《獸醫(yī)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)》(1)

1、實(shí)驗(yàn)十七1.準(zhǔn)備工作及細(xì)菌活菌計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)2.抗菌藥物體外抗菌活性的檢測(cè)最小抑菌濃度（MIC）的測(cè)定整理課件準(zhǔn)備工作及細(xì)菌活菌計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)整理課件實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)：包括細(xì)菌的分離、培養(yǎng)，含菌量的測(cè)定；2.掌握細(xì)菌分離培養(yǎng)過(guò)程中的無(wú)菌操作。整理課件實(shí)驗(yàn)器材、培養(yǎng)基、菌種 、藥品【器材】96孔板、移液槍1mL、200L各一支、 1mL、200l、槍頭各一盒、吸耳球1個(gè)、小試管、錐形瓶、容量瓶、小藥瓶加塞、試管架、一次性平皿、接種棒、酒精燈、分析天平、自動(dòng)高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、37恒溫培養(yǎng)箱?！九囵B(yǎng)基】MH肉湯培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂、LB肉湯【菌種 】大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌ATCC25922【藥品 】 阿米卡

2、星、氨芐西林、四環(huán)素、粘菌素整理課件 實(shí)驗(yàn)步驟1.試驗(yàn)前的準(zhǔn)備器具的清洗、高壓滅菌器具的清洗、高壓滅菌將試管、錐形瓶、槍頭等實(shí)驗(yàn)器具洗凈、包好，121、20min高壓滅菌，放烘箱烘干備用。96孔細(xì)胞培養(yǎng)板（不可高壓滅菌）用洗液浸泡超聲、沖洗干凈后，泡75%酒精備用。（用前取出放超凈臺(tái)吹干，紫外殺菌2h以上）整理課件 1.磷酸緩沖液（PBS）的配制2.3.4.試劑的配制試劑的配制整理課件藥物原液的配置及保存藥物原液的配置及保存各種抗菌藥是用蒸餾水或不同pH值的PBS，稀釋至所需濃度，抗生素過(guò)濾除菌(化學(xué)合成藥高壓滅菌)，分裝備用。整理課件整理課件菌液的配制菌液的配制挑取大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌ATCC25

3、922 ，放入LB營(yíng)養(yǎng)肉湯37培養(yǎng)1624h，第2天在麥康凱瓊脂平板上劃線培養(yǎng)1624h，第3天挑單個(gè)菌落接種于2mL LB營(yíng)養(yǎng)肉湯中，溫箱培養(yǎng)1624h，制得供試菌液。整理課件2. 細(xì)菌含量的測(cè)定（活菌平板計(jì)數(shù)法）用生理鹽水將上述菌液作10倍梯度稀釋（菌液生理鹽水）菌液菌液稀釋比例： 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7整理課件取105、106、107三個(gè)滴度的菌液各滴在瓊脂平板中央，輕輕拍打，使其均勻攤開(kāi)，不要接觸平皿邊緣，每個(gè)梯度做2個(gè)平板，放入37 恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)1624h。計(jì)算菌落數(shù)，挑選平板上生長(zhǎng)30300個(gè)菌落的計(jì)數(shù)，數(shù)兩個(gè)平板取其平均值為細(xì)菌濃度，要求生長(zhǎng)濁度達(dá)9108/mL。計(jì)算示例：106兩個(gè)平板上生長(zhǎng)菌落數(shù)分別為68、70個(gè)，平均69個(gè)，則1mL含活菌數(shù)690106/mL，即6.9108/mL。將供試菌液（3步制得）用肉湯作