1IU=11IU=1 mol/min=16.67nmol/s= 16.

22、67nkatalmol/min=16.67nmol/s= 16.67nkatal（六）酶活性濃度的單位（六）酶活性濃度的單位 1.1.酶活性單位酶活性單位2.2.酶活性濃度單位酶活性濃度單位 臨床上酶活性濃度采用每單位體積（升）所含的酶臨床上酶活性濃度采用每單位體積（升）所含的酶活性單位數(shù)表示?；钚詥挝粩?shù)表示。U/LU/L 酶活性濃度單位的計算酶活性濃度單位的計算 連續(xù)監(jiān)測法根據(jù)摩爾吸光系數(shù)進行酶活性濃度的計連續(xù)監(jiān)測法根據(jù)摩爾吸光系數(shù)進行酶活性濃度的計算。算。公式如下：公式如下：LvVALU610min/LvVALU610min/FALUmin/LvVF610(七)、系數(shù)K值的計算及應(yīng)用系數(shù)系

23、數(shù)K K值的種類值的種類LvVF610LvVF610二、酶的質(zhì)量測定二、酶的質(zhì)量測定 利用酶蛋白分子具有抗原性的特點，可以利用酶蛋白分子具有抗原性的特點，可以通過抗原抗體反應(yīng)的原理直接測定酶的質(zhì)通過抗原抗體反應(yīng)的原理直接測定酶的質(zhì)量，報告方式用質(zhì)量濃度單位。量，報告方式用質(zhì)量濃度單位。 如用免疫學(xué)方法測定如用免疫學(xué)方法測定CK-MBCK-MB質(zhì)量質(zhì)量，結(jié)果用，結(jié)果用ngng/ml /ml 或或 ugug/L/L報告。報告。方法方法同工酶同工酶( (或亞型或亞型) )的性質(zhì)的性質(zhì)差異差異同工酶、亞型同工酶、亞型電泳法電泳法電荷不同電荷不同所有同工酶、亞型所有同工酶、亞型層析法層析法( (離子交換

24、層析、親和離子交換層析、親和層析層析) )電荷不同電荷不同CKCK，LDLD，ALPALP免疫分析法免疫分析法免疫抑制法免疫抑制法特異性抗體反應(yīng)性不同特異性抗體反應(yīng)性不同CKCK、LDLD、ACPACP免疫化學(xué)測定免疫化學(xué)測定法法特異性抗體反應(yīng)性不同特異性抗體反應(yīng)性不同CKCK、LDLD、ACPACP、ALPALP、AMYAMY動力學(xué)分析法動力學(xué)分析法 底物特異性分析法底物特異性分析法底物底物KmKm、親和力不同、親和力不同ACP ACP 、CKCK、LDLD（ - -羥丁酸）羥丁酸）抑制劑分析法抑制劑分析法對小分子量的抑制劑的對小分子量的抑制劑的特異性抑制不同特異性抑制不同LDLD（草酸）、

25、（草酸）、ACPACP（L-L-酒酒石酸）、石酸）、ALPALP（L-L-苯丙氨苯丙氨酸）酸） pHpH分析法分析法最適最適pHpH不同不同ASTAST熱失活分析法熱失活分析法熱穩(wěn)定性不同熱穩(wěn)定性不同ALPALP蛋白酶水解法蛋白酶水解法對蛋白水解酶敏感度不對蛋白水解酶敏感度不同同LDLD、ASTAST三、同工酶檢測三、同工酶檢測 （一）（一） 電電 泳泳 法法 （二）層析法（二）層析法 （三）免疫分析法（三）免疫分析法 （四）同工酶的其他分析方法（四）同工酶的其他分析方法 “血清酶血清酶”是指存在于血清中的酶，是指存在于血清中的酶， 而非血清特定產(chǎn)生的。而非血清特定產(chǎn)生的。一、血清酶一、血清酶

26、（一）血清酶的來源和去路（一）血清酶的來源和去路 名稱名稱 血漿特異酶血漿特異酶 非血漿特異酶非血漿特異酶 外分泌酶外分泌酶細胞酶細胞酶一般代謝酶一般代謝酶組織專一酶組織專一酶來源來源肝肝消化腺或其它消化腺或其它外分泌腺外分泌腺 各組織器官各組織器官 （無器官專（無器官專一性）一性） 肝肝 （有器官（有器官專一性）專一性） 種類種類凝血酶原、凝血酶原、因因子、子、因子、纖因子、纖溶酶原、溶酶原、ChEChE、CERCER、LCATLCAT、脂蛋、脂蛋白脂肪酶等白脂肪酶等 胰淀粉酶、胰胰淀粉酶、胰脂肪酶、胰蛋脂肪酶、胰蛋白酶、白酶、ACPACP、ALPALP等等LDHLDH、ASTAST、ALT

27、ALT、CKCK等等 OCTOCT等等 1.1.血清酶的來源血清酶的來源 2.2.血清酶的去路血清酶的去路 (1(1）血清酶的半壽期）血清酶的半壽期 酶失活至原來活性一半時所需時間稱為酶失活至原來活性一半時所需時間稱為酶的半壽期酶的半壽期。一般。一般以半壽期來代表酶從血中清除的快慢。以半壽期來代表酶從血中清除的快慢。 血清酶甚至同工酶之間半壽期差別很大。這些有助于了解同血清酶甚至同工酶之間半壽期差別很大。這些有助于了解同一疾病不同酶升高持續(xù)時間的差異，半壽期長的酶，在血清中一疾病不同酶升高持續(xù)時間的差異，半壽期長的酶，在血清中持續(xù)時間長。持續(xù)時間長。1 1性別性別: :多數(shù)血清酶的男女性別差異

28、不大，但少數(shù)酶如多數(shù)血清酶的男女性別差異不大，但少數(shù)酶如CK、 ALP及及-GT等有性別差異，男性高于女性。等有性別差異，男性高于女性。 2 2年齡年齡: :血清中有些酶的活性常隨年齡而變化。最明顯的一個血清中有些酶的活性常隨年齡而變化。最明顯的一個 例子是例子是ALP 3 3進食進食: :血清中大多數(shù)酶不受進食的影響，故測定酶活性不一血清中大多數(shù)酶不受進食的影響，故測定酶活性不一 定需要空腹采血。高脂、高糖飲食后血清定需要空腹采血。高脂、高糖飲食后血清ALP活性升高?；钚陨?。 4 4運動運動: :激烈的肌肉運動可使血清中多種酶，如激烈的肌肉運動可使血清中多種酶，如CK等活性升高。等活性升高

29、。 5 5妊娠妊娠: :妊娠胎盤組織可分泌一些酶進入母體血液，如耐熱妊娠胎盤組織可分泌一些酶進入母體血液，如耐熱ALP、 LD等，引起血清中這些酶升高等，引起血清中這些酶升高。 6 6其他其他: :血清中有些酶與同工酶有種族差異血清中有些酶與同工酶有種族差異. ( (二二) )、血清酶的生理差異、血清酶的生理差異 血清酶的失活和排泄血清酶的失活和排泄 研究表明酶主要是在血管內(nèi)失活或分解的，酶的清研究表明酶主要是在血管內(nèi)失活或分解的，酶的清除與血漿蛋白的清除途徑并不完全相同。血清酶經(jīng)除與血漿蛋白的清除途徑并不完全相同。血清酶經(jīng)蛋白蛋白酶酶水解而產(chǎn)生的低分子多肽或氨基酸可經(jīng)水解而產(chǎn)生的低分子多肽或

30、氨基酸可經(jīng)小腸粘膜小腸粘膜排至排至腸腔腸腔，再徹底分解成氨基酸后重吸收，其中大部分氨基，再徹底分解成氨基酸后重吸收，其中大部分氨基酸可被組織利用，不能利用的氨基酸可經(jīng)尿排出體外。酸可被組織利用，不能利用的氨基酸可經(jīng)尿排出體外。 ( (三三) )、血清酶變化的病理機制、血清酶變化的病理機制 正常情況下血清酶活性相對恒定。但在一些正常情況下血清酶活性相對恒定。但在一些病理情況下，如病理情況下，如細胞膜通透性增加或細胞壞死；細胞膜通透性增加或細胞壞死；細胞內(nèi)酶合成增加；酶排泄障礙；惡性腫瘤異位細胞內(nèi)酶合成增加；酶排泄障礙；惡性腫瘤異位分泌；酶合成障礙；中毒及遺傳缺陷等，常導(dǎo)致分泌；酶合成障礙；中毒及

31、遺傳缺陷等，常導(dǎo)致血清中酶活性的改變。血清中酶活性的改變。 (1)(1)酶合成異常酶合成異常 1 1合成減少合成減少 肝損害時肝損害時合成酶的能力受損合成酶的能力受損，血清中相應(yīng)酶減少，慢性，血清中相應(yīng)酶減少，慢性肝病時更為顯著。肝病時更為顯著。 如肝病時因如肝病時因ChEChE、LCATLCAT合成的減少而使血合成的減少而使血清中酶活性濃度降低；清中酶活性濃度降低； 酶基因變異酶基因變異，也可引起酶合成減少，如肝豆狀核變性，也可引起酶合成減少，如肝豆狀核變性 (Wilson(Wilson病病) ) 患者，血中銅氧化酶可明顯下降?；颊撸秀~氧化酶可明顯下降。 2. 合成增多合成增多 細胞對血

32、清酶的合成增加或酶的誘導(dǎo)作用是血清酶細胞對血清酶的合成增加或酶的誘導(dǎo)作用是血清酶活性升高的重要原因?；钚陨叩闹匾?。 增生性疾病如增生性疾病如骨骼疾病骨骼疾病時，可因成骨細胞增生，合成時，可因成骨細胞增生，合成分泌更多的分泌更多的ALPALP而使血清中此酶升高。一部分惡性腫瘤患而使血清中此酶升高。一部分惡性腫瘤患者血中酶升高有可能與腫瘤細胞中酶的合成增加有關(guān)，者血中酶升高有可能與腫瘤細胞中酶的合成增加有關(guān)，如如前列腺癌細胞前列腺癌細胞可產(chǎn)生大量可產(chǎn)生大量ACPACP。(2)(2)酶釋放增加酶釋放增加 酶從病變酶從病變( (或損傷或損傷) )細胞中釋放增加是疾病時大多數(shù)血清酶增細胞中釋放增加

33、是疾病時大多數(shù)血清酶增高的主要機制高的主要機制。研究表明，炎癥、缺血缺氧、能源供應(yīng)缺乏、。研究表明，炎癥、缺血缺氧、能源供應(yīng)缺乏、壞死和創(chuàng)傷等是細胞釋放大分子酶蛋白的重要原因。細胞酶的釋壞死和創(chuàng)傷等是細胞釋放大分子酶蛋白的重要原因。細胞酶的釋放量還受下述一些因素影響：放量還受下述一些因素影響： 1 1細胞內(nèi)外酶濃度的差異細胞內(nèi)外酶濃度的差異 2 2酶的相對分子量酶的相對分子量 3 3酶的組織分布酶的組織分布 4 4酶在細胞內(nèi)的定位和存在形式酶在細胞內(nèi)的定位和存在形式(3)(3)酶排出異常酶排出異常 約有約有2424的血清的血清AMYAMY由由腎臟腎臟排出，腎功能減退時，血清排出，腎功能減退時，

34、血清AMYAMY活性升高，可能因酶排泄障礙而在血液中滯留所致?；钚陨?，可能因酶排泄障礙而在血液中滯留所致。 膽道膽道梗阻時，血清梗阻時，血清ALPALP升高的原因是梗阻區(qū)升高的原因是梗阻區(qū)ALPALP合成加強，合成加強，ALPALP排泄受阻而逆流人血。排泄受阻而逆流人血。（三）血清酶的臨床應(yīng)用（三）血清酶的臨床應(yīng)用五、同工酶的診斷價值五、同工酶的診斷價值 ( (一一) )轉(zhuǎn)氨酶及其同工酶轉(zhuǎn)氨酶及其同工酶 生化特性生化特性 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（谷丙）：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（谷丙）：ALT(GPT) ALT(GPT) （天）門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（谷草）：（天）門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（谷草）：AST(GOT)

35、AST(GOT) 組織分布組織分布ASTAST: :主要分布于主要分布于心心、肝、肝、 骨胳肌、腎。骨胳肌、腎。同工酶：同工酶：ASTsASTs；ASTmASTm正常血清主要為正常血清主要為ASTsASTs，當細胞受到輕度損傷時，當細胞受到輕度損傷時ASTsASTs 顯著升高。顯著升高。若血清中出現(xiàn)大量的若血清中出現(xiàn)大量的ASTmASTm，則表示細胞嚴重受損。，則表示細胞嚴重受損。ALTALT：主要分布于：主要分布于肝肝、腎、心、骨胳肌。、腎、心、骨胳肌。有兩種同工酶：有兩種同工酶：ALTsALTs、ALTmALTm，反映肝損傷靈敏指標反映肝損傷靈敏指標. .轉(zhuǎn)氨酶的測定方法轉(zhuǎn)氨酶的測定方法

36、目前，國內(nèi)外實驗室多采用連續(xù)監(jiān)測法進行測目前，國內(nèi)外實驗室多采用連續(xù)監(jiān)測法進行測定。定。丙酮酮L谷氨氨L酮戊二酸ALT 丙氨酸LNADLHNADHLLD乳酸丙酮酸草酰乙酸谷氨酸酮戊二酸門冬氨酸 LLLAST NADLHNADHLMD蘋果酸草酰乙酸ALTALT速率法測定中酶偶聯(lián)反應(yīng)式為：速率法測定中酶偶聯(lián)反應(yīng)式為：ASTAST速率法測定中酶偶聯(lián)反應(yīng)式速率法測定中酶偶聯(lián)反應(yīng)式為：為： 轉(zhuǎn)氨酶測定的臨床意義轉(zhuǎn)氨酶測定的臨床意義急性肝損害急性肝損害: :ALTALT的升高常與病情輕重相平行，為判斷急性肝的升高常與病情輕重相平行，為判斷急性肝炎恢復(fù)的指標。是肝壞死的前兆。炎恢復(fù)的指標。是肝壞死的前兆。心

37、臟、骨骼肌等組織受損、肝膽疾病時心臟、骨骼肌等組織受損、肝膽疾病時血清血清ALTALT水平也可出現(xiàn)不同程度的升高。水平也可出現(xiàn)不同程度的升高。心肌、肝臟損傷血清心肌、肝臟損傷血清ASTAST會升高。腎臟或胰腺細胞損傷，血會升高。腎臟或胰腺細胞損傷，血清清ASTAST也會升高。也會升高。在在AMIAMI患者胸前區(qū)疼痛發(fā)作后患者胸前區(qū)疼痛發(fā)作后6 68h8h，血清，血清ASTAST可明顯升可明顯升高，發(fā)病后高，發(fā)病后484860h60h達峰值，達峰值，4 45 5天可降至正常。天可降至正常。轉(zhuǎn)氨酶轉(zhuǎn)氨酶輕度增加輕度增加(1(13ULN) 3ULN) ：胰腺炎、酒精性脂肪肝、肝硬化、肉芽：胰腺炎、酒

38、精性脂肪肝、肝硬化、肉芽腫、腫瘤等。腫、腫瘤等。中度增加中度增加(3(310ULN)10ULN)的疾?。簜魅拘粤馨驮龆喟Y、慢性活動性的疾?。簜魅拘粤馨驮龆喟Y、慢性活動性肝炎、肝外膽道梗塞、心肌梗死等。肝炎、肝外膽道梗塞、心肌梗死等。重度增加重度增加(20ULN)(20ULN)的疾?。翰《拘愿窝?、中毒性肝炎。的疾?。翰《拘愿窝?、中毒性肝炎。 ( (二）肌酸激酶及其同工酶二）肌酸激酶及其同工酶 生化特性生化特性由兩種不同亞基（由兩種不同亞基（M M和和B B亞基）組成的二聚體。亞基）組成的二聚體。同工酶分：同工酶分：CK-BBCK-BB（CKCK1 1）、）、CK-MBCK-MB（CKCK2 2）

39、、）、CK-CK-MMMM（CKCK3 3）和）和CKCKMt(CKMt(CK4 4) )。組織分布組織分布 廣泛分布于全身，廣泛分布于全身，骨骼肌骨骼肌含量最高，其次含量最高，其次是心肌和腦組織。是心肌和腦組織。p CK-BBCK-BB在腦和脊髓內(nèi)含量最高稱為腦型同工在腦和脊髓內(nèi)含量最高稱為腦型同工酶。酶。 p 主要存在于心肌細胞內(nèi)稱為主要存在于心肌細胞內(nèi)稱為心型心型同工同工酶。酶。 分為分為CK-MB1CK-MB2CK-MB1CK-MB2亞型。亞型。p 骨骼肌中幾乎全部為骨骼肌中幾乎全部為CK-MMCK-MM，稱為肌型同工，稱為肌型同工酶。分為酶。分為CK-MM1CK-MM2CK-MM3C

40、K-MM1CK-MM2CK-MM3亞型。亞型。CKCK的測定方法的測定方法 酶偶聯(lián)法酶偶聯(lián)法 HNADPHPDGNADPADPHKATPATPCKADP磷酸葡萄糖內(nèi)酯葡萄糖磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖肌酸磷酸肌酸6666CKCK及其同工酶測定的臨床意義及其同工酶測定的臨床意義主要用于主要用于早期診斷早期診斷AMIAMI（1 1） 血清血清CKCK總活力總活力 AMIAMI后后2 24h4h開始升高，開始升高，101024h24h達峰值，達峰值，3 34 4天恢復(fù)正常。天恢復(fù)正常。（2 2）CKCK同工酶及亞型同工酶及亞型 AMIAMI胸痛發(fā)作后，血清胸痛發(fā)作后，血清CK-MBCK-MB的上升先于其的上

41、升先于其CKCK總活性，總活性，CK- CK- MB/CKMB/CK0.030.03可診斷為可診斷為AMIAMI。 CK-MMCK-MM亞型的測定：以亞型的測定：以CK-MMCK-MM3 3/CK-MM/CK-MM1 11.01.0作為診斷作為診斷AMIAMI的的標準。標準。 CK-MBCK-MB2 2亞型：在亞型：在AMIAMI早期診斷和判斷有無再灌注上同樣有很早期診斷和判斷有無再灌注上同樣有很高的靈敏度和特異性。一般以高的靈敏度和特異性。一般以CK-MBCK-MB2 21.9U/L1.9U/L或或CK-MBCK-MB2 2/CK-MB/CK-MB1 11.51.5作為作為AMIAMI的診斷

42、標準。的診斷標準。 （三）乳酸脫氫酶及其同工酶（三）乳酸脫氫酶及其同工酶 生化特性生化特性 乳酸脫氫酶是糖酵解途徑中的一種重要酶。乳酸脫氫酶是糖酵解途徑中的一種重要酶。LDLD除催化除催化L-L-乳酸外還可催化乳酸外還可催化-羥丁酸羥丁酸、-酮丁酸進行脫氫反應(yīng)。酮丁酸進行脫氫反應(yīng)。 組織分布組織分布 LDLD位于細胞質(zhì)中，是一種糖酵解酶。位于細胞質(zhì)中，是一種糖酵解酶。LDLD是是由由H H（心型）和（心型）和M M型（肌型）兩種不同亞基組成的四聚體。型（肌型）兩種不同亞基組成的四聚體。5 5種同工酶種同工酶(LD1,LD2,LD3,LD4,LD5)(LD1,LD2,LD3,LD4,LD5)。

43、LDLD的測定方法的測定方法目前多用連續(xù)監(jiān)測法。目前多用連續(xù)監(jiān)測法。 以乳酸為底物（反應(yīng)方向以乳酸為底物（反應(yīng)方向L LP P）的順向反應(yīng)（稱）的順向反應(yīng)（稱LD-LLD-L法）。為法）。為IFCCIFCC參考方法（參考方法（pHpH為為9.49.4）。通過在）。通過在340nm340nm波波長處監(jiān)測長處監(jiān)測NADNAD+ + 還原成還原成NADHNADH吸光度的增加速率而計算吸光度的增加速率而計算LDLD活性。活性。 HNADHNADLLD丙酮酸乳酸)(LDLD同工酶的測定方法同工酶的測定方法 常用電泳法、免疫沉淀法和免疫抑制法等。目常用電泳法、免疫沉淀法和免疫抑制法等。目前以瓊脂糖凝膠電泳

44、法更多用。一般成年人存在如前以瓊脂糖凝膠電泳法更多用。一般成年人存在如下規(guī)律：下規(guī)律：LDLD2 2LDLD1 1LDLD3 3LDLD4 4LDLD5 5，部分正常兒童血，部分正常兒童血中可見中可見LDLD1 1LDLD2 2。LDLD及其同工酶測定的臨床意義及其同工酶測定的臨床意義心肌梗死心肌梗死 LDLD心肌酶中升高最晚，持續(xù)時間長。心肌酶中升高最晚，持續(xù)時間長。急性肝炎、慢性活動性肝炎和肝癌時，急性肝炎、慢性活動性肝炎和肝癌時，LDLD明顯明顯升高。升高。LDLD同工酶主要用于同工酶主要用于AMIAMI和肝病的診斷和肝病的診斷AMI: LDAMI: LD1 1升高最為顯著，升高最為顯著

45、，LDLD1 1/LD/LD2 21 1，視為診斷，視為診斷AMIAMI的一個特異指標。的一個特異指標。肝膽疾病肝膽疾病: LD: LD5 5升高常表示有肝細胞壞死。肝細胞升高常表示有肝細胞壞死。肝細胞性黃疸時性黃疸時LDLD5 5LDLD4 4，阻塞性黃疽時，阻塞性黃疽時LDLD4 4LDLD5 5。腫瘤腫瘤: : 肝癌時可伴有肝癌時可伴有LDLD4 4和和LDLD5 5明顯增高；白血病、明顯增高；白血病、膠原病時以膠原病時以LDLD3 3、LDLD4 4增高為主。增高為主。惡性貧血惡性貧血: : AMI時血清酶學(xué)變化時血清酶學(xué)變化 酶酶 開始升高時開始升高時間（間（h） 達峰值時間達峰值時

46、間（h） 恢復(fù)正常時恢復(fù)正常時間（間（h） CK 38 1036 7296 CK-MB 36 1224 4872 AST 612 2448 35天天 LD 1224 4872 1012天天 LD1 1012 4872 1012天天 （四）（四） - -谷氨酰轉(zhuǎn)移酶及其同工酶谷氨酰轉(zhuǎn)移酶及其同工酶 生化特性生化特性 -GT-GT或或GGT GGT 是一種含巰基的線粒體酶。是一種含巰基的線粒體酶。組織分布組織分布 分布于腎、胰、肺、肝、腸和前列腺等多種組分布于腎、胰、肺、肝、腸和前列腺等多種組織中，其中以織中，其中以腎臟腎臟含量最多。含量最多。 血清中血清中GGTGGT主要來源于肝膽系統(tǒng)。主要來源

47、于肝膽系統(tǒng)。GGTGGT測定的臨床意義測定的臨床意義( (1)1)膽道疾病膽道疾病 膽石癥、膽道炎癥、肝外梗阻等升高明顯。膽石癥、膽道炎癥、肝外梗阻等升高明顯。(2)(2)肝實質(zhì)疾病肝實質(zhì)疾病 肝炎、脂肪肝、肝硬化時中度升高。肝炎、脂肪肝、肝硬化時中度升高。 慢性肝炎活動期慢性肝炎活動期GGTGGT多增高，非活動期則多正常。多增高，非活動期則多正常。 原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性肝癌時不同程度的增高。原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性肝癌時不同程度的增高。(3)(3)誘導(dǎo)作用誘導(dǎo)作用 對乙醇性中毒的判斷有一定的價值。對乙醇性中毒的判斷有一定的價值。 長期接受巴比妥類藥物、含雌激素的避孕藥者升長期接受巴比妥類藥物、含雌激素的避孕

48、藥者升高。高。 酶學(xué)指酶學(xué)指標標 肝臟疾病肝臟疾病ALTASTGGTALP急性病毒性肝炎急性病毒性肝炎 （輕（輕-中）中） （重）（重）酒精性或藥物性肝炎酒精性或藥物性肝炎- N或或慢性肝細胞性疾病慢性肝細胞性疾病N或或N或或肝硬化肝硬化N或或N或或N或或N或或膽汁淤積性疾病膽汁淤積性疾病 各型肝膽疾病時常用酶學(xué)指標的變化概況各型肝膽疾病時常用酶學(xué)指標的變化概況檢測項目檢測項目應(yīng)應(yīng) 用用肝病有關(guān)酶肝病有關(guān)酶ALTALT與與ASTAST肝細胞損害肝細胞損害 輕、中度損傷輕、中度損傷ALTALT升高為主，重度損傷以升高為主，重度損傷以ASTAST升高明顯。升高明顯。ALPALP與與GGTGGT膽汁淤滯，在膽汁排泄受阻的肝膽疾病時升高。骨疾病膽汁淤滯，在膽汁排泄受阻的肝膽疾病時升高。骨疾病時升高。時升高。 MAO MAO 肝臟纖維化，肝纖維化病變及肝硬化時可升高。肝臟纖維化，肝纖維化病變及肝硬化時可升高。 ChEChE 肝實質(zhì)細胞功能，肝實質(zhì)損害致肝功能不全時，肝實